分析灌洗液不同检测方法在支气管结核诊断中的价值

王晓丽 陈治水 周静霞

(联勤保障部队第九八八医院检验科 焦作 454000)

在全球范围内结核病都属于普遍存在的问题，结核杆菌侵犯支气管、气管及周围组织则称之为支气管结核，如果是单纯病症患者，难以通过CT或胸片诊断出来，所以很多患者无法及时确诊和治疗[1]。如今纤维支气管镜广泛应用，可以一并进行诊断和治疗，肺泡灌洗后对灌洗液进行检测，能确诊是否存在结核杆菌，不过目前有着多种检测方法，诊断效果也各不相同[2]。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本次研究对象是我院2017年11月～2018年11月期间收治的56例肺结核患者(纳入观察组)，同时选取28例非结核性肺部疾病患者(纳入对照组)。观察组中菌阳肺结核、菌阴肺结核患者各28例，均符合中华医学会的《肺结核诊断和治疗指南》，其中男31例，女25例，年龄19～71岁，平均年龄(42.3±7.5)岁；对照组男15例，女13例，年龄20～72岁，平均年龄(42.7±7.4)岁。两组基线资料经过对比，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1灌洗液采集

根据患者实际情况选择适合规格的纤维支气管镜，术前禁食6h，术前30min肌肉注射阿托品、雾化吸入2%利多卡因行鼻腔喉头表面麻醉；术中将纤维支气管镜经鼻腔送入声门后，将2%利多卡因滴入气管行局部麻醉，过程中要行鼻导管供氧，还要监测血样饱和度、呼吸、心率等指标；纤维支气管镜抵达病变位置后，活检、刷检后进行肺泡灌洗，共灌洗3次，之后吸出灌洗液放置于无菌瓶中，采集20mL进行实验室检验。

1.2.2荧光定量PCR检测法(FQ-PCR)

取1～1.5mL灌洗液进行离心处理，时长5min，速度为12 000r/min，去除上层清液，在沉淀物中加入1mL无菌生理盐水混匀，再次离心处理5min，速度为12 000r/min，去除上层清液，将50μL DNA提取液放入沉淀物中混匀，放入100℃恒温环境中10min；之后放在冰箱中冷却到室温后，再次离心处理5min，速度12 000r/min，取2μL上层清液置于PCR反应管中，以8 000r/min速度离心处理数秒，再将其放在PCR仪中，进行扩增处理；先在93℃环境下预变性2min，再依次93℃45s、55℃60s，共计10个循环，之后再依次93℃45s、55℃120s，共计30个循环；最后进行荧光检测，对结果进行解读。

1.2.3结核抗体检测法(胶体金法)

将2滴封闭液滴入反应板的反应孔中，等待薄膜吸入；取40μL灌洗液标本，滴入反应孔中，等待薄膜吸入；之后滴入6滴洗活液，等待薄膜吸入；再滴入2滴金标液，等待薄膜吸入。质控点为红色，反应孔内存在红色斑点则为阳性。

1.2.4培养检测法

灌洗液标本行常规处理，再根据《全国结核病菌学检验标准化规程》操作，分离培养时应用全自动分枝杆菌培养监测仪。

1.2.5涂片检测法

以中国防痨协会发布的《结核病诊断细菌学检验规程》为操作标准，用萋-尼氏抗酸染色法，结果观察用油镜，阳性判断标准为≥3条抗酸杆菌/300视野。

1.3 观察指标

对比分析4种检测的结核杆菌阳性率。

1.4 统计学分析

使用SPSS23.0软件对研究中所得数据进行记录和分析，计数资料采用率(%)表示，行χ2检验。当组间差异较大时，呈现统计学意义(P<0.05)。

2 结果

菌阳肺结核组检测阳性率：FQ-PCR法明显高于结核抗体法、涂片法，差异呈统计学意义(χ2=10.220/31.540，P<0.05)；FQ-PCR法与培养法相同，差异无统计学意义(χ2=0.000，P>0.05)。菌阴肺结核组检测阳性率：FQ-PCR法明显高于结核抗体法、涂片法，差异呈统计学意义(χ2=14.292/39.030，P<0.05)；FQ-PCR法略高于培养法，差异无统计学意义(χ2=2.276，P>0.05)。与对照组相比较，菌阳肺结核组和菌阴肺结核除了涂片法，其它方法均明显更高，组间对比差异呈统计学意义(P<0.05)。4种检测方法有着不同的敏感性，菌阴肺结核和菌阳肺结核组FQ-PCR法、培养法的阳性率均明显高于结核抗体法和涂片法，差异存在统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 4种检测中结核分支杆菌的阳性率[n(%)]

3 讨论

结核病一直都是影响人类健康且具有传染性的疾病，为了控制病情蔓延、提升患者的生存质量，要及早进行诊断和治疗[3]。目前该病的诊断方式主要是细菌学检验，痰涂片镜检是常规方法，具有经济、无创、简单等特点，不过会受到多种因素干扰，所以准确性不高，特别是在支气管结核病的诊断中效果不理想，所以逐渐被灌洗液检测替代。通过纤维支气管镜获得肺泡灌洗液标本，该标本中细菌浓度高、污染低，从而诊断结果更有保障，但是不同的检测方法对结核杆菌的检测结果不同，诊断效果也存在一定差异性。

涂片检测法属于经济、快捷、简便的方式，不过检查率仅为30%～40%，也不能区分非结核杆菌和结核杆菌，所以灵敏度、特异性均不高；且检测液难以控制定量，也就影响了最终诊断结果。如今，分子生物学技术不断更新，FQ-PCR检测技术被逐渐应用，它集光谱技术、杂交技术、核酸扩增技术于一身，检测环境为封闭状态，可以避免受到外界因素干扰，配合特异性探针随时检测，实现自动分析一体化，结核杆菌DNA<10copies也能稳定检测出。

本次研究中，菌阳肺结核组FQ-PCR法的阳性率为89.29%，明显高于结核抗体法的50%、涂片法的14.29%，差异呈统计学意义(P<0.05)；菌阴肺结核组的阳性率为82.14%，明显高于结核抗体法的32.14%，差异呈统计学意义(P<0.05)；对照组与菌阴肺结核组对比，FQ-PCR法阳性率差异显著，呈现统计学意义(P<0.05)。由此可证实，在支气管结核诊断中，荧光定量PCR检测法有着较高的诊断准确率，而且检测速度快，如果为了进一步提升诊断效果可以与其它检测方法联合使用。