高效液相色谱法测定糕点中富马酸二甲酯的方法研究

韩顺林

（晋中市综合检验检测中心，山西晋中 030600）

富马酸二甲酯是20世纪80年代开发出的一种广谱高效、持久稳定的新型防腐剂，其凭借优异的抗菌防霉性能被广泛应用于食品果蔬、皮革服饰、中药材和化妆品等的防霉、防腐、防虫及保鲜方面[1]。但业内学者研究认为，富马酸二甲酯常温下易升华，易对人们的眼睛、呼吸系统等产生刺激，接触皮肤时会引起瘙痒、灼伤等症状，且摄入人体后在体内转化为甲醇，对人体肠道、内脏等有较大的毒副作用，对儿童生长发育尤为不利[2-4]。2009年，欧盟成员国禁止销售富马酸二甲酯含量超过0.1 mg/kg的消费品，同年我国也将其列为第2种违禁食品添加剂，但部分食品企业、不法商贩为降低成本、延长货架期，仍会使用此种违禁添加剂，在蛋糕、面包、月饼等易霉变、酸败的糕点类食品中较常见，因此，加强糕点类食品中富马酸二甲酯的检测评价非常重要[5]。本研究结合实验室现有仪器设备条件，参照NY/T 1723—2009建立了高效液相色谱法测定糕点中富马酸二甲酯的分析方法，旨在准确、快速、高效地检测食品中的富马酸二甲酯，为加强食品行业监管和保障人们饮食安全提供技术支撑[6]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

某品牌糕点（购自农贸市场）；富马酸二甲酯标准溶液（编号IST2537-10000M，浓度1 000 μg/mL，天津阿尔塔科技有限公司）；甲醇（色谱纯，德国默克）；氨水、盐酸、乙酸钠、溴化四丁基铵和乙酸均为分析纯；实验用水为一级超纯水。

1.2 仪器与设备

1260 infinity Ⅱ高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器，美国安捷伦）；XP205分析天平（精度0.000 1 g，瑞士梅特勒－托利多）；VORTEX MS3旋涡混合仪（德国艾卡）；KQ5200DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；0.22 μm有机相过滤膜（日本岛津）。

1.3 试样前处理

准确称取2 g粉碎混匀后的糕点试样于50 mL烧杯中，加入10 mL氨水甲醇溶液（1+20，V/V），混合后置于超声波清洗器中超声水浴15 min。待冷却至室温用盐酸溶液（1+1，V/V）调节pH至6.0。将试样体系溶液全部转移至25 mL容量瓶中，用约10 mL超纯水分次洗涤烧杯，并将洗涤溶液全部转移至容量瓶中，用超纯水定容后混匀。用滤纸过滤，再过0.45 μm滤膜，上机测试。

1.4 溶液配制

1.4.1 缓冲溶液配制

准确称取2.46 g乙酸钠、2.60 g溴化四丁基铵，用超纯水溶解，乙酸溶液（1+1，V/V）调节pH至6.0，再用超纯水定容于1 000 mL容量瓶中，混匀备用。

1.4.2 标准中间液配制

准确吸取1.0 mL富马酸二甲酯标准溶液，用超纯水定容至10 mL容量瓶中，配成100 μg/mL的富马酸二甲酯标准中间液。

1.4.3 标准工作系列配制

准确吸取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和3.0 mL富马酸二甲酯标准中间液于6个10 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，配成富马酸二甲酯质量浓度为 1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 和 30.0 μg/mL 的标准工作系列。

1.5 液相色谱条件

Poroshell 120 EC-C18色谱柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；柱温：35 ℃；流动相：甲醇+缓冲溶液（35+65，V/V），等度洗脱，流速为1.0 mL/min；检测器：二极管阵列检测器（DAD）；检测波长：220 nm；进样体积：10.0 μL。根据色谱峰保留时间定性，色谱峰面积外标法定量。

2 结果与分析

2.1 色谱分离分析

在1.5液相色谱条件下，6 min内能完成试液中富马酸二甲酯的色谱分析，由图1可知，富马酸二甲酯的峰形尖锐对称，且与溶剂峰等其他杂峰分离较好，未产生干扰，可准确地作定性定量分析。

图1 富马酸二甲酯标准工作系列色谱图

2.2 线性关系及检出限

以各标准工作系列点的质量浓度为横坐标（X），色谱峰面积为纵坐标（Y），绘制标准工作曲线，得到线性方程为Y=45.971 87X-5.315 37，相关系数r=0.999 607，富马酸二甲酯质量浓度在1.0～30.0 μg/mL与其响应值呈现良好的线性关系。以仪器测试时信噪比3∶1，计算取样量为2 g、定容体积为25 mL时方法的检出限为0.05 mg/kg，与NY/T 1723—2009中一致，能满足富马酸二甲酯定量检测的需求。

2.3 加标回收率与精密度

准确称取18份阴性糕点试样，分别添加低浓度（18.75 mg/kg）、中浓度（125.00 mg/kg）、高浓度（250.00 mg/kg）3个水平的富马酸二甲酯标准溶液，每个浓度水平平行测定6次，计算方法的加标回收率与相对标准偏差RSD，试验结果统计见表1。糕点中富马酸二甲酯在18.75～250.00 mg/kg添加水平下，回收率为92.5%～98.4%，相对标准偏差RSD为0.37%～1.60%。结果表明，本方法加标回收率与精密度良好，满足NY/T 1723—2009与GB/T 27404—2008[7]中的规定，测定结果准确可靠。

表1 富马酸二甲酯的加标回收率与精密度试验结果

3 结论

本研究参照NY/T 1723—2009建立了高效液相色谱法测定糕点中富马酸二甲酯的分析方法，通过试验考察了方法的线性关系、检出限、回收率与精密度，结果表明，该方法的线性范围较宽，线性关系良好，检出限、回收率与精密度等符合NY/T 1723—2009与GB/T 27404—2008中的要求，操作简便，测定结果准确可靠，可用于大批量糕点中富马酸二甲酯的分析检测。