饲料中金黄色葡萄球菌活菌的快速检测

白延波

（河北省邢台市农业农村局，河北 邢台 054001）

金黄色葡萄球菌的大多数菌株都会产生血浆凝固酶，所以在其他疾病以及应激因子的严重影响下，很容易引起免疫抑制，并打破宿主与病原之间的平衡状态，降低宿主自身的抵抗能力，该菌可直接进入血液，引发关节、滑液囊等机体组织的炎症。

1 材料

（1）采样随机采取一定数量的饲料厂仔猪颗粒饲料，并将其放置在密封袋中进行备用。（2）培养基以及试剂制备。准备7.5%的氯化钠肉汤、鲜血琼脂平板、7.5%氯化钠甘露醇琼脂平板、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、M.R、V-P、H2S、枸橼酸盐、硝酸盐、尿素、三糖铁以及吲哚等生化类培养基和灭菌性生理盐水，并以实验室自制的方法，为过氧化氢酶以及血浆凝固酶等实验提供充足的试剂保障。采集免疫脏血还需要采取健康兔子的心脏血浆，并通过分离处理，再将其放置于4℃的冰箱内进行储存。

2 方法

2.1 稀释样品

称取不同的样品各25g，并加入到225mL的灭菌生理盐水中，并通过越夜浸泡，制成比例为1:10的样品菌液。无菌吸取5mL的样品菌液，接种于7.5%的氯化钠肉汤中，再将其放置于37℃培养18～24h。

2.2 细菌分离纯化分别提取增菌液2环，无菌接种到鲜血琼脂平板中，于37℃培养24h后，再提取1/3的疑似菌落涂片，进而通过染色镜检实验，实现对细菌的纯化处理。另外，提取相应的纯培养物质，并接种到生化培养基中，置于37℃培养48h。提取部分菌落并放置于载玻片中，再将3%的过氧化氢滴到载玻片上，观察过氧化钠酶的实验结果。色素实验需要将少许的菌落接种到氯化钠甘露醇琼脂平板上，并在37℃培养18～24h。

2.3 细菌培养将新鲜的兔血通过灭菌处理之后，用生理盐水稀释成1:1后，将其分别装入0.5mL的小型试管中，并使用灭菌性生理盐水清洗并制作菌悬液，再将其加入到上述试管中，放置在37℃环境中进行培养，同时还需要观察24h。

3 检测的结果

3.1 涂片染色镜检

提取培养基的疑似菌落涂片，革兰氏染色后镜检，可见到葡萄串状的G+球菌物质，呈圆形或椭圆形，没有鞭毛，也尤芽孢和荚膜。

3.2 培养特性

若7.5%的氯化钠肉汤中，出现均匀且浑浊的现象，且不存在菌膜等物质，同时管内有少量的白色沉淀物质，可以判定此为金黄色葡萄球活菌的培养特性。在鲜血琼脂平板上形成圆形及光滑凸起的菌落，具有边缘整齐及湿润等特点，初期呈白色态，且随着时间的推移逐渐变成了金黄色，而菌落物质的周围还具有明显的β-溶血物质的存在。

3.3 过氧化钠、色素以及血浆凝固酶实验

将3%的过氧化氢与细菌物质进行充分融合之后，若产生气泡现象，则可以判定过氧化氢酶实验呈阳性。在色素实验的过程中，分离菌可以在7.5%的氯化钠甘露醇琼脂平板中形成橘黄色的菌落，并呈现出隆起的状态。在血浆凝固酶实验的过程中，可以判定血浆凝固酶呈现阳性。

4 结语

金黄色葡萄球菌是常见的化脓菌之一，并且还可以产生肠毒素等物质，该菌存在于饲料中会危害动物的生命。一般来说，金黄色葡萄球菌可以通过饲料原料加工、人员携带、包装密封以及运输过程等途径进行传播，为了杜绝并降低该菌的污染程度，饲料加工人员需要保持加工场地的卫生情况，并加强对生产环节的管理，确保饲料产品符合生产要求。