甲状腺乳头状癌患者血清促甲状腺激素水平和组织促甲状腺激素受体检测的临床应用价值

王 玲，王 健，赵寅生，黄其峰，吴黎黎

(中国人民解放军联勤保障部队第901 医院a.检验科；b.病理科,合肥230001)

近年来，甲状腺癌的发病率在全世界范围内增长迅速，是最常见的头颈部肿瘤之一，而甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）是其中最常见的病理类型，约占甲状腺癌的80%以上[1]。促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone,TSH）是由垂体分泌的一种糖蛋白激素，其与位于甲状腺滤泡上皮细胞胞膜上的促甲状腺激素受体（thyrotropin recepter,TSHR）结合，促进甲状腺细胞的生长和甲状腺激素的合成和分泌，提高甲状腺的摄碘能力。血清TSH 水平可以用于甲状腺疾病的诊断和疗效观察；同样，TSHR 在甲状腺细胞上的表达和分布异常，也会导致甲状腺相关疾病的发生。本实验通过了解PTC患者血清TSH 水平和甲状腺组织中TSHR 的表达和分布，旨在探索TSH，TSHR 与PTC 的关系，为PTC 的早期诊断、个体化治疗和疗效预测提供理论参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象 选取病例来自我院2017年9月～2019年10月进行甲状腺外科手术治疗并经病理证实的87例患者。符合下列标准者纳入：初次治疗，通过术后病理确诊，术前一周内检测血清TSH，没有并发其他恶性肿瘤、没有接受过甲状腺方面创伤治疗和1年内没有服用过影响甲状腺激素的药物，且临床资料完整，石蜡切片保存完整者。本研究经我院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。87例病患中，甲状腺乳头状癌55例，结节性甲状腺肿32例。另外，留取10例甲状腺结节周围正常的甲状腺组织作对照。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 TSH 的检测:患者晨起空腹采集静脉血3～5ml，3 000r/min 离心5min 后，分离血清上机检测。使用德国西门子公司的ADVIA Centaur 全自动化学发光分析仪检测，配套采用西门子促甲状腺素测定试剂盒（直接化学发光法）检测TSH。

1.2.2 TSHR 的检查:石蜡切片厚度均为4μm，HE 染色，并由病理科临床医师阅片确认。免疫组化采用SABC 法，按照常规步骤进行。兔抗人TSHR 单克隆抗体(1:50)来源于CUSABIO，即用型SABC-兔IgG试剂盒购于武汉博士德生物，抗原修复液购于碧云天，DAB 显色试剂盒购于北京中杉金桥。

1.3 方法 参照文献[2]进行免疫组化的结果判定:与背景染色相同或无染色计0分，淡黄色计1分，黄色或棕黄色计2分，黄褐色计3分；随机选取5个高倍镜视野（×400），计数100个细胞中阳性细胞的比例，＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3 分。上述两者得分相乘，0 分为阴性（－），1～2 分为弱阳（＋）性，3～4 分为阳性（＋＋），≥5 分为强阳性（＋＋＋）。免疫组化结果判定由两名资深病理医生独立实施，并取平均值。

1.4 统计学分析 应用SPSS23.0 软件对数据进行统计分析。计量资料（正态分布）用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验分析；计量资料（非正态分布）用中位数和四分位间距表示，组间比较采用Wilcoxon符号秩检验分析；计数资料用率表示，结果用卡方检验进行分析；等级资料比较采用Wilcoxon 符号秩检验分析。统计均以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTC 及结节性甲状腺肿患者的临床资料、TSH及TSHR 的表达情况 55例PTC患者（男性13例，女性42例，年龄48.36±11.17岁）及32例结节性甲状腺肿患者（男性7例，女性25例，年龄50.16±10.10岁）年龄和性别分布差异均无统计学意义（χ2=0.747，0.035，均P＞0.05）。PTC患者血清TSH 水平2.28(1.59，2.99)mIU/L 显著高于结节性甲状腺肿1.56(1.18，2.61)mIU/L，差异具有统计学意义(χ2=-2.163，P＜0.05）。PTC患者中TSHR阳性率为80.00%，平均秩次为36.21；结节性甲状腺肿患者中TSHR表达阳性率为96.88%，平均秩次为57.39，两组TSHR表达阳性率差异具有统计学意义（χ2=4.845，P＜0.05）。PTC患者血清TSH水平高于结节性甲状腺肿患者，而结节性甲状腺肿患者甲状腺组织的TSHR表达水平高于PTC组织。

2.2 TSHR 在不同甲状腺组织中的阳性表达 在正常的甲状腺组织中，TSHR 主要表达于甲状腺滤泡上皮细胞膜上；在PTC 和结节性甲状腺中，TSHR在细胞质和细胞膜上均有表达，且PTC 中着色较结节性甲状腺组织浅（见图1）。

图1 TSHR 在不同甲状腺组织的表达

2.3 PTC 中血清TSH 的水平与临床指标的关系见表1。进一步对TSHR表达水平与PCT 患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小和TNM 分期的关系进行了分析。PTC患者血清TSH 水平与年龄、性别、淋巴结转移和肿瘤大小，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。根据TNM 分期对PTC患者进行分组，Ⅰ/Ⅱ期患者血清TSH 水平明显低于Ⅲ/Ⅳ期的患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 PTC 中TSHR表达水平与临床指标的关系 见表2。对TSHR表达水平与PCT 患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小和TNM 分期的关系进行了分析。PTC患者TSHR 的表达水平与年龄、性别和肿瘤大小差异均无统计学意义（均P＞0.05）。根据TNM 分期对PTC患者进行分组，Ⅰ/Ⅱ期患者PTC表达阳性率（88.89%）明显高于比Ⅲ/Ⅳ期的表达阳性率（63.16%），差异具有统计学意义（P＜0.05）；同时，淋巴结转移PTC患者组TSHR表达阳性率（75.86%）明显低于淋巴结未转移组（84.62%），两组TSHR表达水平差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 PTC患者血清TSH 水平与临床指标的关系[M(P25,P75)]

表2 PTC患者TSHR表达水平与临床指标的关系

3 讨论

PTC 是恶性程度最低的甲状腺癌病理类型[1]，其发生隐匿，淋巴结转移较早，早期缺乏特异性体征和临床表现，早期诊断较为困难。PTC患者如能早期诊断，及时手术治疗，并辅助内分泌治疗和放射性131I 治疗[3]，可明显降低PTC患者的复发率和转移率，提高患者的生活质量。TSH 为垂体分泌的一种糖蛋白激素，TSHR 是一种位于甲状腺滤泡上皮细胞膜上的G 蛋白偶联受体，TSH 与TSHR 结合后除了发挥正常的生理作用外，还可刺激甲状腺细胞分泌生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子，而这些因子能刺激肿瘤细胞的生长[4]。有研究表明[5]在PTC 中，TSHR 基因和NIS 基因启动子的高度甲基化，抑制了TSHR mRNA表达，PTC 癌细胞表面的TSHR表达下降，促进了肿瘤的发生发展。也有研究[6]表明 BRAF T1799A 突变，导致TSHR 和NIS 蛋白表达不正常，肿瘤细胞的分化程度降低，摄碘能力下降。PTC 内分泌治疗的理论依据[7]是：给予PTC患者一定剂量的左旋甲状腺素钠片，使体内的甲状腺激素升到正常高限，负反馈作用于下丘脑-垂体-甲状腺轴，合成分泌的TSH 量下降，从而减缓了细胞的增殖，抑制了肿瘤的生长、浸润和转移。部分PTC患者，TSHR表达异常，肿瘤将不依赖TSH，这类患者的内分泌治疗效果将不理想；PTC 中放射性131I 治疗[8]是基于甲状腺细胞内的钠碘转运体，使甲状腺细胞具有较高摄碘能力，使放射性131I 聚集于甲状腺细胞内，辐射集中在靶器官，对其他组织和器官影响较小。PTC 中，如TSHR表达异常，会影响NIS，进而肿瘤细胞的摄碘率会下降，影响放射性131I 的效果。TSHR 的调控与PCT 的内分泌治疗和放射性131I 均有关联[9]。

本研究中PTC患者血清TSH 水平显著高于结节性甲状腺肿（P＜0.05）；PTC患者中，Ⅲ/Ⅳ期患者血清TSH水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者（P＜0.05），这一结论说明了血清TSH 与PTC 发病之间有着密切关系，且随着TSH 水平升高，PTC 的病情越严重。本研究通过免疫组化的方法对结节性甲状腺肿和PTC 进行比对发现：TSHR 在PTC组织中的细胞膜和细胞质均有表达，且表达强度低于结节性甲状腺肿；PTC 中，TSHR 在Ⅰ/Ⅱ期的表达阳性率高于Ⅲ/Ⅳ期，在淋巴结未转移组中的阳性率高于淋巴结转移组，可以认为TSHR 减少与PTC 的临床分期和淋巴结转移有相关性，呈负性相关；PTC中TSHR 的表达差异性，会影响到PTC 内分泌治疗和放射性131I 治疗的效果[6]。

综上所述，血清TSH 水平和甲状腺组织TSHR的表达与PTC 的发生有关系，其可以作为PTC 发病的影响因素、辅助诊断指标、病情评估及预后判断。将两者结合起来可以帮助我们提高早期诊断率、预测疗效、探索个体化治疗。