散发性甲状腺癌中BRCA1和BRCA2的表达情况

解继平 万 毅 张 岷

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性疾病[1]，在过去的几十年里，包括中国在内的许多国家均报道了甲状腺癌发病率呈快速增长的趋势[2-4]，引起了社会的广泛关注。但目前甲状腺癌的发病机制还尚未明确。BRCA1和BRCA2是20世纪90年代发现的肿瘤抑制因子[5]，两组基因都参与了基因损伤的修复[6]，其基因突变会增加携带者患癌的可能性[7-9]。研究发现，家族性甲状腺癌组织中BRCA1 mRNA出现表达下降[10]，同时甲状腺癌患者携带有BRCA2基因突变[11]，然而关于BRCA1和BRCA2在散发性甲状腺癌组织中表达情况的报道还很少见，两者的关系也不清楚。因此，本实验采用免疫组化法检测甲状腺癌组织中BRCA1和BRCA2的表达，旨在探讨它们与散发性甲状腺癌发生和发展的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2015年1月至2018年5月大连大学附属中山医院临床资料完整并均采取甲状腺外科手术治疗的散发性甲状腺癌57例，选取正常甲状腺组织39例作对照，患者手术前均未采取其他抗癌治疗。根据WHO分类标准，将甲状腺癌按组织学类型分为乳头状癌(39例)、滤泡状癌(9例)、未分化癌(6例)和髓样癌(3例)。全部患者标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片。

1.2 方法

使用免疫组化亲生物过氧化物蛋白酶连接法(S-P法)，鼠抗人BRCA1(1∶50)和BRCA2(1∶100)抗体以及S-P试剂盒从福州迈新生物技术公司购入。BRCA1和BRCA2均采用阳性甲状腺癌组织作对照，正常甲状腺组织作阴性对照以及PBS液作空白对照。

1.3 结果判断

由两位经验丰富的病理医师进行双盲阅片。BRCA1和BRCA2染色的细胞核或细胞质出现棕黄色颗粒且其着色强度高于背景非特异性染色，判定为阳性。计算方法：将甲状腺癌BRCA1和BRCA2阳性细胞的百分比和染色强度根据评分后相乘，阳性着色细胞数判别标准为每张切片上观察5个高倍视野，计数阳性细胞百分比，阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分。阳性着色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者计分相乘即为阳性等级：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法

应用SPSS 20.0软件进行χ2检验和Kendal's tau-b相关性分析。

2 结果

2.1 BRCA1和BRCA2在正常甲状腺组织和甲状腺癌中的表达

正常甲状腺组织中BRCA1有39例(100%)表达阳性，79.5%呈++ ～ +++表达；甲状腺癌中有38例(66.7%)表达阳性，15.8%呈++ ～ +++表达，与正常甲状腺组织比较，阳性率下降，差异有统计学意义(χ2=16.208,P<0.05)。正常甲状腺组织中BRCA2有37例(94.9%)表达阳性，69.2%呈++ ～ +++表达；甲状腺癌中有24例(42.1%)表达阳性，12.3%呈++ ～ +++表达，与正常甲状腺组织比较，阳性率下降，差异有统计学意义(χ2=27.831,P<0.05)(表1)。

表1 BRCA1和BRCA2在正常甲状腺组织和甲状腺癌中的表达结果/例

2.2 BRCA1和BRCA2表达与甲状腺病理指标的关系

BRCA1和BRCA2表达与患者年龄有关，<50岁的甲状腺癌患者BRCA1和BRCA2表达的阳性率均大于≥50岁的患者，差异有统计学意义(χ2=4.476,P<0.05;χ2=9.977,P<0.05)；BRCA1和BRCA2表达与肿块直径有关，肿块直径<4 cm甲状腺癌患者BRCA1和BRCA2表达的阳性率均大于肿块直径≥4 cm患者，差异有统计学意义(χ2=14.844,P<0.05;χ2=4.212,P<0.05)，BRCA1和BRCA2表达与患者性别、淋巴结转移、双侧癌和组织学类型无关(P>0.05)(表2)。

表2 BRCA1和BRCA2表达与甲状腺病理指标关系/例

2.3 甲状腺癌中BRCA1与BRCA2表达的关系

在29例BRCA1“+”的甲状腺癌病例中，有12例未检测到BRCA2表达；在9例BRCA1“++”的甲状腺癌病例中，有2例未检测到BRCA2表达，经统计学分析后，BRCA1和BRCA2表达之间呈强相关关系(γ=0.660,P<0.05)(表3)。

表3 甲状腺癌中BRCA1和BRCA2表达的关系/例

3 讨论

BRCA1和BRCA2基因定位于人类染色体17q21，可编码分子量为220 kD的BRCA1和BRCA2蛋白，参与DNA损伤诱导的细胞周期调控、中心体复制、DNA损伤修复、基因转录调节以及诱导肿瘤细胞凋亡等相关维持基因组稳定性的多条细胞信号通路[12-13]。研究发现，BRCA1会增加甲状腺乳头状癌的易感性[14]，这提示BRCA1可能在甲状腺癌发生上发挥了一定的作用。本实验结果显示，在正常细胞中BRCA1蛋白定位于细胞核内。但由于细胞周期变化，BRCA1在甲状腺癌中的定位在目前的研究中仍未达成一致，张岷等认为甲状腺癌只位于细胞核内[15]，而本实验发现BRCA1除定位于细胞核内，在细胞质内也表达，这可能是由于家族性甲状腺癌和散发性甲状腺癌组织中BRCA1分布不一致。本实验结果还发现，BRCA1在甲状腺癌中表达的阳性率和染色程度均降低，并且BRCA1表达下降与患者年龄和肿块直径有关，但与患者性别、淋巴结转移、双侧癌及组织学类型无关。综上所述，BRCA1能否作为散发性甲状腺癌独立的诊断和预后判定指标还需进一步研究。

BRCA2是在BRCA1之后发现的第2个乳腺抑癌基因，参与染色体重组机制对双链断裂的修复作用[16]。本研究结果显示，BRCA2在正常甲状腺组织中定位于细胞核内，在甲状腺癌组织中定位于细胞核和细胞质内。BRCA2在甲状腺癌中的阳性率和染色程度较正常甲状腺组织均下降，说明可能由于BRCA2突变丧失了其本身抑癌基因的能力，组织细胞呈现无限制无序性增生，引起甲状腺癌的发生发展，从侧面显示BRCA2在乳腺癌发生发展中的作用，但BRCA2能否作为散发性甲状腺癌的诊断和预后判定指标也需进一步研究。

目前认为BRCA1和BRCA2都是肿瘤抑制基因，编码抑癌蛋白，起到抑制肿瘤生长的作用，但更具体的作用机制还需进一步研究。本研究显示BRCA1和BRCA2的表达之间产生强相关关系，BRCA1和BRCA2在甲状腺癌发生、发展中的作用存在相关性，它们可共同参与甲状腺癌的发生、发展。因此推测，随着对BRCA1和BRCA2更加深入的研究，在阐明散发性甲状腺癌的发病机制、早期诊断和判断预后以及药物敏感性等方面具有一定的应用价值。