嘧菌酯在洋葱中的残留量及消解动态分析

李春勇，金 静，王 霞，秦 曙

（山西功能农产品检验检测中心，农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（太原），太原 030031）

嘧菌酯（azoxystrobin）是一种全新的β-甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，用于防治作物白粉病、褐斑病、霜霉病等多种病害[1]，在我国已登记使用在黄瓜、水稻、大豆等多种作物上[2-5]。目前国际上已制定的嘧菌酯在洋葱上的最大残留限量值为美国（1.0 mg/kg）、澳大利亚（2.0 mg/kg）、韩国（0.1 mg/kg）、欧盟（10 mg/kg）、日本（10 mg/kg），但我国尚未制定嘧菌酯在洋葱上的最大残留限量。

目前，嘧菌酯在作物和蔬菜上的检测分析方法及残留行为已有较多报道[6-8]，大多通过乙腈提取，固相萃取柱净化后，采用气相、液相色谱法进行检测。2018年农药残留联席会议报道了嘧菌酯在番石榴、火龙果、甘蔗、油菜籽等作物上的残留行为[9]。结果表明，各种基质的添加回收率及相对标准偏差均符合试验要求，其中在埃及进行的番石榴试验中，嘧菌酯残留量为小于0.014～0.106 mg/kg；在印度尼西亚和越南进行的火龙果试验中，其最终残留量值为小于0.008～0.653 mg/kg；在巴西甘蔗试验中，其最终残留量值为小于0.010～0.080 mg/kg；在加拿大、美国的油菜籽试验中，其最终残留量值为小于0.010～1.350 mg/kg。然而，关于嘧菌酯在洋葱上的残留消解未见报道。

本研究采用高效液相色谱-串联质谱仪（UPLCMS/MS）检测技术，结合QuEChERS前处理方法，检测洋葱中嘧菌酯残留量，研究其残留和消解趋势，为我国制定嘧菌酯在洋葱上的残留限量标准提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

TSQ QUANTUM ACCESS高效液相色谱-串联质谱仪，赛默飞世尔科技公司；QUINTIX224-1CN、BS210S、CAP8201天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；GM300刀式研磨仪，德国莱驰公司；5804 R、5824 R离心机、Varispenser 10-50 mL瓶口分液器，艾本德（德国）公司；LP2500多管涡旋混合仪，莱普特科学仪器：XK80-A快速混匀器，江苏新康医疗器械有限公司。

嘧菌酯标准品：纯度99.0%，国家农药质检中心；50%嘧菌酯水分散粒剂，海利尔药业集团股份有限公司；甲醇（色谱纯），德国默克公司；乙腈（色谱纯），美国天地试剂公司；甲酸（色谱纯），美国费希尔公司；乙酸铵（光谱纯），天津光复科技发展有限公司；柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠盐（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；氯化钠（分析纯），北京化工集团有限公司；无水硫酸镁（分析纯），天津鼎盛鑫化工有限公司；PSA、Cleanert PestiCarb（GCB），博纳艾杰尔科技有限公司；盐包：SHIMADZU-GL WondaPak QuEChERS SPE（4 g MgSO4＋1 g NaCl＋1g柠檬酸钠＋0.5 g柠檬酸氢二钠）、吸附剂：SHIMADZU-GL WondaPak QuEChERS SPE（142.5 mg MgSO4＋20 mg PSA＋7.5 mg GC-e），岛津（上海）实验器材有限公司。

1.2 田间试验方法

于2018年分别在山西省晋中市、河南省济源市、江苏省南京市、上海市奉贤区、广西南宁市、山东省济南市六地进行了嘧菌酯在洋葱上的残留田间试验。50%嘧菌酯水分散粒剂在洋葱上的最终残留试验的施药剂量为300、450 g/hm2，施药2次和3次，施药间隔7 d，每个处理重复3次，小区面积15 m2。消解动态试验按剂量450 g/hm2于洋葱生长至一半大小时施药1次，重复3次，在处理小区相邻位置设置空白对照，小区间设置隔离带。

于最后一次施药后14、21、28 d用随机的方法在试验小区内采集12株生长正常、无病害的洋葱头作为最终残留样品。距施药后2 h，1、3、5、7、10、14、21、30、45 d采用相同的办法采集洋葱植株样品作为消解动态样品，切成1 cm以下的碎块，充分混匀，用四分法分取150 g 2份，于-20℃冰柜保存，备用。

1.3 分析方法

1.3.1 样品提取与净化

称取粉碎的洋葱样品10.0 g于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，2500 r/min涡旋振荡提取5 min。加入4 g无水硫酸镁、1 g NaCl、1 g柠檬酸钠和0.5 g柠檬酸氢二钠，2500 r/min涡旋振荡5 min，8000 r/min离心5 min。取上清液1.5 mL，至含吸附剂（142.5 mg MgSO4＋20 mg PSA＋7.5 mg GC-e）的2 mL净化管中，2500 r/min涡旋振荡5 min，5000 r/min离心2 min，取上清液过0.22 μm滤膜后待测。

1.3.2 仪器分析条件

液 相 条 件：Waters Atiantis dC18色 谱 柱（100 mm×2.1 mm，5 μm），液相流速0.3 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL，流动相A为4 mmol/L乙酸铵甲醇溶液（含0.1%甲酸），流动相B为4 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸），梯度洗脱，见表1。

表1 梯度洗脱条件

质谱条件：电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式，毛细管电压为1.5 kV，鞘气气压为1750 kPa，辅助气压为875 kPa，毛细管温度为270℃，套管透镜补偿电压为95 V，碰撞气体为氩气。在该质谱条件下，嘧菌酯的保留时间为5.10 min，定性离子对为404.0/329.0 m/z（碰撞能为30 eV），定量离子对为404.0/372.0 m/z（碰撞能为15 eV）。

2 结果与讨论

2.1 方法的线性相关性

精确称取嘧菌酯标准品（精确至0.1 mg），以乙腈溶解定容至10 mL，配成1000 μg/mL标准储备液。分别用洋葱头、洋葱植株的空白对照样品溶液（空白对照样品溶液制备过程同样品前处理，每次与样品同时制备）将1000 μg/mL标准储备液逐级稀释配制 得 到0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL的标准溶液。按1.3.2检测条件测定，每个样品进样3次，以质量浓度x为横坐标，平均色谱峰面积y为纵坐标，得到洋葱头基质标准曲线方程为y=5×107x＋134505，相关系数R2=0.9999，洋葱植株基质标准曲线方程为洋葱植株y=5×107x＋51304，相关系数R2=0.9998，方法定量限为0.01 μg/mL。

2.2 方法添加回收率及相对标准偏差

洋葱头在0.01、0.1、2.0 mg/kg添加水平下，嘧菌酯的平均回收率分别为96%、104%和94%，相对标准偏差（RSD）均为3%，洋葱植株在0.01、0.1、15.0 mg/kg添加水平下，平均回收率分别为101%、100%和100%，RSD值为2%、0.4%和2%，符合NY/T 788—2018《农作物中农药残留试验准则》[10]。

2.3 最终残留量

按1.2进行最终残留试验，洋葱头样品采收间隔分别为10、14、21 d时，嘧菌酯在洋葱头上最终残留量（表2）：山西（紫皮洋葱）残留量小于0.010～0.021 mg/kg；河南（黄皮洋葱）残留量小于0.010～0.015 mg/kg；江苏（红皮洋葱）残留量小于0.010 mg/kg；上海（紫玉洋葱）残留量小于0.010～0.015 mg/kg；广西（红皮洋葱）残留量小于0.045～1.08 mg/kg；山东（早紫洋葱）残留量小于0.010～0.021 mg/kg。广西（红皮洋葱）最终残留量显著大于其他5个地区，可能与其的品种特殊有关，其他五地为常见洋葱品种，单个植株只有一个较大的球状鳞茎，而广西样品虽名叫红皮洋葱，但单株有多个鳞茎且呈不规则状，对农药可能有较强的吸附能力。

表2 嘧菌酯在洋葱头中最终残留试验结果

2.4 嘧菌酯在洋葱植株中的消解动态

由动力学方程拟合结果（表3）表明，洋葱植株中嘧菌酯的消解符合一级动力学特征，江苏、广西的消解半衰期分别为3.9、3.8 d，降解较快。

3 结论

本研究建立了QuEChERS与高效液相色谱-串联质谱仪联用（UPLC-MS/MS）检测洋葱中嘧菌酯残留量的方法，回收率、精密度均符合检测要求[10]。嘧菌酯在山西、江苏、广西洋葱植株中消解较快，开始采集5 d消解率达到80%左右。农药残留量数值受作物品种和生长期、施药方式、施药时间、以及气候条件等多方面因素影响。从洋葱动态试验结果来看，山西、江苏、广西三地嘧菌酯的消解半衰期为5.7、3.9、3.8 d，试验期间平均气温分别为23.1℃、27.8℃、21.5℃，三地平均气温相差不大，消解半衰期较接近，推测嘧菌酯在洋葱上的消解可能与气温有关。根据嘧菌酯在我国登记批准的GAP数据和依据NY/T 788—2018《农药残留试验准则》[10]，在洋葱上取得的残留试验数据表明，洋葱中嘧菌酯最终残留量在小于0.010～1.08 mg/kg，低于世卫组织联合法典委员会（CAC）、欧盟和日本规定的最大残留量10.0 mg/kg[11]。按照《食品中农药残留风险评估指南》[12]和《我国农产品及食品中农药最大残留限量制定指导原则》[13]，参照国际食品法典农药残留委员会（CCPR）农药风险分析原则和世卫组织农药残留联合专家会议（JMPR）风险评估方法，提出了洋葱上的最大残留限量（MRL）建议值为2 mg/kg。结合我国农药登记情况和我国居民的人均膳食结构[14]，普通人群嘧菌酯的国家估算每日摄入量是1.7 mg，占日允许摄入量的13.7%。根据本次试验结果表明，拟推荐的最大残留限量不会对一般人群产生不可接受的风险，建议在洋葱上使用50%嘧菌酯水分散粒剂时，最高制剂用药量为40 g/亩（有效成分为300 g/hm2），最多施药2次，施药间隔7 d，安全间隔期14 d。本研究结果为科学合理用药、国家制定MRL值提供了基础数据。

表3 嘧菌酯在洋葱植株中消解动力学参数