用反相高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果分析

董宏伟，李新军，王晓光

（福安药业集团烟台只楚药业有限公司，山东 烟台 264002）

克林霉素磷酸酯注射液是临床上的一种常用药。此药是克林霉素的衍生品，其抗菌作用比克林霉素更强，且具有良好的可吸收性[1-2]。有关物质是指在生产药物的过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物及在贮藏药物过程中出现的降解产物等[3]。为了有效地控制克林霉素磷酸酯注射液的质量，保证患者用药的安全性，有必要对此药中克林霉素的含量及有关物质进行测定。本次研究主要是分析用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

本次实验使用的仪器是Waters600 型高效液相色谱仪、Waters490E 型紫外检测器、AR2140 型电子天平、FE20 型pH 计。

1.2 实验试剂

本次实验使用的试剂是克林霉素磷酸酯对照品（含有76.9%的克林霉素）、克林霉素磷酸酯注射液、磷酸二氢钾、甲醇。

2 色谱条件

本次实验使用的色谱柱为C18 色谱柱（150×4.6mm，5 μm），使用的填料为ODS 填料，流动相为pH 2.5 的磷酸二氢钾溶液-乙腈（775:225），流动相的流速为1.0ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，加样量为20 μl，检测波长为273 nm。

3 制备溶液的方法

3.1 制备对照品溶液的方法

精密量取一定量的克林霉素磷酸酯，将其置于容量为20ml 的量瓶中。在此量瓶中加入流动相，将克林霉素磷酸酯稀释到指定浓度（0.48 mg/ml），摇匀以备用。

3.2 制备供试品溶液的方法

精密量取2 ml 的克林霉素磷酸酯注射液。在此注射液中加入流动相，将其稀释至0.48 mg/ml，摇匀以备用。

3.3 制备空白溶液的方法

以克林霉素磷酸酯注射液处方作为参照，以流动相作为溶剂，制备空白溶液（浓度为0.48 mg/ml，不含主药），摇匀以备用。

4 实验方法及结果

4.1 进行线性关系实验的方法及结果

取约49 mg 的克林霉素磷酸酯对照品，精密称定，将其置于量瓶中。用流动相将其稀释、溶解至指定刻度。分别精密吸取4.5 ml、3.5 ml、2.5 ml、1.5 ml、0.5 ml 的克林霉素磷酸酯对照品溶液，将其分别置于容积为10 ml 的量瓶中，加入流动相，稀释到指定刻度。以本次实验的色谱条件作为基础，检测峰面积。将峰面积作为纵坐标，将克林霉素的浓度作为横坐标，进行回归分析。结果显示，当克林霉素的浓度在0.07475 ～0.67363 mg/L 区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。

4.2 进行加样回收率实验的方法及结果

取6 份含量已知的样品，将克林霉素磷酸酯对照品分别加入其中，计算回收率。结果显示，测得回收率的平均值为99.8%，RSD 值为0.7%。详细结果见表1。

表1 进行加样回收率实验的方法及结果

4.3 对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量进行检测的方法及结果

取20 μl 的对照品溶液，将其置于液相色谱仪中，对检测仪器的灵敏度进行调节，保证主成分峰值的最高峰介于满量程的10% ～25% 之间。各取20 μl 的供试品溶液、对照品溶液，将这两种溶液置于色谱仪中，对相关检测数据进行记录。如果在色谱图上供试品溶液显示为杂质峰，单一杂质峰的面积需≤4 倍（4.0%）的对照品溶液主峰面积。不同杂质峰面积的总和需≤8 倍（8.0%）的对照品溶液主峰面积。精密量取适量的克林霉素磷酸酯，以流动相将其稀释为0.45 mg/ml 的溶液。量取10 μl 此溶液，将其稀释后置于高效液相色谱仪中，记录色谱图。量取适量的克林霉素磷酸酯对照品，以同样的方法计算供试品中克林霉素的峰面积。吸取0.487 g/L 的克林霉素磷酸酯对照品溶液，连续进样5 次，测量峰面积。取适量的本品，用流动相将其稀释为0.48 mg/ml 的溶液，取其中的10 μl 进行检测，记录色谱图。另取一定量的克林霉素磷酸酯对照品，以同法进行测定。详细结果见表2。

表2 对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量进行检测的方法及结果（%）

5 讨论

克林霉素磷酸酯注射液多被用于治疗由革兰氏阳性菌引起的多种感染性疾病。为了确保患者用药的安全性，加强对克林霉素磷酸酯注射液进行质量管理和成分分析具有重要的临床意义。近年来，临床上常用RP-HPLC 法对克林霉素磷酸酯注射液进行质量管理和成分分析。此法具有分离速度快、检测灵敏度高的特点。本次实验的结果显示，克林霉素的含量在0.07475 ～0.67363 mg/L 区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。本法测得回收率的平均值为99.8%，RSD 值为0.7%。克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素的含量为99.3% ～104.4%，相关物质的含量为2.7%～3.0%。这说明，用RP-HPLC 法测定克林霉素磷酸酯注射液中的克林霉素及有关物质含量的效果较为理想。