FEZF1-AS1在子宫内膜癌中的表达及其与患者临床特征的相关性

李功娟，张治洋，樊阳阳

(1.安康市汉滨区第一人民医院妇科,陕西安康 725000；2.安康市人民医院妇科，陕西安康 725000；3.陕西省人民医院产科，西安 710068)

子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)是全世界常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一[1-4]。我国EC 发病率呈逐年上升趋势，其发病率仅次于宫颈癌的妇科肿瘤，在部分城市已成为发病率最高的妇科肿瘤，且病死率居高不下。目前对于EC患者的治疗以手术切除为主，以放疗和化疗作为辅助治疗[5-6]，对于EC 仍以早诊断早治疗为主要手段对其进行防治，但是目前缺乏有效的，能够准确对EC 进行预测的生物标志物。研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用，能够作为肿瘤发展和预后的生物标志物[7-8]，如lnc-TP73-AS1 能够通过作用于miR-200a 依赖的HMGB1/RACE 促进肝癌细胞增殖。FEZ 家族锌指1 反义RNA 1 (FEZ family zinc finger 1 antisense RNA 1,FEZF1-AS1)首先于2014年被报道在结直肠癌中促进肿瘤转移，目前研究发现FEZF1-AS1在非小细胞肺癌、胃癌、结直肠癌、骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤中均发挥促癌基因的作用，但是尚未见到其在子宫内膜癌中的报道。本研究通过大样本临床标本中检测FEZF1-AS1及其靶基因FEZF1在EC组织中的表达量，并分析其与患者临床特征之间的关联，并以此揭示FEZF1-AS1在EC 发生和发展过程中所起的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2010年1月～2018年1月安康市人民医院收治的172例EC患者为研究对象，年龄35～72岁，平均年龄为47.16±12.73岁；病程1～6个月，平均病程为2.45±0.63月。纳入标准：①患者均经病理检查确诊为EC；②病历资料齐全；③本研究经我院伦理委员会审核通过；④患者自愿参加且均签署知情书。排除标准：① 严重心肝肾功能不全者；②并发其他恶性肿瘤者；③并发精神障碍者；④妊娠或哺乳期女性。

1.2 试剂和仪器 ABI 7500 PCR 仪(美国ABI 公司)，RNA 提取试剂盒(天根生化科技有限公司)，PrimeScript RT reagent Kit 和SYBR Green Quantitative RT-qPCR Kit 购自日本TaKaRa 生物公司。

1.3 方法 采集EC患者的癌组织及其癌旁正常组织，使用石蜡进行标本处理。提取EC患者癌组织及其癌旁正常组织中的总RNA，采用PrimeScript RT reagent Kit 反转录成cDNA，以cDNA 为模板特异性扩增，所有实验均重复三次。qRT-qPCR 程序设定为：94℃预热3 min，94℃ 30 s，56℃ 35 s，72℃ 25 s，共40个循环。qRT-qPCR 引物序列如下：FEZF1-AS1：F：TTAGGAGGCTTGTTCTGTGT，R：GCGCAGGTACTTAAGAAAGA；GAPDH：F：GTCGATGGCTAGTCGTAGCATCGAT，R：TGCTAGCTGGCATGCCCGATCGATC。

1.4 统计学分析 采用配对t检验分析癌组织和对应癌旁正常组织中FEZF1-AS1表达水平的差异，采用χ2检验和独立样本t检验分析不同EC 癌患者临床特征及疾病进展中FEZF1-AS1表达水平的差异，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 FEZF1-AS1在EC组织中高表达 见图1。课题组采用实时荧光定量PCR法检测了172 对EC 癌-正常组织，发现FEZF1-AS1在癌组织中的表达量（0.005 9±0.021 7）显著高于对应癌旁正常组织（0.001 7±0.005 6）达3.5 倍，差异有统计学意义（P=0.007）。

2.2 FEZF1-AS1表达水平与EC患者临床特征之间的关系 见表1。分析FEZF1-AS1表达水平[将肿瘤组织中FEZF1-AS1 相对表达量中位数及以上的分为高表达组86例（50.0%），反之为低表达组86例（50.0%）]与EC患者临床特征之间的关系可见，FEZF1-AS1 高表达与EC患者家族肿瘤史(χ2=6.891，P=0.016)、病理分级(χ2=7.142，P=0.028)、肿瘤分 期(χ2=10.426，P=0.002)、T 分 期(χ2=8.248，P=0.007)和M 分期(χ2=10.405，P=0.002)相关，其余则无相关性。

图1 FEZF1-AS1在EC 中高表达

3 讨论

子宫内膜癌（EC）作为最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，给女性健康带来了极大的危害[9]。文献报道，子宫内膜癌的高危因素包括较高的雌激素水平、月经初潮时间早、绝经时间、HPV感染等。随着医学科学的不断发展，诊断水平得到显著提升，这对于子宫内膜癌的早发现和早诊断起到了巨大作用，这也是子宫内膜癌的患病率显著增加的一个重要原因，但是，在患病率增加的情况下，对于子宫内膜癌的治疗却没能有一个质的飞跃，子宫内膜癌患者生存期仍然未得到显著提升，因此，寻找新的治疗靶点是子宫内膜癌治疗的重中之重。近年的研究发现，lncRNA 在肿瘤的发生和发展中发挥重要调节作用[10-11]。在子宫内膜癌中，亦有少量lncRNA 被报道与其发生和发展相关，如：结肠癌相关转录因子1（Colon cancer-related transcription factors 1，CCAT1）能够通过吸附miR-181a-5p 促进子宫内膜癌细胞增殖[12]；前列腺特异性转录1（prostate-specific transcript 1，亦称PCGEM1）能够联合作用STAT3 促进子宫内膜癌发生和发展；X染色体相关非编码RNA1（X chromosome-linked lncRNA 1，XLEC1）在子宫内膜癌中通过与碱性牛奶蛋白1（milk basic protein 1，MBP-1）协同调控c-myc 依赖性细胞生长。目前尚未见到FEZF1-AS1在子宫内膜癌中所起作用的报道。

本研究通过检测大样本临床组织标本FEZF1-AS1及其靶基因FEZF1 的表达情况，发现FEZF1-AS1及FEZF1在子宫内膜癌组织中均高表达，且二者表达呈正相关。通过分析其表达水平与患者临床特征之间的关系发现，FEZF1-AS1 高表达与患者家族肿瘤史、病理分级、肿瘤分期、是T 分期和M分期相关。陈娜[13]研究发现FEZF1-AS1在结直肠癌中高表达，且其高表达与肿瘤大小、年龄、性别无关，但与淋巴结转移、远端转移、dukes 分期、肿瘤分化程度显著相关，且其高表达与结直肠癌患者生存期缩短相关，该研究结论与本研究在子宫内膜癌中的结论相似。本研究中靶基因FEZF1 的表达与前文陈娜[13]在结直肠癌中的研究相似，FEZF1高表达与子宫内膜癌患者家族肿瘤史、病理分级、肿瘤分期、T 分期、N 分期和M 分期相关。且陈娜的研究亦显示FEZF1-AS1 与FEZF1 存在靶向调控的关系。FEZF1-AS1 定位于7q31.32，该区域常见肿瘤发生的报道。另有研究显示FEZF1-AS1 能够通过吸附miR-4443 促进骨肉瘤恶化，在乳腺癌中通过调节miR-30a 的表达促进肿瘤生成。FEZF1-AS1在卵巢癌中高表达并促进卵巢癌恶化。综上所述，FEZF1-AS1在子宫内膜癌的发生和发展过程中发挥促癌作用，且FEZF1-AS1 的表达与FEZF1 的表达呈正相关。但本研究仅从人群关联的角度发现二者表达呈正相关，虽已有文献报道二者在结直肠癌中表达呈正相关，但本研究尚未进一步从细胞和分子层面对其调控机制进行研究，是本研究的不足之处。

表1 FEZF1-AS1表达水平与EC 临床特征之间的关系[n(%)]