益气扶阳方对高尿酸血症大鼠降尿酸作用的研究*

陈云梦 刘 兴 李弘飞 秦慧钊 李 颖 杨保林

（1.北京中医药大学，北京 100029；2.北京中医药大学东直门医院，北京 100700）

高尿酸血症（HUA）是一类由尿酸异常引起的疾病，尿酸盐在体内蓄积可引发多种症状，是多种疾病的发病因素，与痛风、肾结石、慢性肾病、心脑血管疾病的发生、发展密切相关［1］，HUA防治越来越受到临床关注。本课题组通过临床观察，发现HUA存在气虚阳虚型，提出HUA气虚阳弱病机［2］，并自拟“益气扶阳方”，该方由黄芪建中汤化裁而来，由黄芪、桂枝、芍药、茯苓组成。本实验通过益气扶阳方治疗HUA大鼠，探究益气扶阳方疗效，旨在为临床治疗HUA提供新思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD成年大鼠，雄性，36只，体质量（268±10）g，由维通利华提供，生产许可证号：SCXK（京）2016-0006，合格证编号：1100111911036818，饲养于北京中医药大学SPF级动物房（温度为25℃，湿度47%，气压在适宜范围内），实验室光照节律，自由饮水及饮食。

1.2 试药与仪器 益气扶阳方，组方：黄芪、桂枝、茯苓、芍药（均购于亳州市佰世信中药饮片有限公司，生产批号分别为180905、190410、181104、181004）。4味药材按比例混合，清水漂洗2次，加蒸馏水2 500 mL，浸泡30 min后，煎煮30 min，收集煎煮液，药渣再加水1 000 mL，煎煮20 min，合并2次滤液，分为3份，分别水浴加热浓缩至含生药0.12、0.24、0.48 g/mL，灭菌，4℃保存备用。腺嘌呤（规格型号：1090725 g，上海源叶生物科技有限公司）；乙胺丁醇片（生产批号：T19B030190224，杭州民生药业有限公司）；别嘌醇（合肥久联制药有限公司，生产批号：HFJLB0601058092）；10%水合氯醛（规格型号：R00 625～100 mL；北京雷根生物技术有限公司）；血尿酸（UA）测定试剂盒［生产批号：AUZ5947；货号：OSR6198；Beckman Coulter Laboratory Systems（Suzhou）CO.，Ltd］；尿素氮（BUN）测定试剂盒［生产批号：AUZ6219；货号OSR6134；Beckman Coulter Laboratory Systems（Suzhou）CO.，Ltd］；肌酐（CRE）测定试剂盒（生产批号：2587；货号：OSR6178；Beckman Coulter，Inc，Brea，CA 92821 USA）。

1.3 分组与造模［3-5］将36只大鼠适应性喂养7 d后，随机分为6组：正常组、模型组、别嘌醇组和益气扶阳方低、中、高剂量组（1.2、2.4、4.8 g/kg），每组6只。在实验过程中，除正常组外，其余各组每天上午以腺嘌呤10 mg/mL+乙胺丁醇25 mg/mL灌胃给药制备HUA模型，每天下午进行药物干预，正常组与模型组给予生理盐水，其余各组给予等体积相应药物，灌胃容积按照体质量换算为10 mL/kg，灌胃21 d，实验期间自由饮食。

1.4 标本采集与检测 1）表征观察：每日观察大鼠一般体征，如毛色、精神状态、四肢关节是否肿胀等，观察并记录。于每周一上午称体质量，记录变化情况。2）UA、CRE、BUN测定：末次给药后第2日使用10%水合氯醛溶液麻醉大鼠行腹主动脉取血，3 500 r/min离心10 min，分离血清，采用全自动生化分析仪检测UA、CRE、BUN水平。3）肾脏组织病理学观察：末次给药后，取大鼠同侧肾脏组织，纵向取材，标本置于4%甲醛溶液中固定48 h，逐级乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，常规制片，行HE染色，光学显微镜观察病理组织变化。

1.5 统计学处理 应用SPSS20.0统计软件。计量资料以（）表示。各组UA、CRE、BUN、体质量的总体均数符合正态分布且方差齐，采用单因素方差分析，各组间有差异后组间两两比较采用SNK-q检验。检验水准a=0.05。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组表征观察结果 见表1。实验第3周，与正常组相比，模型组、别嘌醇组出现脱毛、毛质粗糙无光泽，蜷卧少动、反应能力差等表现；中药低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠毛质光泽、分布均匀，反应灵敏。各组大鼠均未出现关节肿胀。实验开始前各组大鼠组间体质量比较无统计学差异（P＞0.05）；造模第2周，各组间体质量出现差异，与模型组相比，各组均有增长；造模第3周，模型组可见体质量下降明显，中、高剂量组大鼠体质量均增长，与模型组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）；与别嘌醇组相比，中剂量组、高剂量组体质量显著增高（P＜0.05或P＜0.01）。

表1 各组大鼠体质量比较（g，±s）

表1 各组大鼠体质量比较（g，±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与别嘌醇组比较，▲P＜0.05。下同。

组别正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组别嘌醇组n6 6 6 6 6 6第1周270.00±12.24 270.83±8.01 265.00±11.40 265.83±8.61 275.00±10.00 266.67±12.11第2周340.00±23.02 270.00±8.94**308.33±22.50##295.00±13.04 300.83±20.35#295.83±33.82#第3周387.50±17.81 256.67±9.31**305.00±16.43 312.50±19.93##▲315.00±13.80##▲▲286.67±20.41

2.2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较 见表2。UA方面，与正常组相比，模型组明显高于正常组（P＜0.05）；与模型组相比，益气扶阳低、中、高剂量组和别嘌醇组UA水平显著降低（P＜0.01）。CRE、BUN方面，与正常组相比，模型组明显高于正常组（P＜0.01）；与模型组相比，益气扶阳方中剂量组CRE水平显著降低（P＜0.01）；与别嘌醇组相比较，益气扶阳方中剂量组CRE、BUN水平降低（P＜0.05）。

表2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较（±s）

表2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较（±s）

组 别n UA（μmol/L）CRE（μmol/L）BUN（mmol/L）117.79±18.71 142.96±9.59*101.14±15.62##100.35±4.98##98.27±9.94##94.45±26.87##正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组别嘌醇组6 6 6 6 6 6 16.68±3.04 52.68±4.80**47.20±11.83 37.27±5.97##▲45.50±8.10 47.53±10.16 5.08±0.44 13.27±2.39**12.30±3.19 9.07±1.20##▲10.98±1.78 12.21±1.79

2.3 各组肾脏病理切片比较 见图1，图2。模型组、别嘌醇组大鼠肾小球体积增大，内皮细胞及系膜细胞增生，炎性细胞浸润明显，肾小管内出现蛋白质渗出，部分肾小球内出现空泡样改变；益气扶阳低剂量组可见炎性细胞浸润，中药中、高剂量组未见明显异常。

3 讨 论

图1 各组肾脏组织病理切片（HE染色，200倍）

图2 各组肾脏组织病理切片（HE染色，400倍）

HUA的尿酸临界值尚无确定说法，一般以血清尿酸水平＞420 μmol/L，或女性血清尿酸水平＞360 μmol/L，男性尿酸水平＞420 μmol/L时定义为HUA，部分指南将HUA作为痛风无症状期出现［6］。HUA使用药物干预的时机及目标尚未明确，有研究认为除放射或化疗的恶性肿瘤患者预防性用药、遗传性酶缺乏致尿酸升高、罕见尿酸持续升高（男性＞774 μmol/L，女性＞595 μmol/L）等特殊情况可采用药物治疗，大部分患者以改变生活方式及观念为主［7］。有学者提出无症状时尿酸水平大于8 mg/dL（476 μmol/L）时，即采用别嘌醇干预［8］。别嘌醇在痛风发作时从低剂量逐渐加量使用，有利于减少痛风发作次数，是痛风发作时的一线用药［9］，但别嘌醇干预无症状HUA存在争议［10］，因别嘌醇在降尿酸的同时还有严重的过敏反应综合征，以及药疹、发热、肝肾损害甚至出现死亡等不良反应，且随着用药的时间增长易造成蓄积［11］。非布司他较别嘌醇安全，但亦存在肝肾损伤、恶心、皮疹等副作用［7］。对于无症状性HUA，确诊后需干预，采用药物治疗的患者是否获益还需进一步药理研究及循证依据［6］，鉴于目前西医治疗方案尚不完善，中医药本着整体辨证论治的原则，具有副作用小，疗效确切等优势。

对于无症状HUA，中医无相应病名、病因及病机的记载，在伴发痛风时归入“历节”“历节”或“热痹”等范畴，多数医家认为无症状HUA病属虚实夹杂，虚为脾肾亏虚，实为痰、瘀、湿热等［12］，治疗时以清热利湿，活血通络为基本原则，在此基础上予健脾化痰、补益肝肾［13］。笔者认为HUA属本虚标实证，虚以气虚阳虚为主，后期可见寒、湿、痰等浊毒为害，提出HUA气虚阳微的病机。因课题组在临床中发现部分HUA患者早期尚未发展为明显湿、热、瘀的表现，反而见舌质淡红、舌体微胖、舌苔薄白、脉应指无力等典型气虚表现［14］。气是促进和维持机体正常运行的精微物质，对各脏腑的功能活动及津液的生成、输布、排泄等都起着促进、推动作用，气虚时脾胃运化水液无力，造成水液积聚而成湿、痰、瘀。同时气耗损到一定程度还会导致阳气的虚损，《内外伤辨惑论·饮食劳倦论》云“既脾胃有伤，则中气不足，中气不足，则六腑阳气皆绝于外，故经言五脏之气已绝于外者，是六腑之元气病也”。另一方面随着年龄的增长，阳气会越来越虚弱，故治疗HUA时应注意扶助阳气，阳者生之本，如《医法圆通》云“人活一口气，气即阳也，火也，人非此火不生……阳气流通，阴气无滞，阳气不足，稍有阻滞，百病丛生”［15］。一旦气虚阳弱的病理状态形成，机体既可招风、寒、湿等外邪侵袭，又可内生寒、湿、痰等浊毒之害，这些病理产物浸淫入血后，形成“污血”为害［2］，导致HUA，临证应益气扶阳以助增强机体代谢及自御能力［2］。

益气扶阳方由黄芪建中汤化裁而来，其中黄芪、桂枝益气温阳，不仅可使脾的运化水谷精微功能健旺，气血化源充盛，还可温化水湿痰饮，有利于尿酸代谢，更重要的是，益气温阳有助寒、湿、痰、瘀等产物的温化，以防邪留关节、病久及肾。现代药理研究发现，益气扶阳方中4味药均有降低尿酸的作用。黄芪具有抗氧化、促进细胞代谢、利尿消肿、减少尿白蛋白排泄等功效，对缺血性的肾脏有保护作用［16］，还可通过改善胰岛素抵抗从而降低尿酸的作用［17］。芍药具有消炎保肝、降压镇痛、抗氧化、免疫调节等作用，吴宗修等［18］根据体质用芍药甘草汤治疗HUA虚证患者，发现芍药甘草汤不仅降低血尿酸浓度，还可调节HUA患者自主神经平衡状态。茯苓中起主要作用的是茯苓多糖和茯苓三萜类化合物，张双金等［19］发现茯苓水提物可通过调节肾脏转运体表达，促进HUA大鼠尿酸的排泄。

本研究运用别嘌呤+乙胺丁醇灌胃造大鼠HUA模型后，模型组相对于正常组，尿酸升高（P＜0.05），同时CRE、BUN皆升高（P＜0.01）；病理切片可见肾小球、肾小管出现病理改变，符合HUA的病理表现，造模成功。本实验结果表明益气扶阳方不同剂量皆有降尿酸的效果，效果与目前降尿酸一线药物别嘌醇相当；生理机能保护方面，益气扶阳方各组大鼠毛质光泽、分布均匀，反应灵敏，中、高剂量组体质量增长明显优于别嘌醇组（P＜0.05或P＜0.01），中剂量模型大鼠CRE、BUN水平降低（P＜0.05），中、高剂量组病理切片与模型组、别嘌醇组比较未见明显肾损害，表明益气扶阳方在清除尿酸时对肾功能有一定保护作用。

本实验验证了益气扶阳方降尿酸的有效性及安全性，其降尿酸的有效性与别嘌醇相当，而对肾脏的保护作用则明显优于别嘌醇，但益气扶阳方降尿酸及保护肾功能的作用机制尚不清楚，还需进一步研究。