不同烘干温度对龙胆草有效成分的影响

高 嵩，李 旭，于春雷，温 健，李瑞春，孙文松*

（1.辽宁省经济作物研究所，辽宁辽阳 111000；2.辽宁省农业科学院药用植物研究所，辽宁辽阳 111000）

龙胆（Gentianascabra B ge.）为龙胆科多年生草本植物[1]，根茎入药，是我国传统中药材，味苦，性寒。归肝、胆经。有清热燥湿，泻肝胆实火的功效[2]。国内外对龙胆属植物做了大量的研究，从中分离鉴定出多种化学成分，主要为环烯醚萜苷类、裂环环烯醚萜苷类和黄酮类成分[3]，这些成分均受烘干温度影响。为了利于运输与保存，龙胆草以干燥的根茎入药，干燥处理是目前最主要的加工方式。然而，在加工企业生产中，龙胆草没有统一的标准加工干燥处理温度，龙胆草质量参差不齐。关于龙胆草烘干温度的研究少有报道。该研究通过对主产区清原县生产龙胆草采用不同温度烘干后的品质特性，采用高效液相色谱法检测龙胆苦苷等有效成分含量，力求寻找最佳烘干温度，为龙胆草的初加工提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验准备

1.1.1 试验仪器。高效液相色谱仪（K2025，山东悟空仪器有限公司），高速万能粉碎机（F W100，天津市泰斯特仪器有限公司），分析天平（Y P502N，上海菁海仪器有限公司），K Q-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（D GG-9203A，上海森信实验仪器有限公司）。

1.1.2 试验材料。龙胆苦苷（批号：B20763）、獐牙菜苷（批号：B21643）、獐牙菜苦苷（批号：B21644），对照品均购自上海源叶生物科技有限公司，纯度≥98%；甲醇、乙腈、磷酸（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。栽培的龙胆草鲜药材采集于抚顺市清原县英额门镇椽子沟村（40°11′10.27″N，125°08′22.45″E），经辽宁省农业科学院药用植物研究所鉴定为龙胆（Gentiana scabra B ge.）。

1.2 方法

1.2.1 样品制备。以新鲜龙胆草根茎为原料，清水清洗后，自然风干。在电热恒温鼓风干燥箱内采用不同温度进行烘干处理。烘干温度分别为40℃、50℃、60℃、70℃共4个处理，标记为G4、G5、G6、G7，自然阴干为对照C K。每个烘干温度用材料500 g，重复3次，在烘干处理后期，每隔1 h进行称重，直至恒重。统计不同烘干温度下龙胆草药材干燥所需的时间。

1.2.2 折干率测定。测定不同烘干温度下龙胆草的折干率，以含水量为0计算折干率。水分测定参照《2020版中国药典》中水分的测定要求进行。

龙胆草折干率=烘干后龙胆草的重量/新鲜龙胆草的重量×100%

1.2.3 有效成分含量测定。

（1）对照品溶液的制备。精密称定獐牙菜苦苷8.6 mg于10 m L容量瓶中，以甲醇定容，为獐牙菜苦苷对照品母液；精密称定獐牙菜苷9.0 mg于50 m L容量瓶中，以甲醇定容，为獐牙菜苷对照品母液；精密称定龙胆苦苷13.1 mg，再分别精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液2 m L、獐牙菜苷对照品溶液1 m L于同一10 m L容量瓶中，以甲醇定容，配制成含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷分别为0.172 0、1.310 0、0.001 8 mg/m L的混合标准品溶液，备用。

（2）供试品溶液的制备。精密称定烘干加工的龙胆草样品0.25 g于10 m L容量瓶中，加入甲醇10 m L，超声提取（250 W，20 kH z）30 min，取出冷却至室温，加甲醇至刻度线，摇匀，离心，取上层清液过0.45μm微孔滤膜，即得。

（3）色谱条件。色谱柱：V enusil M P-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇（A），水（B）为流动相，梯度洗脱（0～45min，15%A～80%A），检测波长240nm，流速0.9m L/min，柱温35℃。样品进样量10μL。对照品和样品H P LC见图1。

图1 混合对照品（A）及龙胆样品（B）色谱

1.2.4 线性关系考察。精密吸取混合标准品溶液，分别进样4、6、8、10、12、15μL。按照色谱条件进行测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线（表1）。

表1 线性回归方程

1.2.5 精密度试验。精密吸取“1.5.1”项下混合对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积，獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的R S D分别为0.97%、1.02%、0.92%，均小于2%，表明仪器性能良好。

1.2.6 稳定性试验。精密吸取同一龙胆样品溶液，分别在第0、2、4、6、8、12 h进行测定，其峰面积结果为獐牙菜苦苷1.72%、龙胆苦苷1.64%、獐牙菜苷1.40%，结果表明龙胆供试品溶液在12 h内稳定性良好。

1.2.7 重复性试验。精密称取同一龙胆样品粉末6份，每份0.25 g，按“1.2.2”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定峰面积，獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的R S D分别为1.98%、1.72%、1.22%，均小于3%，表明该方法重复性良好。

1.2.8 加样回收率试验。精密称定6份已知含量的龙胆粉末0.125 g，加入适量混合对照品储备液，按“1.2.2”项下方法制备龙胆样品供试液，按“1.2.3”项下色谱条件进行含量测定，计算獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的加样回收率平均值分别为95.10%、102.3%、98.6%，R S D值分别为1.72%、1.67%、1.84%。

2 结果与分析

2.1 不同烘干温度对龙胆草烘干时间和折干率的影响

从表2可以看出，不同烘干温度对龙胆草烘干时间的影响差异很大。随着烘干温度升高，烘干时间显著减少。烘干温度低，所需的烘干时间增加。当烘干温度为60℃以上，随温度增加，烘干时间不再缩短。随着烘干温度的升高，折干率降低。阴干对照处理的折干率61.24%最高，40℃处理次之，50℃处理折干率与40℃处理相差不多，而60℃处理折干率与70℃处理折干率显著低于其他处理。

表2 烘干温度对龙胆草烘干时间的影响

2.2 不同烘干温度对龙胆草有效成分的影响

从表3可以看出，不同烘干温度下的龙胆苦苷、獐牙菜苷含量均有显著差异，而獐牙菜苦苷含量差异性不大。随烘干温度增加，龙胆草主要成分龙胆苦苷、獐牙菜苷和獐牙菜苦苷均表现为逐渐增加，并在50℃烘干温度出现拐点，龙胆苦苷和獐牙菜苷均在烘干温度50℃时有效成分含量最高。随温度再增加，龙胆草有效成分龙胆苦苷和獐牙菜苷呈下降趋势。而獐牙菜苦苷则表现不同，在70℃烘干条件下，獐牙菜苦苷表现最高成分含量，而50℃处理的獐牙菜苦苷含量次之。总体来说，50℃烘干温度处理的龙胆草有效成分含量最高。

表3 烘干温度对龙胆草有效成分的影响

2.3 烘干温度与龙胆草有效成分相关分析

利用S P SS 20.0对烘干温度与龙胆草有效成分含量做P e a rson相关性分析，结果见表4，獐牙菜苦苷含量与烘干温度呈极显著正相关关系，獐牙菜苷含量与烘干温度呈显著正相关关系，而龙胆苦苷含量与烘干温度无显著相关关系。

表4 烘干温度与龙胆草有效成分相关性分析

3 讨论

由于中药材在干燥过程受温度影响，极易引起外观性状、有效成分及生物活性的转变，直接影响到中药材药用价值与经济价值。因此，研究干燥过程中药材质量变化机制，全面分析中药材的物理性质和化学成分在干燥过程中的动态变化规律，对指导中药材干燥具有重要意义[4]。前人研究发现，在20℃～100℃烘干时，秦艽中龙胆苦苷含量逐渐升高，在100℃最高。由于温度升高，秦艽细胞中分解酶失活的速度就越快，龙胆苦苷含量就会越高，因此，秦艽在加工过程中，烘干温度应在100℃为宜[5]。该研究发现龙胆草根茎部分在50℃烘干处理下，其有效成分龙胆苦苷和獐牙菜苷均表现为最佳，并且这一处理条件下，烘干时间较短，折干率相对较高。而高温60℃和70℃处理下，烘干时间同样相对短，但折干率低，生产实践损耗大，产生生产价值低，而且，龙胆草的有效成分含量也相对较低。阴干处理成本低且耗能小，生产出的龙胆草折干率高，产量大，但龙胆草的有效成分含量低。因此，本着节约资源的原则，龙胆草初加工中，如若量少，可采用阴干的初加工方式；如若量大，50℃为龙胆草的最佳烘干温度，可应用于指导龙胆草的加工生产。