金关片长期毒性研究

周 奇 杨芳炬 郝 莉

［1.华润三九（雅安）药业有限公司，四川 雅安 625000；2.四川大学华西基础医学与法医学院，四川 成都 610000］

金关片为临床中常用的中成药，具有补益肝肾，祛寒止痛，活血通络的功效，临床用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等［1-3］。金关片作为一个上市多年的药物，临床疗效明确［4-7］，但缺乏系统的研究及评价资料报道。为扩大产品的影响力，有效地指导临床安全用药，根据国家食品药品监督管理局颁发的《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》中“慢性毒性试验”要求，本研究进行了金关片对大鼠口服灌胃的长期毒性（180 d）试验，以期为临床安全用药提供实验依据。

1 材 料

1.1 药物 金关片由雷公藤、续断、山药、细辛、附子（制）、茯苓、桑枝、桂枝、鹿角霜、秦艽、丹参、枸杞子、牛膝、鸡血藤、黄精、淫羊藿、薏苡仁、黄芪等组成，每克药粉相当于生药3.112 g，由雅安三九药业有限公司生产并提供，批号K-060301，长期毒性研究用时称取药粉以0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成8%、4%、2%浓度药液备用。

1.2 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，健康一级，体质量90～120 g。由四川大学实验动物中心提供，合格证号：川实动管质第10号。动物分笼饲养观察1周。室温18～25℃，条状基础饲料。

1.3 统计学处理 应用SPSS软件对各组数据分别计算均数和标准差，以t检验或t′检验进行各剂量组与对照组比较。

2 方法与结果

2.1 分组和给药 大鼠按体质量分为4组，即高剂量组（0.8 g/kg体质量，相当于生药2.49 g/kg，约为临床用量的16倍）、中剂量组（0.4 g/kg质量，相当于生药1.25 g/kg，约为临床用量的8倍）、低剂量组（0.2 g/kg体质量，相当于生药0.62 g/kg，约为临床用量的4倍）、生理盐水对照组（给予相同体积生理盐水），每组30只大鼠，雌雄各半。口服灌胃给药，每只大鼠给药容量为1 mL/100 g，根据体质量增长调整给药量，每周给药6 d，每天给药时间相同。共给药180d，每组于给药第90天处死6只大鼠，进行指标监测。6只停药观察2周（试验时间为104 d），然后处死作同样检测。余下18只继续给药，待180d时处死余下12只进行检测，余下6只停药观察2周（试验时间为194 d），然后处死检测。

2.2 标本采集与检测 1）一般观察：每日观察体征和行为活动、粪便性状及食量。每周称体质量1次。2）实验室检查：于给药90、104、180、194 d经股动脉采血，进行血液学（红细胞计数及血红蛋白、白细胞计数及其分类、网织红细胞计数、凝血酶原时间、血小板计数）和血液生化指标［谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸梅（ALP）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TAG）、血糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（Tbil）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、钠离子浓度、钾离子浓度、氯离子浓度、肌酸磷酸激酶］。3）病理组织学检查：于给药90、104、180、194 d处死动物进行系统解剖。取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、子宫、脑、胸腺、卵巢、附睾、睾丸测定湿重并计算脏器系数。取脑、垂体、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管、唾液腺、小肠、大肠、肾上腺、心、肝、脾、肺、肾、胰、胃、卵巢、气管、主动脉、前列腺、乳腺、膀胱、坐骨神经、骨髓等组织常规固定、包埋、切片、HE染色，进行病理组织学检查。

2.3 各组常规观察和体质量增长 给药期间，与生理盐水对照组比，试药组未出现体征及行为活动异常，体质量差异无统计学意义，各组食量亦无明显差异。各剂量组与对照组体质量增长差别见图1。

图1 金关片对雄性大鼠体质量的影响

2.4 各组血液学及生化指标测定 试验90 d时处死各组大鼠各6只（每组雌雄各3只）进行血液学、生化结果显示，血液学与生化检查见0.8、0.4 g/kg用药组尿素氮、肌酐明显升高（P＜0.05～0.01），其余各项指标未见异常，停药2周动物上述血液学、生化指标检查未见异常，中结果见图2～图6。

图2 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血常规及免疫细胞的影响

图3 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清酶的影响

图4 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清TC、TAG、GLU、Tbil的影响

图5 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清尿素氮、肌酐和电解质的影响

图6 金关片给药180 d、停药14 d对血浆蛋白的影响

实验180 d时处死剩余动物12只同样进行血液与生化检查结果显示，与对照组比，0.8 g/kg用药组尿素氮均明显升高（P＜0.05），其余各组各项指标未见异常；给药180 d后停药2周动物（各组大鼠雌雄各3只）同上法处理和检测结果显示，血液学、生化指标未见异常。结果详见图7～图11。

图7 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血常规及免疫细胞的影响

图8 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清酶的影响

图9 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清TC、TAG、GLU、Tbil的影响

图10 金关片给药180 d、停药14 d对大鼠血清BUN、Crea和电解质的影响

图11 金关片给药180 d、停药14 d对血浆蛋白的影响

2.5 各组系统解剖及病理组织学检查 给药90 d、停药14 d各用药组进行系统解剖观察结果显示，肉眼未见脏器明显异常；脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胰、胃脏器湿重和脏器系数与对照组比，无显著差异；脏器称重结果显示，与对照组比，0.8、0.4 g/kg用药组雄鼠睾丸质量均出现明显减轻（P＜0.05），0.8 g/kg用药组雌鼠子宫质量亦出现明显减轻（P＜0.05）；病理切片检查见0.8 g/kg用药组雄鼠睾丸出现病理改变，表现为生精细胞减少，精管细胞减少甚至消失，停药14 d亦无明显改善，见图12。其他各组各脏器未见明显病理改变。

给药180 d、停药14 d各用药组进行的系统解剖观察结果显示，180 d用药（0.8 g/kg）组肉眼见大鼠脾脏淤血，但其质量无增加或减轻；0.8、0.4、0.2 g/kg用药组雄鼠睾丸质量明显减轻（P＜0.01）；同时，0.8 g/kg用药组雌鼠子宫质量明显减轻（P＜0.01）；各给药动物经病理切片观察仍见0.8 g/kg组雄鼠睾丸出现类似90 d用药组改变；子宫虽见质量减轻，但未见结构异常改变，脾脏亦未见结构异常；其余各脏器或组织亦无异常病理改变。各试药组子宫、睾丸、附睾质量结果详见图13、图14。

图13 金关片给药90 d后对生殖系统脏器质量的影响

图14 金关片给药180 d后对生殖系统脏器质量的影响

给药90、104、180、194 d分别取部分大鼠骨髓涂片检查，结果显示：骨髓有核细胞增生活跃，粒细胞、红细胞各系各阶段比例基本正常，形态无异常改变。表明该药物对骨髓无不良影响。

3 讨 论

金关片每日0.2 g/kg（相当于0.62 g生药/kg，约为临床用药量的4倍）连续给药180 d，各项指标及病理学观察，均未见毒性反应和对脏器器官的损害。故认为金关片临床治疗量（0.06 g/kg，相当于0.1556 g生药/kg）是安全的。综上可以看出，金关片对大鼠未见明显的长期毒性，提示金关片在临床推荐剂量下服用是安全的。

结合金关片的药效研究报道［1，3，8］，该药能治疗寒湿阻络证、瘀血阻络证、肝肾两虚证之类风湿顽痹。由于雷公藤是金关片中的君药，是治疗关节炎和风湿病的特效药材，大量文献报道其对精子有杀伤力［9-11］。从长期毒性研究中可以看出金关片对雄性大鼠生殖系统作用存在一定的影响，但关金片中雷公藤的含量低，且发现停药90 d后，精子数量和功能完全恢复，不影响生育［12］。金关片与同类产品雷公藤片临床疗效比较［3］，疗效无明显差异，用于治疗类风湿性关节炎均有较好疗效（总有效率分别为97.2%、96.4%），但雷公藤片不良反应高、复发率高，因而金关片是值得推广应用的治疗类风湿性关节炎疾病的较好药物。

近期研究发现，金关片能显著降低高尿酸血症小鼠尿酸水平；并显著降低高尿酸血症所致的高BUN、高Crea水平；对模型形成过程小鼠血清中尿酸水平有良好抑制效果［9］。类风湿关节炎［13］以及高尿酸血症［14-15］均是临床中常见的疾病，其症状和并发症严重影响患者生活质量。随着金关片新功效的不断发现以及临床应用的推广，金关片主要用于慢性疾病的治疗，需要较长时间服用药物，因此系统的评价和报道金关片的长期毒性具有重要的临床指导意义。通过本研究表明金关片属于副作用较小，毒性不明显的中成药，为药物综合评价提供可靠的实验数据。