弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达水平及意义

卢 辉 孙亚琼 张 倩

弥漫型大B细胞淋巴瘤属于临床常见的侵袭性淋巴瘤，占到成人非霍奇金淋巴瘤的1/3，近年来其发病率呈现升高趋势。弥漫型大B细胞淋巴瘤具有独特的临床病理学表现，因此早期诊断极为困难，患者预后较差[1]。近年来研究显示细胞凋亡调控异常是肿瘤发生的病理基础，因此临床对于肿瘤细胞凋亡的相关研究日益增多。组蛋白甲基转移酶EZH2同弥漫型大B细胞淋巴瘤的发生具有一定的关联，通过应用EZH2抑制剂可以在一定程度抑制肿瘤细胞增殖。目前人类凋亡抑制蛋白家族中的X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白属于作用较强的人类凋亡抑制蛋白，前者可以应用Caspase蛋白酶激活与核因子途径激活发挥抗凋亡作用，后者则具有肿瘤特异性，其过度表达可以抑制或者阻断细胞凋亡过程，同肿瘤发生和发展关系密切[2]。本研究分析了弥漫型大B细胞淋巴瘤Zeste同源物增强子2(EZH2)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白表达水平，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2020年2月我院保存的弥漫型大B细胞淋巴瘤组织92例作为观察组，纳入标准：①均经病理学确诊；②临床资料保存完整；③未行抗肿瘤治疗。排除标准：合并有其他恶性肿瘤。同时选取反应性增生淋巴结组织50例作为对照组。2组临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 2组一般资料比较

1.2 实验方法

将获取的标本在10%中性甲醛溶液中固定48 h，石蜡包埋4 μm厚度切片，采用免疫组织化学法染色，采用Roche Benchmark XT全自动免疫组化染色。严格按照试剂盒说明书操作，试剂由深圳晶美生物技术有限公司提供，由已知EZH2、XIAP、Survivin阳性切片作为阳性对照，以PBs代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

对染色强度和阳性细胞比例进行评分，染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例：阳性细胞比例≤10%为1分，>10%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。染色强度和阳性细胞比例得分之积≥6分为阳性表达。

1.4 统计学处理

数据分析统计采用SPSS 19.0软件，计量资料采用均数±标准差表示，2组间比较使用t检验，计数资料比较使用卡方检验，相关性采用Spearman秩相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 观察组和对照组EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达比较

观察组EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 观察组和对照组EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达比较(例，%)

2.2 EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达与弥漫型大B细胞淋巴瘤临床病理特征关系

弥漫型大B细胞淋巴瘤临床分期Ⅲ～Ⅳ期EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达阳性率明显高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，见表3。

表3 EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达与临床病理特征关系(例，%)

2.3 相关性分析

EZH2与XIAP、Survivin蛋白表达呈正相关(γ=0.547、0.360，P均<0.05)，XIAP与Survivin蛋白表达呈正相关(γ=0.581，P<0.05)。见表4。

表4 相关性分析/例

3 讨论

淋巴瘤属于血液系统常见的恶性肿瘤之一，临床主要分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，后者又按照细胞起源分为T细胞非霍奇金淋巴瘤与B细胞非霍奇金淋巴瘤，以B细胞非霍奇金淋巴瘤最为常见，近年来随着工业化加速以及环境恶化，其发病率呈现升高趋势[3]。弥漫性大B细胞淋巴瘤目前在发展中国家占到所有淋巴瘤的3/5，属于高度异质性B细胞来源的恶性肿瘤，呈现弥漫性增生，由于肿瘤细胞核超过正常的巨噬细胞核，因此侵袭性高，但是经过化疗治疗近2/5患者可以得到有效缓解，但是仍会有部分患者发生复发和转移[4]。近年来临床对于肿瘤分子生物学研究越来越多，大量的研究认为细胞增殖和凋亡之间失去平衡是导致恶性肿瘤发生和发展的重要因素，两者之间处于平衡状态维持人体正常的发育和内环境稳定，目前细胞的凋亡调控主要包括Caspase依赖和非Caspase依赖途径，属于复杂的网络体系，包含了体内促进凋亡因子和抑制凋亡因子等多种细胞因子参与的过程，因此对于肿瘤凋亡基因和相关蛋白产物的研究可能成为临床肿瘤生物靶向治疗的新方向[5-6]。

本研究分析了弥漫型大B细胞淋巴瘤Zeste同源物增强子2(EZH2)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白表达水平。XIAP属于包含了497个氨基酸蛋白质，最早在人体胚胎组织中克隆出来，一方面能够通过Caspase蛋白酶激活级联反应对细胞的凋亡过程产生抑制作用，另一方面还可以通过核因子2KB途径激活抗凋亡基因表达过程参与信号转导产生抗凋亡作用[7]。此外XIAP还能够抑制线粒体途径抑制细胞凋亡过程，通过特异性结合过程导致下游Caspase蛋白无法激活阻断了线粒体凋亡的过程[8]。有报道指出在细胞有丝分裂过程中XIAP可以在细胞周期检查点激酶发挥作用形成复合物，与浓缩染色体排列在一起后就会发生细胞核膜降解，因此XIAP蛋白可能通过凋亡抑制功能在淋巴瘤的发生进展中有一定作用，并可作为判断淋巴瘤预后的参考指标[9]。

Survivin具有肿瘤特异性，在正常成人的组织几乎不表达，而在肿瘤组织中则呈现高表达状态，过度的表达会抑制细胞的凋亡过程，促进了细胞恶性增长，因此该基因同肿瘤发生和发展密切相关[10]。研究显示Survivin一方面能够对Caspase产生影响阻断多种刺激诱导的细胞凋亡过程；另一方面还可以同细胞纺锤体纤维结合造成Caspase对于细胞纺锤体形成的水解作用被阻滞，发挥对细胞有丝分裂器细胞器完整保护作用[11]。研究显示Survivin组织分布有明显的选择性，能够加快肿瘤细胞从G1期朝向S 期转换，具有细胞周期依赖性，同时Survivin 和肿瘤血管形成关系密切，其表达上调后会导致体内血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等血管形成因子活性，因此提示临床通过抑制Survivin 的表达既可以维持正常的caspase 促凋亡机理，同时可以通过VEGF 通路的阻断间接促进肿瘤血管的凋亡性退化，抑制肿瘤生长[12]。

EZH2在胚胎发育早期普遍存在，对于细胞增殖意义重大，并能增强细胞的生存能力。EZH2蛋白是PRC2核心部分，既可以在PcG沉默机制中发挥作用，同时在细胞生殖发育、维持干细胞多功能性及肿瘤的侵袭转移亦起到重要影响[13]。研究显示一方面EZH2蛋白具有组蛋白甲基转移酶活性，能够发生三甲基化导致PRC1复合物到特定基因位点，造成同细胞分化和增殖抑制基因发生沉默，导致肿瘤发生；另一方面EZH2蛋白可以对组蛋白去乙酰化酶发挥调节作用，参与靶基因转录抑制过程，导致细胞G1期缩短，S期增加，促进细胞增殖。近年来有学者指出在胃癌患者大量患者存在EZH2高表达，正常胃黏膜组织则低表达或者不表达，而且同胃癌大小、组织类型、临床分期以及淋巴结转移等肿瘤生物学行为具有密切关系[14]。研究发现在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中EZH2的SET区域错义突变更为常见，对底物的选择性改变，下调细胞周期中的关键肿瘤抑制基因，促进细胞恶性增殖，加速肿瘤的发展恶[15]。

本研究显示，观察组EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达率明显高于对照组，说明在弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达显著升高。通过患者临床病理特征分析发现，分期越靠后的弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达率越高。通过相关性分析发现，EZH2与XIAP、Survivin蛋白表达呈正相关，XIAP与Survivin蛋白表达呈正相关。本研究优势在于证实了EZH2、XIAP和Survivin蛋白在弥漫型大B细胞淋巴瘤呈现高表达状态，提示临床以EZH2、XIAP和Survivin作为治疗靶点的可能，但是本研究随访时间短，入组病例有限，因此还需扩充样本量、长期随访深入论证。

综上所述，弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达水平上调，与临床分期有一定关系，三者间存在相关关系。