卷烟厂在CNAS认证中对烟碱检测方法的验证

＊江天成

（贵州中烟工业有限责任公司贵定卷烟厂 贵州 551300）

1.方法概述

按照GB/T 19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》的要求使用吸烟机抽吸卷烟样品并收集主流烟气，将主流烟气的总粒相物溶解于含有内标物的萃取剂中，用气相色谱法测定萃取液的烟碱含量，计算总粒相物中的烟碱含量。

2.方法验证的定义及解释

方法验证指的是实验室直接引用标准的情况。要注意版本的查新，在引用该方法之前，实验室应对自身的能力进行验证，不仅要从人员、设备、环境方面，还需通过实验提供的可靠结果如精密度、线性范围、检出限、定量限等方法特性指标来证明结果的准确性和可靠性。

3.方法验证实施步骤及过程记录

(1)人员能力评价

从事本检测项目的人员情况及能力评价如表1所示。

表1 人员情况及能力评价表

(2)设备符合性评价

设备名称/型号/检测参数/测量范围/精密度/标准要求/计量溯源状况/符合性评价结论如表2所示。

表2 设备评价表

试剂、耗材、标准物质确认如表3所示。

表3 试剂、耗材、标准物质评价表

续表

(3)检测方法所依据标准的现行有效性确认

通过全国标准信息公共服务平台查询，本检测方法依据的标准GB/T 23355-2009《卷烟 总粒相物中烟碱的测定气相色谱法》于2009年3月26日发布，2009年6月1日开始实施，目前状态为“现行”。

环境设施及条件评价如表4所示：

表4 环境设施及条件评价表

(4)方法特性验证

①方法的选择性和基质效应分析。分析7个方法空白样品（一定数量的代表性空白样品），检查在目标分析物（烟碱）出现的区域是否有干扰峰。表5为验证情况记录。

表5 干扰峰情况记录表

本实验室检测烟气烟碱含量时，出峰位置在6.5min附近，内标物出峰位置在21.3min附近，经7次方法空白实验，未发现与待测物（烟碱）、内标物出峰位置重叠或接近的干扰峰。

以上实验证明，本检测方法在应用中具备良好的基质效应。

②方法检出限及定量限验证。采用空白加标样品标准偏差法评价方法的检出限，具体操作方法为：

A.配制6 个烟碱浓度含量分别为0.0959 mg/ml、0.1918mg/ml、0.2877mg/ml、0.3836mg/ml、0.4795mg/ml、0.5754mg/ml的标准溶液制作标准曲线；B.以日常检测样品中检测到的最低浓度值制备1个空白加标样品，对该样品进行10次重复检测；C.计算空白加标样品重复检测结果的标准偏差；D.按空白测试结果平均值加三倍标准偏差值的方式计算方法的检出限，以10倍标准偏差作为方法的定量限，验证结果见表6。

表6 方法检出限、定量限情况记录表

③灵敏度验证。A.以标准物质配制两个浓度分别为0.0959mg/mL、0.5754mg/mL的空白加标样品作为验证测试样品；B.分别对两个测试样品进样测试后处理谱图；C.灵敏度计算：

式中，S：灵敏度；C1：高浓度样品的检测结果浓度值；C2：低浓度样品的检测结果浓度值；A1：低浓度样品峰面积；A2：浓度样品峰面积。

验证结果数据A1、A2、C1、C2分别为199.88、1283.86、0.092、0.582，计算得灵敏度S为2212.2。

④线性范围。按GB/T 23355-2009的要求制作标准曲线，直接引用标准曲线谱图和数据，从仪器给出的数值可知，该曲线的相关系数为0.99999，证实此标准曲线在最低和最高浓度点区间的线性是稳定的，且该标准曲线最低和最高浓度点区间可以完全覆盖本质监站所需检测样品的浓度范围，位于标准曲线最低和最高浓度点区间之外的线性可以忽略。

由此可以得出结论，方法的线性范围符合检测需求。

⑤测量范围、方法回收率、重复性、正确性验证

A.进行不同浓度空白加标样品的回收率实验，证实是否符合GB/T 27417-2017附录A表A.1中规定的方法回收率偏差范围，选取日常检测样品中最低含量值作为验证实验的最低浓度点并编号1、选取日常检测样品中最高含量值作为最高浓度点并编号3、再选取二者的平均值左右作为中间浓度点并编号2，每个浓度分别配制1个空白加标样品，分别重复进样6次。

B.连续对以上三个样品进行重复检测，每个样品重复检测6次，得出的数据见表7。因在本报告中验证了空白响应值为0，因此回收率直接使用实测浓度平均值计算：

表7 回收率、重复性、正确性验证情况记录表

式中，R：某个浓度水平的回收率；

C0：某个浓度水平理论浓度值（加标浓度值）。

a.计算每个浓度点的变异系数，参照GB/T 27417-2017附录B中表B.1来判断变异系数是否处于可接受水平：

式中，CV：变异系数（相对标准偏差）；

S：某个浓度水平的样本标准偏差；

b.根据以上数据，参照GB/T 27417-2017附录A中表A.1及附录B表B.1，可以判断本检测方法在常用检测浓度水平范围的回收率、变异系数均处于可接受水平，同时也证实了本检测方法在此测量范围内的结果具有良好的正确度。

以下为GB/T 27417-2017附录A中表A.1及附录B表B.1摘录内容：

表A.1 方法回收率偏差范围

表B.1 实验室内变异系数

⑥再现性验证

准备日常检测中同一牌号同一批次样品18个。每个检测人员每天检测3个样品，每个样品测定1次，连续或间隔（确保时间不同即可）进行3天。2个检测人员3天时间，共得到18个测试结果。检测结果数据如下：A:0.80，0.83，0.83，0.87，0.85，0.88，0.87，0.82，0.87；C:0.83，0.84，0.82，0.88，0.86，0.88，0.86，0.86，0.88。

算得平均值x-=0.85，再现性值R=0.024。

再现性标准偏差计算方式：

式中，SR：再现性标准偏差；n：每系列测试中的样品数量，本次实验n=3；m：系列数量，本次实验m=2人×3天=6；xi：单次测量结果；：18次测量结果的平均值。

根据GB/T 27417-2017附录B表B.1中的实验室内变异系数来评价再现性水平：

根据变异系数结合GB/T 27417-2017附录B表B.1判断，此方法的再现性处于可接受水平。

⑦不确定度分析另外报告讨论，验证合格，此处不做分析。

(5)验证结论

根据以上材料，证明本部门具备开展本检测方法的全部条件，且已可正确应用本检测方法，可以正常开展检测。