外环境中ASFV核酸检出情况及分析

王久红

（湖北金林原种畜牧有限公司，武汉 430200）

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是世界动物卫生组织通报的重大动物疫病，它是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染猪引起的1 种急性、广泛出血性的烈性传染病，给世界生猪产业带来了极大损失，我国已将其列为第一类动物疫病［1，2］。自沈阳于2018年8月首次发现ASF以来［3］，其他省份也陆续暴发该病。目前非洲猪瘟疫情仍在持续，防控形势依然复杂严峻。据农业农村部报道，2021 年以来，全球有18 个国家和地区共发生4 120 起非洲猪瘟疫情。而且随着ASFV 弱毒株出现，给养猪企业ASFV 防控提出了更高要求［4，5］，没有感染ASFV 的养殖企业（户）应严防外部输入，防控工作不可松懈。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2020年至2021年上半年，按照农业部推荐标准NY/T 541—2016，在湖北金林原种畜牧有限公司采集外来车辆、人员以及购进物资等样品共3 778 份，其中车辆样品552 份（外来生猪运输车辆环境样品163份，外出售猪车辆样品16份，外出接送人员车辆样品66 份，其他车辆样品307 份），人员样品2 278份，物资样品948份。

1.2 试剂

ASFV 荧光定量PCR 扩增试剂盒，美国爱德士试剂公司；病毒RNA/DNA 提取试剂盒，天根生化科技（北京）有限公司。

1.3 仪器设备

A2型生物安全柜，购自北京东联哈尔仪器制造有限公司；TGuideS32 核酸提取仪，购自天根生化科技（北京）有限公司；荧光定量PCR 仪，购自西安天隆科技有限公司；高压灭菌锅，购自上海申安医疗器械厂。

1.4 样品处理和检测

将采集的样品置于EP 管中浸泡20 min 后涡旋20 s，使棉签或纱布上沾附的样品充分脱落，之后静置10 min，瞬时离心待核酸提取；当EP 管中上层悬浮液中有较多颗粒时，需1 000 r/min 离心30 s 后进行核酸提取。按照天根磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒说明书提取核酸。按照美国爱德士非洲猪瘟荧光定量PCR 试剂盒操作说明书进行荧光定量PCR 扩增和结果判定。按农业部推荐标准NY/T541—2016进行废弃物处理。

2 结果与分析

所有样品ASFV 核酸检测结果见表1。由表1可知，在采集的3 778 份样品中，有43 份检测出ASFV 核酸阳性，总体阳性率为1.14%；车辆、人员和物资的样品阳性率分别为4.53%（25/552）、0.53%（12/2 278）和0.63%（6/948）。通过对12 个ASFV 核酸检测阳性人员调查发现，这些人员之前均去过菜市场或集贸市场；而且在6 份ASFV 核酸检测阳性物资中，3 份物资样品是来自于菜市场或集贸市场，这表明作为供应猪肉和猪肉制品的菜市场或集贸市场可能已经受到ASFV的污染。

表1 3种不同类型环境样品中ASFV核酸检测结果

由表2 可见，在车辆样品中，外出售猪车和外出接送人员车的ASFV核酸阳性率分别为6.25%（1/16）和3.03%（2/66）；外来运猪车阳性率最高，为13.50%。

表2 不同用途的车辆样品中ASFV核酸检出情况

3 小结与讨论

ASF对我国生猪养殖行业造成了严重的经济损失，是我国当前重点防疫的疾病之一［5］。ASFV传播途径多、在环境中很稳定，导致其防控困难，随着ASFV 弱毒株的出现，更增加了其防控难度［6］。ASFV 主要通过接触传播，受ASFV 污染的运输车辆、物资及工作人员可通过接触感染健康猪只。据报道，通过运输车辆或人员传染ASFV 的风险很高［7］，生猪运输车辆是ASFV 扩散的主要风险因素［3］。当空气中ASFV 病毒量足够高时，也可以进行传播［8］。

本研究利用高灵敏度荧光定量PCR 方法，对湖北金林原种畜牧有限公司人员、购进物资和外出车辆采集的3 778 份样品进行ASFV 核酸检测，结果表明，这3 类样品不同程度携带ASFV，均是猪场感染ASFV 的潜在风险因素。因此，养殖企业应提高检测灵敏度并加强环境检测频率，严格把控车辆、人员及物资的进出；养殖场从业人员也应提高生物安全意识，平时做好消毒工作，出场休假时非必要不出入高风险地域。

在3 种不同类型样品中，车辆特别是外来生猪运输车辆携带ASFV 的几率很高，ASFV 核酸检出率高达13.50%，可能因为前期猪价较高，运猪车辆全国各地进行买卖，车辆所经环境复杂，再加之车辆洗消不彻底，致使ASFV 在运输车辆中长期存活，继而导致疫情传播。因此，养殖场应重视生猪运输车辆的潜在风险，在加强检测的同时加强车辆的洗消和烘烤，有效切断传播途径。在无有效疫苗和治疗药物的情况下，严防ASFV输入猪场是首要目标［9］。