妊娠SD大鼠血糖指标值的系统评价和单组连续变量Meta分析*

江心泳 葛 莉 赖玉婷 黄萍萍 陈 凡 庞书勤 于红虹

(福建中医药大学护理学院，福州 350122)

随着我国二胎政策放开，高龄产妇和经产妇人群数量不断增加，2004—2018年妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)的总体患病率高达12.85%，远超国际水平，并且呈持续增长趋势[1]。根据钟婕等[2]报道，GDM不仅可增加早产、巨大儿、胎儿畸形等不良妊娠结局的发生率，而且增加母亲和其子代患代谢性疾病的风险。由于开展临床研究困难性大，因此应用相关实验动物开展研究尤显重要。洪雅青等[3]和李鑫等[4]研究发现SD大鼠因其具有孕期适中(21 d)的特点，且支持短期内大量复制GDM模型而被广泛应用于相关实验研究。动物血液生化指标是动物实验重要而敏感的指标，也是药物安全性评价实验中必不可少的检测项目[5]。空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)和血清空腹胰岛素(fasting serum insulin，FINS)是检测妊娠大鼠罹患GDM的重要指标[6-7]。目前大多数研究判断患GDM的SD大鼠，FBG为6.7～16.7 mmo/L，差值范围大且缺乏统一标准。另外，FINS作为协助FBG判断GDM的指标仍未有明确范围[7-9]。因此，本研究通过对妊娠SD大鼠血糖FBG和FINS的Meta分析，旨在探讨二者的参考值上限，为患GDM 的SD大鼠模型的构建及FBG和FINS指标的标准区间提供参考。

1 材料和方法

1.1 文献检索

计算机检索中国知网、维普、万方、Web of Science、Cochrane Library、Scopus、PubMed、EMBase和MEDLINE共9个数据库中与妊娠SD大鼠血糖相关的文献，检索时限为2014年1月—2020年12月，采用主题词和自由词结合的方式进行检索，并根据不同数据库特征进行检索式调整以确定最终的检索方式。英文检索词包括“Rat*”、“Rattus”、“Rattus norvegicus”、“Rats, Norway”、“Rat*, Laboratory”、“Laboratory Rat*”、“Blood Glucose”、“Diabetes Mellitus”、“Diabetes, Gestational”、“Blood Sugar”、“Sugar, Blood”、“Glucose, Blood”、“Pregnanc*”、“Gestation”及“Gravidit*”；中文检索词包括“大鼠”、“血糖”、“糖尿病”、“妊娠期糖尿病”和“妊娠”。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：研究对象为妊娠 SD大鼠，实验观察指标包含妊娠期FBG和FINS。排除标准：会议报告、病例报告、综述、个案报道和以人为对象的实验研究、重复发表或结局指标不全、无法获取全文的文献及干预中应用改变大鼠生理状态药物的文献。

1.3 文献筛选与资料提取

由两名研究者通过阅读文章题目、摘要及全文，严格按照纳入与排除标准独立进行文献筛选，完成后提取相关资料并交叉核对。如遇分歧，由双方讨论或与第三名研究者讨论，形成统一意见。资料提取主要包括第一作者、发表年份、国家、样本量、入组周龄、体质量、FBG、FINS、禁食时间、血液采集部位和实验所用血糖仪厂家。

1.4 文献质量评价

由两名研究者采用SYRCLE动物实验偏倚风险评估工具(SYRCLE’s risk of bias tool for animal studies)[10]进行文献质量评价，如有争议则与第三名研究者讨论，形成统一意见。该工具评价内容包括10个条目、22个亚条目以及随机序列的生成、基线特征、分配隐藏、动物安置随机化、盲法(实施偏倚)、随机性评估结果、盲法(测量偏倚)、结局指标完整性、选择性报告研究结果和其他偏倚来源。该工具评估结果最终以“是”、“否”和“不确定”表示，其中“是”代表低风险偏倚，“否”代表高风险偏倚，“不确定”代表不确定风险偏倚。

1.5 数据分析方法

1.5.1单组连续变量Meta分析：应用STATA15.0软件进行Meta分析，收集原始研究数据中已直接报告的SD大鼠FBG和FINS的均值和标准差，以加权均数差(Weighted Mean Difference，WMD)和95%可信区间(Confidence Interval，CI)为合并统计量。通过I2对文献进行异质性检验，当I2<50%且P≥0.1认为不存在异质性，采用固定效应模型；若I2>50% 且P<0.1则采用随机效应模型进行分析，同时对存在异质性的研究进行亚组分析，寻找可能造成异质性的因素[11]。

2 结果

2.1 文献检索结果

初步检索共获取文献2 359篇，剔除重复文献644篇，通过阅读文献标题和摘要，排除1 428篇;通过阅读全文，排除250篇，最终纳入37篇文献，文献筛选流程如图1。

图1 文献筛选流程图

2.2 纳入文献基本特征及质量评价

本研究共纳入文献37篇，包括29篇中文文献和8篇英文文献；32篇来自中国，其余5篇来自美国、沙特阿拉伯、坦桑尼亚、马来西亚和伊朗。文章共包括428只SD大鼠，最大样本量为20只，最小样本量为5只。纳入的文献中，8篇检测了妊娠第0周的FBG；23篇检测了妊娠第1周的FBG和FINS；22篇检测了妊娠第2～3周的FBG和FINS。纳入研究的基本特征，具体见表1。

表1 纳入文献基本特征

2.3 文献质量评价

风险评估结果如图2，纳入的37篇研究中，6篇[7,22-23,34-35,49]明确表示采用随机数字表法进行序列生成，8篇[15-16,20-21,24,27,29,39]未采用随机方式产生序列；37篇基线特征均衡；两篇研究[34,49]采用分配隐藏，12篇[14-16,20-21,24,26-27, 32,42,47-48]未实现分配隐藏；6篇[19,26-28,35,42]未提供完整数据，另有张馨文等[7]一篇提供完整数据但未说明失访理由。纳入的所有文献在动物安置随机化，盲法(实施/测量偏倚)和随机性结果评估中均未有明确报告。

图2 风险评估

2.4 数据分析结果

2.4.1妊娠期间SD大鼠FBG参考值上限

2.4.1.1妊娠第0周FBG参考值上限：共7篇文献检测大鼠妊娠第0周的FBG[7,21,27,31,38,40,49]，异质性检验结果P=0.000 < 0.1，I2=98.6%，异质性高。

图3 妊娠第0周尾静脉取血FBG森林图

图4 妊娠第1周尾静脉取血FBG森林图

图5 妊娠第2周尾静脉取血FBG森林图

图6 妊娠第3周尾静脉取血FBG森林图

2.4.2妊娠期间SD大鼠FINS参考值上限

图7 妊娠第1周FINS森林图

图8 妊娠第2周FINS森林图

图9 妊娠第3周FINS森林图

3 讨论

3.1 FBG对GDM大鼠成模判断的意义

FBG是判断妊娠大鼠是否罹患GDM最直观的动物血液生化学指标，也是临床上用于检测GDM的常规指标[6,50]。FBG作为一项容易测量且数值直观的指标，应用于判定GDM大鼠模型是否成模。例如：蒋静等[51]、李佳等[52]和税迎春等[53]研究均采用FBG作为判断GDM大鼠成模的标准。因此，本研究对FBG进行系统评价和Meta分析以得出其成模标准。

3.2 FBG和FINS结果影响因素

研究发现，不同采血部位的FBG检测结果存在明显差异。本研究纳入的37篇文献中，有17篇采取尾静脉取血的方式检测FBG，而其余部位较少。张秀青[54]发现，静脉采血结果较末梢采血稳定。同时，尾静脉取血操作简单，对实验动物造成的损伤极小，可多次重复测量大鼠模型FBG值。因此，SD大鼠尾静脉采血用于检测FBG，可作为判定GDM大鼠的成模标准。大鼠体质量也会影响FBG，而且大部分研究仅对入组时的大鼠体质量进行了描述，缺乏对妊娠期间体质量数据。程臻等[55]研究显示，超重及肥胖与血糖指标的结果密切相关。Thamban等[56]的研究结果显示，GDM发生的危险性会随着妊娠前的BMI的升高而增大。此外，肥胖可导致炎性细胞因子增多，促炎性和抗炎性细胞因子表达失衡，从而导致IR或GDM[57]。禁食时间的长短也可影响FBG和FINS结果。王超群等[49]和汤琦等[58]研究表明，实验动物禁食时间过长会影响正常的糖代谢，引起低血糖反应。因此，在今后研究中应完善妊娠期间体质量的描述，明确大鼠在妊娠前未出现体质量过高的情况，同时明确禁食时间和采血部位以稳定FBG检测结果。

3.3 GDM SD大鼠的FBG成模标准的确立

汤梦雨等[37]、蒋静等[51]及祁秀茹等[59]研究判断SD大鼠患GDM时FBG为6.7～16.7 mmol/L，差值范围大且缺乏统一标准。因此，本研究通过对纳入文章中的数据Meta分析，得出妊娠期间4个阶段的FBG成模标准。同时，因不同采血部位的检测结果存在明显差异，故本研究FBG成模标准主要为尾静脉取血，不明确采血部位的结果予以排除，FBG结果分别为第0周5.51 mmol/L，第1周6.92 mmol/L，第2周6.64 mmol/L以及第3周7.04 mmol/L。同时，根据系统评价结果显示，GDM大鼠的成模判断时间多在妊娠第1周时进行[14-15]。因此，本研究选取妊娠第1周异质性低的结果数据合并，GDM的SD大鼠模型的成模标准为FBG>6.92 mmol/L，即妊娠SD大鼠FBG检测结果>6.92 mmol/L即可判断为出现GDM。

3.4 不足之处

本研究对符合纳入标准的37个动物实验依据进行质量评价，发现存在4方面不足，如下：①在随机序列的产生中，21.6%的研究，随机分配方法出现高风险及62.2%的研究未对随机分配方法进行描述；②对动物研究方法的介绍中，32.4%的研究在分配隐藏的描述中显示了高风险，62.2%研究分配隐藏方法不确定，仅5.4%的研究介绍了分配隐藏方法；③所有研究均未报道动物安置随机化、盲法以及随机性结果评估；④18.9%的研究未对失访动物是否会对结局造成偏倚进行评估。以上不足会对本研究结果带来偏倚风险。

综上所述，本研究共纳入428只妊娠SD大鼠。首次进行妊娠SD大鼠FBG系统评价和Meta分析，初步确认SD大鼠在妊娠第0～3周的FBG和FINS参考值上限。FBG，第0周：5.51 mmol/L；第1周：6.92 mmol/L；第2周：6.64 mmol/L；第3周：7.04 mmol/L。FINS，第0周：无统计数据；第1周：15.66 mIU/L；第2周：15.98 mIU/L；第3周：15.63 mIU/L。以上FBG和FINS参考值上限的确定可能为今后SD大鼠相关实验提供指标参考，减少不同实验中因参考值标准不同而带来的实验误差。