阴虚证动物模型诊断指标及分析

王 赛白 明苗明三

(河南中医药大学,郑州 450046)

阴虚证即阴液不足,不能制阳的证。 阴液不足,则机体失去濡养,临床表现为口咽干燥,形体消瘦；阴虚不能制阳,阳亢而虚热内生,临床则表现为潮热盗汗,烦躁,两颧潮红；阴虚火旺,膀胱化源不足,则见小便短赤且黄,大肠失去濡润,则见便干,阴虚火旺,则见舌红少苔,脉细数[1]。 具体症候涉及到肾阴虚、肺阴虚、脾阴虚、胃阴虚、肝阴虚、心阴虚,涉及阴虚证的西医疾病有糖尿病、高血压、冠心病、中风、乙型肝炎、围绝经期综合征、肺癌、骨质疏松等[2]。 现有的阴虚证造模方法既有涉及到西医学的给大白鼠采取口服或注射西药、手术和感染的方法,也有中医从证的病因、病机和证候特点出发,采取如破气温燥中药等中医病因理论来造模[3],造模方法较多但评价指标却不尽相同,本文通过总结所有公开报道的阴虚证动物模型的一般观察状态、检测指标、药物反证进行总结,为评价阴虚证动物模型提供参考,为建立更统一的评价体系提供思路。

1 肾阴虚

1.1 造模方法

梁汝圣等[4]通过用甲状腺素片150 mg/kg 配制成10 mg/mL 悬混液灌胃成功制备肾阴虚大鼠,也可以用甲状腺素加利血平[5]这两种方法都是通过提高基础代谢率,从而引发类似肾阴虚的症状属于病理模型。 戴冰等[6]通过灌胃氢化可的松,段晓红等[7]通过腹腔注射氢化可的松均可成功复制肾阴虚动物模型。

1.2 一般状态观察

体重下降,体温上升,毛发枯槁、无光泽、易脱落,多饮,多食,多尿且黄,大便干结色黑,易怒躁动,拱背,不易抓取。

1.3 检测指标

现代研究表明肾阴虚与下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺、甲状腺) 的功能亢进有关,患者表现为下丘脑CRH、ACTH、TSH 增加, 促进肾上腺皮质释放糖皮质激素和甲状腺合成甲状腺激素,血中糖皮质激素和甲状腺激素含量增加[14],又因为CRH 及糖皮质激素的大量释放在下丘脑、垂体、性腺多水平对性腺轴产生抑制作用,从而导致生殖内分泌的紊乱,性激素等相关指标也发生改变[15]；环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷的双向调节作用作为阴阳学说的基础,阴虚病人也会表现出环磷酸腺苷水平显著升高的现象[16]。 动物实验检测指标见表1。

1.4 药物反证

六味地黄是滋阴补肾之首方,用于治疗肾阴亏损,用该药可使血清中cAMP、ACTH、Cor.含量降低,cGMP、T 含量升高[17]。

2 肺阴虚

2.1 造模方法

肺阴虚造模主要以烟熏+灌服甲状腺素或者灌服甲状腺+利血平+SO2熏蒸[18]等复合方法,其原理是先利用甲状腺素造成阴虚,再以烟熏的方式造成咳嗽,久咳不愈则伤及肺阴。

2.2 一般状态观察

体重减轻、皮毛(光泽差、毛发凌乱脱落)、行动(烦躁易怒)、呼吸(咳嗽、少痰、哮鸣音、鼻部干燥)、肛温显著升高、面温显著升高、抓力显著降低[19]。

2.3 检测指标

肺阴不足,虚热内生,虚热上炎而潮热颧红,会出现颧红耳赤等症状,故动物面温、肛温升高。 肺热为肺阴虚的基础,而热则为炎症反应的表现[20],故炎症因子TNF-α、IL-1 含量显著升高。 阴虚证表现为交感神经-β 受体-c AMP 系统功能亢奋,患者血浆中cAMP 含量增多, 甲状腺激素分泌增加,则甲状腺激素T3、T4 表达水平升高。 cAMP 能激活细胞内的蛋白激酶,使细胞内多种蛋白磷酸化,增强脂肪分解,使TC、TG 水平升高[20-23](见表2)。

2.4 药物反证

肺阴虚证是津液消耗,肺失濡养而出现的阴津不足,以致肺失清润,宣肃失职,虚热内生等临床表现的统称。 南沙参、玉竹、麦冬(同属甘凉归肺经)通过甘凉入肺从而改善物质代谢异常,其作用机制可能是通过下调肺阴虚模型动物体内过高的甲状腺激素、环核苷酸的水平,从而调节肺阴证引起的体内紊乱,改善肺阴虚证的整体证侯表现[23]。

表1 肾阴虚检测指标Table 1 Detection of kidney yin deficiency

3 脾阴虚

3.1 造模方法

脾阴虚常采用复合因素造模法,前14 d 通过饥饱不匀,例如：间隔进食或单日喂甘蓝,双日喂猪油(大鼠每只3 mL),加上单日游泳至耐力极限使其疲劳过度造成脾气虚,后16 d 在脾气虚基础上使用耗伤阴液药,例如：附子、吴茱萸等,制成脾阴虚模型[24]。

3.2 一般状态观察

食量减少、体重减轻、便溏、神态萎靡、毛色干枯、蜷缩聚堆。

3.3 检测指标：

脾阴不足,脾主运化功能失司,体内的蛋白质等精微物质不能正常转输,大量的蛋白质积于内质网内[27],则相关转运蛋白和蛋白激酶含量发生改变。 脾阴虚常与糖尿病、痴呆和消化系统疾病(胃炎、消化不良、厌食、便秘等),根据不同病症,针对性检测血糖、脑源性因子和MMC 含量(见表3)。

3.4 药物反证

四君子汤为补益剂,具有补气,益气健脾之功效。 主治脾胃气虚证,,脾虚动物模型病理学观察到脾、空肠、回肠粘膜破损、脱落,等现象,经四君子颗粒治疗后, 肠组织病理形态恢复正常,对脾虚证的蛋白质代谢系统有复健作用[28],可使“脾虚证”模型复健,对其有反证效果。

4 胃阴虚

4.1 造模方法

选择燥热耗阴中药草乌连续灌胃复制胃阴虚症,每天用燥热耗阴中药草乌水煎浓缩煎剂灌胃1次, 连续至7 d[36]。

4.2 一般状态观察

躁动不安、小便黄、饥不欲食、大便干燥。

4.3 检测指标

胃阴虚在临床上常表现为胃炎相关疾病,胃部有炎症反应,产生溃疡,故炎症相关因子水平升高,出现出血症状,红细胞数量减少体积增大,又因为炎症细胞侵蚀胃黏膜则粘膜层变薄(见表4)。

表2 肺阴虚检测指标Table 2 Detection index of lung yin deficiency

表3 脾阴虚检测指标Table 3 Detection index of spleen yin deficiency

4.4 药物反证

胃阴虚者,养阴生津降逆,宜清补,如麦冬、沙参、杏仁、白芍、石斛、茯神、粳米、麻仁、白扁豆等。 已有研究证明沙参麦冬汤可改善患者血气指标(对照检测指标中的红细胞计数与红细胞体积)[36]。

5 肝阴虚

5.1 造模方法

在四氯化碳诱导大鼠慢性肝损伤的基础上,结合温热中药灌胃制作大鼠肝阴虚证动物模型,也有研究结合长期激怒法制造肝肾阴虚动物模型[32],所造模型更接近临床人为影响因素较少。

5.2 一般状态观察

形体消瘦、身热、饮水增多、饮食减少、大便干硬、小便黄(反应精液损伤情况)、毛发干枯、烦躁易怒、行动迟缓、反应迟钝、舌红少津。

5.3 检测指标：

肝阴虚患者肾素-血管紧张素系统功能增强,故醛固酮含量升高[37],李莉等[36]研究结果表明肝阴虚患者存在TXB2 水平显著增高,6-Keto-PGF1α水平显著降低,在动物实验中仍有体现(见表5)。

5.4 药物反证

采用滋补肝肾中药,能减轻肝组织的炎症程度(IL-6、IL-10、TNF-α 水平降低)和纤维化程度,对于阴虚证相关的表征有一定的改善作用[44]。

表4 胃阴虚检测指标Table 4 Detection index of stomach yin deficiency

表5 肝阴虚检测指标Table 5 Detection index of liver yin deficiency

6 讨论

动物模型是动物实验的基础,随着中医药研究的发展,中医症候动物模型的制备越来越受关注,如何判定造模成功与否也成为了大家思考的问题,通过查阅现有阴虚证动物实验的文献发现：阴虚证动物模型的一般状态主要包括体征和状态,这在模型评价中是很重要的一部分,动物的表现往往与中医临床所对应,例如：动物体重减轻相当于患者形体消瘦,爪和尾的颜色(红色程度)相当于患者五心烦热,饮水量与大小便情况反映出津液损伤等。 动物的表观指征与人的中医症的表现相对应,为判断造模是否成功提供重要依据。 但也存在各脏腑的表现区别不大,特异性不明显的缺点,应根据不同病症部位再深入挖掘研究[49]。

在检测指标中,环核苷酸参与调节不同的生化代谢和生理功能,且在病理反应过程中也起介导作用,对细胞功能处于稳定状态具有双向控制调节作用[50],有研究证明阴虚时血浆cAMP 升高,cAMP/cGMP 比值无明显变化,临床上患者也出现这种现象[51],这一指标常用来作为判定是否阴虚的依据,但也有实验证明脾阴虚、肝阴虚时血浆cAMP 含量下降,故单用这一指标证明脾阴虚、肝阴虚是否造模成功是存在争议的,而肾阴虚和肺阴虚相关研究血浆cAMP 均为升高,除此之外,肾阴虚、肺阴虚模型血清T3、T4 也均为升高与两种疾病都能引起甲状腺功能亢奋相一致。 肺阴虚、脾阴虚、肝阴虚都检测了炎症因子的含量,结果均为升高,与临床三种疾病都伴有炎症反应相一致。 检测指标应根据不同的脏腑或其相联系部位检测相关指标的变化从而反应病理变化,例如临床上肾阴虚与下丘脑-垂体-靶腺轴的功能亢进有关,反应在动物实验中也会出现甲状腺、肾上腺指标的改变；肺阴虚常伴随炎症反应,肺阴虚动物模型中炎症因子表达水平也会出现升高；中医上脾主运化,临床上脾阴虚患者体内的蛋白质等物质不能正常转运,大量的蛋白质积于内质网内,实验中脾阴虚动物也会伴随相关转运蛋白和蛋白激酶含量发生改变；胃阴虚患者在西医临床上常表现为胃炎、胃溃疡等,在胃阴虚实验中,动物胃部也会出现溃疡和炎症反应与临床相对应；肝阴虚患者肾素-血管紧张素系统功能增强,醛固酮增多,肝阴虚动物模型也会出现这种症状。心阴虚的研究较少本文并没有进行总结,日后有待加强相关研究。 本文针对每种虚证总结有效治疗药物,通过药物反证,观察表征是否得到改善,检测指标是否回归正常,也可以在一定程度上判断造模成功与否,为评价动物模型提供新的思路。

由于造模后疾病会自然演化和环境因素的影响,可能出现两种或者两种以上证候交叠或前后出现的情况,导致症候区分不明确,在指标检测中,不同脏腑的虚症没有明确的某一指标作为依据来判断造模成功,所以建立各个证型的动物宏观表现和客观的理化指标公认评价标准是迫切之需[52]。