血清Lipocalin-2、CEA、CA125联合检测对肺癌的诊断价值

黄远虹 张知 刘小勇

[摘要] 目的 探讨血清脂质运载蛋白-2（Lipocalin-2）、癌胚抗原（CEA）和糖类抗原125 （CA125）联合检测对肺癌的诊断价值。 方法 选取2020年1—12月于本院就医的54例确诊肺癌患者及60名健康体检者作为试验组及对照组。采用ELISA法检测血清Lipocalin-2水平，用罗氏cobas8000全自动生化分析仪检测CEA和CA125含量，并计算受试者工作特性曲线（ROC曲线）。 结果 肺癌患者血清Lipocalin-2（239.04±98.15）ng/mL、CEA（6.04±5.21）ng/mL和CA125（25.64±22.98）U/mL的浓度均显著高于健康体检人群（P<0.05）。肺癌患者血清Lipocalin-2、CEA和CA125及三者联合检测ROC曲线下面积分别为0.848、0.744、0.784及0.970，三者联合检测的诊断效能显著高于三者单独及CEA+CA125联合的诊断效能。 结论 血清Lipocalin-2、CEA和CA125水平对肺癌的诊断有重要意义，联合检测可显著提高肺癌的诊断效率。

[关键词] 脂质运载蛋白-2;癌胚抗原;糖类抗原125;肺癌;联合检测

[中图分类号] R446.11          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2021）33-0146-04

[Abstract] Objective To explore the diagnostic value of combined detection of serum lipocalin-2， carcinoembryonic antigen （CEA） and carbohydrate antigen 125（CA125） in lung cancer （LC）. Methods A total of 54 patients confirmed as lung cancer and 60 healthy people admitted to our hospital from January to December 2020 were selected as the experimental group and control group. Serum Lipocalin-2 level was detected by ELISA， CEA and CA125 content were detected by cobas8000 automatic biochemical analyzer （Roche）， and the receiver operating characteristic （ROC） curve was calculated. Results The levels of serum Lipocalin-2（239.04±98.15） ng/mL， CEA（6.04±5.21） ng/mL and CA125 （25.64±22.98） U/mL in LC patients were significantly higher than those in healthy people（P<0.05）. The areas under the ROC curve of serum Lipocalin-2， CEA and CA125 in LC patients were 0.848， 0.744， 0.784 and 0.970， respectively. The diagnostic efficiency of the combined detection of the three indexes was significantly higher than that of the combined detection of the three alone and the combined detection of CEA and CA125. Conclusion Serum levels of Lipocalin-2， CEA and CA125 are important for the diagnosis of LC， and combined detection can significantly improve the diagnostic efficiency of LC.

[Key words] Lipocalin-2; Carcinoembryonic antigen; Carbohydrate antigen 125; Lung cancer; Combined detection

肺癌是全球最常見的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁人类的生命和健康，其发病率及病死率居各类恶性肿瘤的首位[1]。早期肺癌往往无明显症状，多数肺癌患者就诊时已为晚期，导致治疗效果不佳[2]。因此，早期诊断成为治疗肺癌的关键。血清肿瘤标志物的异常往往早于临床症状[3]，因此在肺癌筛查、诊断、判断预后和转归方面发挥着愈来愈重要的作用。据报道，脂质运载蛋白-2（Lipid carrier protein-2，Lipocalin-2）在多种癌症的发生、发展和转移中发挥重要作用，可作为肿瘤诊断标志物[4]。目前多采用多种肿瘤标志物联合检测以提高诊断率，本研究旨在探讨血清肿瘤标志物Lipocalin-2、癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）和糖类抗原125（Carbohydrate antigen 125，CA125）三者联合检测在肺癌诊断中的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1—12月于本院就医的54例确诊肺癌患者及60名健康体检者作为试验组及对照组。肺癌患者纳入标准：试验组均为初诊并经病理或细胞学检查确诊为肺癌，且术前未行放疗、化疗、靶向药物治疗及生物治疗等。排除标准：①合并其他部位肿瘤者;②收集标本前已进行手术、放射治疗、化学药物治疗、免疫治疗者;③严重肝、肾、心脏功能异常者[5-6]。对照组男38名，女22名，年龄45～86岁，平均年龄（64.75±8.00）岁;试验组男37例，女17例，年龄51～89岁，平均年龄（66.26±9.40）岁。两组性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究通过医院医学伦理委员会批准并取得患者的知情同意。

1.2 标本采集与检测

所有研究对象于清晨空腹抽取静脉血4 mL，3500 r/min离心10 min，分离血清，并于-80℃冷冻保存，待统一检测。血清 CEA、CA125使用罗氏cobas 8000全自动生化分析仪检测（检测试剂盒均购自罗氏公司，试剂批号分别为46415801和44981701），并使用英国朗道实验诊断有限公司提供的质控品（批号1910EC）进行质量控制。运用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清Lipocalin-2的表达情况，试剂盒购自艾博抗（上海）贸易有限公司（批号：ab119600）。标准品用稀释液倍比稀释用于绘制标准曲线，各样本稀释100倍预处理。将制备好的标准品和稀释后的样本100 μL加入到各反应孔中，设3个复孔检测，4℃孵育90 min。清洗后拍干，每孔加入生物素化抗人Lipocalin-2抗体100 μL，37℃孵育60 min。洗涤液清洗后，每孔加入100 μL亲和素-生物素-过氧化物酶复合物工作液，37℃孵育30 min。洗涤拍干后，每个孔中加入已配制好的TMB显色剂90 μL，37℃暗孵育15～25 min后加入终止液，于酶标仪（PHOmo，安图生物）450 nm处检测吸光度，并根据标准曲线求出各样本的Lipocalin-2含量。定标曲线范围为156～10 000 pg/mL，如超过线性范围则需再次增加稀释倍数复检。本试验严格按照试剂盒说明书规定保存试剂、规范操作，且每次实验时均制作标准曲线。

1.3 统计学方法

检测数据采用SPSS 22.0统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，统计分析采用校正t检验。采用Pearson法对三种标志物的相关性进行分析;对单项及联合检测结果作图，绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线），计算 ROC曲线下面积（AUC），并运用MedCalc 20.009软件比较各组间AUC差异，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清Lipocalin-2、CEA和CA125三种标志物检测结果比较

肺癌患者血清中Lipocalin-2、CEA和CA125三种肿瘤标志物的含量均高于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 三种血清标志物的Pearson相关性分析

Pearson相关分析显示，CEA与CA125（r=0.622，P<0.01）及Lipocalin-2（r=0.669，P<0.01）呈正相关;CA125与Lipocalin-2（r=0.684，P<0.01）也呈正相关。

2.3 血清Lipocalin-2、CEA和CA125三种标志物联合检测对肺癌患者的诊断效能

三种血清标志物对肺癌的诊断效率比较见表2，根据Youden指数诊断肺癌的最佳预测临界值Lipocalin-2为178.825 ng/mL，CEA为2.265 ng/mL，CA125为15.325 U /mL，其中，Lipocalin-2的特异度高达96.7%，远高于CEA及CA125;Lipocalin-2的阳性预测值及阴性预测值均高于CEA及CA125。对于肺癌诊断三种血清肿瘤标志物CEA、CA125和Lipocalin-2 单独检测、两两联合检测及三者联合检测的ROC曲线见封三圖9、表3。ROC曲线下面积显示了这几个标志物在肺癌诊断中的临床应用价值，其中CEA+CA125+Lipocalin-2诊断肺癌的AUC值最大（0.970），明显大于单一诊断和CEA+CA125联合诊断时的 AUC值（P<0.05）。而CEA+CA125+Lipocalin-2、CEA+Lipocalin-2、CA125+Lipocalin-2三组间的联合诊断AUC值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

3讨论

随着医疗技术的发展，近年来大多数癌症患者的生存率有了显著提高，然而目前数据显示，肺癌患者的5年相对生存率仅为19%，其原因主要是肺癌患者早期症状不明显，大多数患者被诊断时已为晚期，失去了手术根治的机会，而放疗、化疗、分子靶向治疗等治疗方法的疗效有限，导致肺癌患者预后极差[7-8]。因此，早期发现、早期诊断是改善肺癌预后的关键。影像学是肺癌诊断的常用方法，组织病理学检查则是诊断的金标准，但上述检查对肺癌早期诊断的价值有限，且诊断费用高、创伤性较大[9]。因此，寻找更简单有效的早期诊断肺癌的方法显得十分必要。

血清肿瘤标志物的出现要早于临床症状，当血清肿瘤标志物达到一定水平时可提示某种肿瘤的存在，对肿瘤的早期诊断具有重要意义。另外，肿瘤标志物的水平变化也可为肿瘤疗效观察、预后评估等方面提供重要依据[10]。因此，血清肿瘤标志物的检测逐渐受到临床医生的关注。目前，临床上主要以CEA，CA125，神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific enolase，NSE），鳞状上皮细胞癌抗原（Squamous cell carcinoma antigen，SCC），细胞角蛋白19片断（Cytokeratin-19-fragment，CyFRA21-1）等[11-12]作为诊断肺癌的重要标志物。然而，上述肿瘤标志物的诊断效果依然不能令人满意，尚缺乏一种对肺癌的诊断具有较高敏感度及特异度的肿瘤标志物。因此，寻求新的、更准确的肺癌血清学肿瘤标志物很有必要。

Lipocalin-2是一种25kDa的外分泌型糖蛋白，具有多种重要的生物功能，广泛参与生命过程及多种疾病的发生与发展[13]。Lipocalin-2在大多数人類组织中表达水平较低，但在乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌和胆管癌等肿瘤中呈高表达状态，且高水平的Lipocalin-2与细胞增殖、血管生成、细胞侵袭和转移相关[14-15]。研究表明[16]，高表达的Lipocalin-2可以减少肺腺癌细胞 A549 凋亡的发生，且Lipocalin-2在肺腺癌发展过程中逐渐升高，与促炎细胞因子和炎症基因集呈正相关，进一步促进病情恶化[17]。肺癌患者血清Lipocalin-2明显高于健康人群[18]，且在肺癌骨转移患者中的表达水平显著高于原发性肺癌患者[19]，上述研究提示，Lipocalin-2既可以作为一种潜在的新的治疗靶点，也可以作为一种有价值的诊断和预后生物标志物。然而，目前关于Lipocalin-2对肺癌诊断价值的研究极少。

本研究运用ELISA法检测54例肺癌患者及60名健康人群血清Lipocalin-2的表达水平，发现肺癌患者的Lipocalin-2含量明显高于健康人群。单一标志物检测出现假阳性或假阴性会降低诊断效率，两项或多项标志物联合检测可提高诊断效率。因此，联合检测Lipocalin-2与常规诊断指标CEA及CA125，结果发现Lipocalin-2与CEA、CA125之间均呈正相关。ROC 曲线分析结果显示，血清Lipocalin-2水平对肺癌患具有良好的预测作用，敏感度和特异度均超过75%，其阳性预测值及阴性预测值均高于CEA及CA125。单独诊断时，Lipocalin-2的诊断效能明显高于CEA和CA125，CEA、CA125分别与Lipocalin-2联合检测后，AUC均高于0.9。当三者联合检测时，AUC高达0.970，明显高于单独诊断及CEA+CA125联合诊断时的AUC值，大大提高对肺癌诊断的准确性。

综上所述，血清Lipocalin-2对肺癌诊断具有较高的临床应用价值，并有望成为肺癌筛查和诊断的潜在新型肿瘤标志物。Lipocalin-2联合常规的肿瘤标志物CEA、CA125可显著提高对肺癌诊断的准确性，值得临床推广使用。

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（收稿日期：2021-05-28）