CMIA与ELISA法检测慢性HBV感染者HBeAg/抗HBe双阳性现象的血清学特征和方法学差异

安 哲，李思鹏，屈 梦，薛 丽，董 炜，孟 昊，张 妮，周 源

(西安交通大学医学院第二附属医院检验科，西安 710004）

乙型肝炎病毒血清标记物（hepatitis B virus serum markers，HBV-M）在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B virus infection，CHB)的诊断治疗中具有重要临床价值[1]。HBeAg 血清学转换是指HBeAg阳性个例的HBeAg 消失，继而检出抗HBe[2]。在HBeAg 血清学转换过程中，部分感染者可以出现HBeAg 和抗HBe 共存现象。本次研究旨在分析HBeAg/抗HBe双阳性的血清学特征及HBeAg/抗HBe双阳性的方法学影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2019年1～12月在西安交通大学第二附属医院感染科就诊并接受治疗、临床实验室检测乙肝病毒血清标记物结果呈HBeAg/抗HBe双阳性的CHB 病例363例。另收集ELISA法检测结果呈HBeAg/抗HBe双阳性样本87例。

1.2 方法和仪器 血清HBVDNA定量检测采用荧光定量PCR法，试剂由达安基因诊断有限公司提供。HBV-M 五项采用化学发光免疫分析法（chemiluminecence microparticle immunoassay，CMIA）和酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosoebent assay,ELISA)两种方法检测。HBV-M 五项(CMIA)检测试剂盒采用美国Abbott Laboratories 生产的乙型肝炎病毒血清标志物定量检测试剂盒（化学发光免疫分析法），检测仪器采用美国Architect I 2000自动免疫分析仪。HBV-M 五项ELISA法定性检测试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司，采用瑞士Tecon 免疫自动分析仪。

1.3 判定标准 CHB的诊断标准依据慢性乙型肝炎防治指南（2019版）[2]。以所有样本经CMIA法定量检测HBsAg 且HBsAg ≥0.05 IU/ml 判断为HBsAg 阳性，以抗HBs ≥10 mIU/ml 判断为抗HBs 阳性，HBeAg ≥1 S/CO 判断为HBeAg 阳性，以抗HBe ≤1S/CO 判断为抗-HBe 阳性。

1.4 统计学分析所有数据录入SPSS16.0 进行统计学分析。构成比以百分率（%）表示，均值比较采用t检验，以P＜0.05 差异有统计学意义。

2 结果

2.1 363例HBeAg/抗HBe双阳性样本的HBV-M分布特征 363例经CMIA法检测HBeAg/抗HBe双阳性样本中，抗HBc 阳性率99.72%（362/363）；HBsAg 阳性率98.62%(358/363)，不同水平HBsAg构成比见图1。抗HBs 阳性率8.82%（32/363）；不同抗HBs 水平下HBeAg，抗HBe 水平的差异以及抗HBs 分布特征见表1，比较不同组HBeAg和抗HBe，抗HBe 在抗HBs ≥100 IU/ml组和抗HBs ≥10 IU/ml组的差异有统计学意义。

图1 363例HBeAg/HBe双阳性CHB的HBsAg分布

表1 363例样本中不同抗HBs 水平下HBeAg，抗HBe 的比较

HBeAg结果分布区间1.03～101.00 S/CO,均值5.27 S/CO。不同HBeAg 水平构占比分别是：1～9.99 S/CO 占87.88%，10～19.99 S/CO 占9.09%，20～29.99 S/CO 占1.65%，30～49.99 S/CO 占0.55%，≥50 S/CO 占0.83%。HBeAg＜20 IU/ml 占96.97%，结果见图2。抗HBe 水平分布区间0.04～1.00 S/CO，均值0.61 S/CO。不同抗HBe 水平构占比分别 是：0.81～1.00 S/CO 占31.68%，0.51～0.80 S/CO占34.44%，0.10～0.50 S/CO 占29.75%，＜0.10 S/CO占4.13%，抗HBe＞0.10 IU/ml占95.87%，结果见图2。

图2 363例HBeAg/抗HBe双阳性CHB的HBeAg 和抗HBe 分布趋势

2.2 274例CMIA法检测HBeAg/抗HBe双阳性CHB 病例的HBV-DNA 特征 274例样本进行了HBV-DNA 检测。HBV-DNA 结果分布见图3。不同HBV-DNA水平下HBeAg，抗HBe 水平的差异见表2，HBeAg 和抗HBe 在不同HBV-DNA水平组的差异具有统计学意义。

图3 274例HBeAg/抗HBe双阳性CHB的HBV-DNA分布

表2 不同HBV-DNA水平下HBeAg，抗HBe 水平的差异

2.3 HBeAg/抗HBe双阳性结果的方法学差异ELISA法初检HBV-M 呈HBeAg/抗HBe双阳性样本87例，经ELISA法复检重复性54.02%（47/87）。47例复检HBeAg/抗HBe双阳性样本采用CMIA法检测，共检出4种模式：HBeAg(+)/抗HBe(+)（6.38%），HBeAg(+)/抗HBe(-)（80.85%），HBeAg(-)/抗HBe(+)（8.51%），HBeAg(-)/抗HBe(-)（4.26%）。

CMIA法检测HBeAg/抗HBe双阳性样本49例采用ELISA法复检，检出结果分别是：HBeAg(+)/抗HBe(+) 占4.08%，HBeAg(-)/抗HBe(+) 占10.20%，HBeAg(-)/抗HBe(-) 占85.72%。

3 讨论

慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清学转换是指HBeAg 阳性个例的HBeAg 消失，继而检出抗HBe，并伴随血清HBV-DNA 下降至＜103 IU/ml，它是HBeAg 阳性CHB 感染过程中一个重要转折点。发生HBeAg 血清学转换后，机体免疫耐受逐渐转变为免疫激活，病毒复制活跃转为复制降低，肝脏病变活动逐渐稳定和静息。HBeAg 阳性慢性HBV感染约有80%可发生血清学转换，部分感染者在HBeAg 血清学转换过程中可以同时检出HBeAg 和抗HBe，表现为抗原抗体共存，但是长期以来这一现象在实验室的检出又受到方法学的显著影响。

CHB 病例出现HBeAg/抗HBe双阳性结果时，①患者HBsAg 水平仍相对较高；②部分病例可能出现HBsAg/抗HBs 双阳性反应引起，这可能与S基因的突变或表型变异有关；③HBeAg 和抗HBe水平总体偏低，接近临界值；此类患者更容易发生HBeAg 血清学转换；④HBV-DNA水平呈现多样性，阳性较多见。

检测系统和方法学差异也是当前HBV-M 检测结果不一致的重要原因。研究发现ELISA法检出HBeAg(+)/抗HBe(+)样本中绝大多数为HBeAg 阳性，且HBeAg 呈高水平，HBV 显现出高复制状态。分析其原因可能与“带现象”有关，ELISA法检测抗HBe 采用竞争法和一步法，当待检血清中存在高水平HBeAg 时，大量HBeAg 结合酶标记的抗HBe使得酶标记物无法结合微孔内包被的HBeAg，从而造成抗HBe 假阳性。对经CMIA法检出HBeAg(+)/抗HBe(+)病例49例样本进行了ELISA法检测，进一步提示真实的HBeAg(+)/抗HBe(+)样本经ELISA法检测后，绝大多数表现为HBeAg(-)/抗HBe(-)，一小部分表现为HBeAg(-)/抗HBe(+)。

提供HBeAg 和抗HBe 准确检测结果是对临床实验室提出的客观要求，而准确判断慢性HBV感染者HBeAg 血清学转换也是治疗疗效监测和评估的重要依据。有研究证实，不同药物治疗后HBeAg血清学转化发生的时间也不一致。本研究小组发现部分HBeAg 阳性CHB 感染者经治疗后长期维持HBeAg 极低水平（HBeAg ＜10 S/CO）而难以继续发生血清学转换，部分慢性HBV感染者的HBeAg 和抗HBe 共存状态持续存在，将继续关注慢性HBV感染者的HBeAg 和抗HBe 共存状态以获得更加深入的研究成果。