6 种药用植物黄酮类物质含量测定

2021-01-29戴艳娇周佳民黄艳宁彭斯文朱校奇

湖南农业科学 2020年12期

谢进，戴艳娇，周佳民，黄艳宁，宋荣，彭斯文，朱校奇

（湖南省农业环境生态研究所，湖南长沙 410125）

黄酮类化合物（flavonoids）在植物界分布广泛，88 科近230 属植物中均有发现[1]，是药用植物中的主要活性成分之一。黄酮类化合物的主要生物活性包括：抗菌抗病毒功能[2]、镇痛祛痰平喘功能[3]、防止心脑血管疾病功能[4]、抗肿瘤抗癌功能[5]、抗氧化清除自由基功能[6-7]等。

试验选用的百合、玉竹、白术、全瓜蒌、葛根、玄参均为当前主要药用植物的研究对象，对其进行化学成分进行研究分析，有助于后续的品质分析。薛梅等[8]对龙牙百合的鳞茎总黄酮提取工艺进行研究，通过最佳提取条件，得到百合鳞茎的总黄酮含量为（3.224±0.051）%；王京京等[9]在玉竹总黄酮提取综述中提到，通过低共熔溶剂提取法得到玉竹块茎的总黄酮含量为2.013%；杨小红等[10]对白术总黄酮提取工艺进行研究，得到总黄酮含量为1.329%；韩晓强等[11]通过正交试验优化了瓜蒌总黄酮的提取工艺，得到的总黄酮含量为0.859%；王锐等[12]通过超声波辅助提取法得到葛根的总黄酮含量为2.76%；宋玲玲等[13]对玄参的总黄酮提取工艺进行优化，得到总黄酮含量为5.625%。

通过这些研究可以发现，百合等6 种药用植物中的黄酮含量并不高，参考Liu 等[14]关于建立植物激素方法的思路，采用黄秋葵黄酮类物质的提取检测方法[15]对上述6 种药用植物的黄酮类物质进行含量测定，由于采用了超高效液相色谱-质谱联用仪，可以检测到纳克级的物质，且具备较为完整的黄酮质谱库，这为试验样品黄酮物质的提取分离鉴定提供了稳定的技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试验材料

百合鳞茎、玉竹块茎、白术块茎、瓜蒌果实、葛根、玄参根，于2015 年12 月在湖南省农业科学院高桥基地采集。样品采收，烘干，磨粉后过20 目筛，称重备用。

主要试剂：芦丁标准品（纯度99%）、黄芩素标准品（纯度99%）、黄芩苷标准品（纯度99%）、柚皮素标准品（纯度99%）、槲皮素标准品（纯度99%），均购于Sigma 公司；无水乙醇（分析纯，中国化工）；乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯），德国默克公司。

主要试验仪器：BX5200H 超声波清洗仪（上海新苗医疗器械制造有限公司）；WB-2002 水浴锅（郑州长城科工贸有限公司）；1260-6460 液质联用仪（美国安捷伦公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 验证试验方法的普遍性、稳定性、重复性分别将芦丁、黄芩苷、槲皮素、柚皮素及黄芩素标样配置成1 mg/mL 的标准原液，将5 种标样混合，稀释成6 个浓度梯度（0.5 、2、10、100、500、2 000 μg/L），制作标准曲线，并取3 组浓度梯度（2、100、500 μg/L）对黄酮提取分离检测方法[14]进行评估，以验证试验方法的稳定性及重复性。

1.2.2 6 种药用植物黄酮类物质含量检测准确称量百合鳞茎、玉竹块茎、白术块茎、瓜蒌果实、葛根、玄参根干粉2.0 g，加入20 mL 75%乙醇溶液，超声提取75 min，进行黄酮提取分离检测，对芦丁、黄芩素、黄芩苷、槲皮素和柚皮素这5 种黄酮类物质的含量进行比较分析。

2 结果与分析

2.1 试验方法验证结果分析

如表1 所示，该方法重现性好，具有良好的稳定性和精密度。由于采用质谱检测，可以排除干扰离子，使得检测结果更加准确。从图1 可知，芦丁、黄芩苷、槲皮素、柚皮素和黄芩素色谱峰完全分开，色谱峰比较对称，没有较明显的拖尾现象，说明色谱条件基本满足试验要求。

2.2 6 种药用植物中黄酮类物质含量比较

百合鳞茎、玉竹块茎、白术块茎、瓜蒌果实、葛根、玄参根通过提取分离得到一定量的芦丁、黄芩苷、槲皮素、柚皮素和黄芩素。从表2 可以看出，在芦丁、黄芩素、黄芩苷、槲皮素和柚皮素这5种黄酮类物质中，白术块茎仅含有0.94 μg/g 的柚皮素；玉竹块茎中槲皮素含量为2.96 μg/g，柚皮素含量为3.96 μg/g；瓜蒌果实中槲皮素含量为37.12 μg/g，且含有1.80 μg/g柚皮素；葛根中槲皮素、柚皮素和黄芩素的含量分别为1.17、6.72 和2.52 μg/g；玄参根中芦丁、黄芩苷、槲皮素和柚皮素的含量分别为5.65、0.25、4.90 和1.45 μg/g；百合鳞茎含有5 种黄酮类物质，其中芦丁的含量达到25.31 μg/g。

3 结论

试验结果表明，尽管芦丁具有与总黄酮相似的结构，若仅仅是测定药用植物总黄酮中的指标性成分，可以用来粗略估算总黄酮含量，但随着对黄酮类物质研究的不断深入，多采用高效液相色谱甚至液质联用技术对黄酮类物质进行含量测定，检测结果更加准确；同时试验结果也说明该黄酮类物质提取检测方法适用于多种药用植物的黄酮类化合物含量测定，方法灵敏度高，最低检测限低至0.1 μg/L，同时该检测方法可以不断添加新的黄酮类物质标样，通过黄酮类物质质谱数据库，使植物样品中黄酮类物质能够得到更全面地比较分析。