从兽医化验员职业技能竞赛分析禽流感HI试验注意事项

朱国强　陈伟　邢林林　徐聪　张栋　陈静　孙圣福

中图分类号：S858.31    文献标识码：C    文章编号：1673-1085（2021）1-0032-02

为考核兽医系统实验室操作人员的技能，2020年山东省动物疫病预防与控制中心举办了兽医化验员技能竞赛，由全省16个市选拔16名兽医化验员参加竞赛，血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）作为其中的一项技能操作进行，从考核过程和检测结果看，选手基本掌握了HA和HI的检测技术，但也暴露了试验过程中的一些细节性的问题。对此，本文将技能竞赛中HI试验过程中的注意事项叙述如下，以引起兽医化验员的重视。

1  样品和材料

1.1  样品  HI待检血清样品为10份，含阴性、弱阳性和强阳性3个不同滴度，由国家禽流感参考实验室制备，由山东省动物疫病预防与控制中心统一编号和致盲;H5亚型禽流感血凝抑制抗原和标准阳性血清由哈尔滨维科生物技术有限公司提供;移液器、血凝板等仪器和耗材由山东畜牧兽医职业学院准备和提供。

1.2  判定依据  HI試验依据《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003）中血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术进行。

每份样品满分2分，检测结果与参考值一致得2分，检测结果与参考值误差在±1个滴度范围内得1分，检测结果与参考值相差超过±1个滴度不得分。

2  结果

本试验竞赛流程包括从采集鸡全血制备红细胞、血凝试验标定H5亚型禽流感抗原效价，到HI测定样品效价全部流程，主要考察选手采集鸡血的熟练程度、移液加液的规范性、移液器、离心机的规范使用、感作时间和感作温度的掌握以及血凝结果的判定、生物安全的注意等。HI选手得分情况见表1。

3  分析与讨论

从HI试验操作成绩看，选手主要扣分点集中在结果的准确性>规范性>生物安全>红细胞制备>操作规范性。

3.1  操作规范性  操作规范性是影响检测结果的直接因素，从选手的操作看，问题主要集中在移液器的使用、移液不规范、移液器与TiP吸头没有卡紧方面，导致移液不准确;加同样液体顺序没有从低浓度到高浓度;移液器使用完，没有调至最大量程，没有放置在移液器架上;移液不熟练，尤其是加红细胞时间过长，后期红细胞没有混匀，导致红细胞前后浓度不一致。

3.2  红细胞制备  红细胞制备是整个试验的第一步，红细胞质量直接决定抗原效价，进而决定HI的检测结果，从现场选手的操作情况来看，主要不足为以下几点：①采血的熟练程度，部分选手采集鸡血不熟练，采集的量不足;②抗凝剂添加时间，抗凝剂没有预先加在注射器中，而是采集完鸡血后再与抗凝剂混合，导致部分鸡血溶血;③离心转速，为了节省时间，将离心机转速调大，导致红细胞压积过大，浓度过高;④洗涤红细胞过于粗暴，导致红细胞破碎，致使溶血。

3.3  生物安全  大部分选手对于实验室的生物安全有较高的认识，但也存在个别选手忽视生物安全的问题，如试验过程中不带帽子、口罩拉到口鼻以下、试验过程中的废弃物直接没有倒在标识“生物安全”的垃圾桶中。

3.4  结果规范性  主要是对于检测结果的描述，如某份样品HI结果为4log2，个别选手直接标记为数字4，标记不规范。

3.5  结果的准确性  部分选手对于完全凝集和不完全凝集区分不清，导致4单位抗原配制过低;完全抑制和不完全抑制的认知不清，导致检测结果判定过高。

3.6  其他影响因素  从HI方法本身来看，也存在一定的局限性，如采用人为判定结果，主观程度较高，人为影响因素较大;试剂本身的影响，HI方法抗原为标准化试剂，但4单位抗原需要进行HA标定，标定过程中难免存在一定的差异;红细胞需要选手自行制备，标准化程度低，浓度过高或者过低均会影响检测结果。

4  小结

兽医实验室承担着动物疫病检测和诊断、动物疫情和免疫状况监测、动物疫病防控科学研究等职责，对动物疫病防控发挥着重要的支撑作用。HI作为兽医实验室常用的检测方法，常用于禽流感、新城疫等疫病的免疫效果检测。兽医化验员作为兽医实验室检测人员，操作的规范性直接决定检测结果的正确与否。从本次技能大赛考核结果看，暴露了HI过程中一些不容忽视的细节，望广大兽医化验员能够在实际检测中引以为戒，高度重视。

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