HPLC法测定养阴润肺糖浆中梓醇的含量

何凤兰 郑晓阳 冯丽萍 黄文锋

1.广东省阳江市人民医院药学部，广东 阳江 529500；2.广东阳江市检测检验中心，广东 阳江 529500

养阴润肺糖浆是我院自拟处方中成药制剂，由地黄、麦冬、玄参、川贝母、白芍、牡丹皮等8味药材组成[1],深得广大患者的认可，销量较大。养阴润肺糖浆主治阴虚肺热引起的咳嗽、咽干、喉痛声哑、痰中带血等症，疗效显著。但其自拟标准中还没有含量测定项目，地黄在该处方中属君药，针对地黄的有效成份是梓醇进行检测，以控制其内在有效成分，同时将其作为养阴润肺糖浆的质量控制指标，保证产品质量，提高疗效，故增加含量测定项目。本实验采用HPLC法，能有效分离养阴润肺糖浆中地黄的主要成分梓醇[2]，很好地控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SHIMADZU—LC20A型高效液相色谱仪(日本岛津,UV检测器)；FA135S型电子分析天平(上海精密仪器仪表有限公司)；KQ-3200DV型数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)及各种玻璃仪器[3]。

1.2 试药 梓醇对照品(批号：110808-200508，中国药品生物制品检定所)；供试品：养阴润肺糖浆(批号：180327，180417，180424)，缺地黄的养阴润肺糖浆(批号：180314，阳江市人民医院)；乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 梓醇照高效液相色谱法[4](通则0512)[5]色谱条件与系统适用性试验。色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，TM-C18(4.6 mm×150 mm，0.5 μm),流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：25 ℃。进样量10 μL，流速1 mL·min-1。结果在上述色谱条件下，理论塔板数按梓醇峰计算不低于5000，梓醇分离良好，阴性无干扰，如图1～3所示。

图1 养阴润肺糖浆样品液HPLC图

图2 梓醇对照品液HPLC图

图3 缺地黄的养阴润肺糖浆阴性对照液HPLC图

取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，检测，记录供试品色谱图，结果测得梓醇峰理论塔板数为5230,分离度为2.431,拖尾因子为1.03，符合规定。

2.2 对照溶液的制备 精密称取干燥至恒重的梓醇对照品10.0 mg，加流动相定容至50 mL，摇匀，得0.2 mg/mL的梓醇对照品溶液；精密量取上述溶液0.5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得浓度为10 μg/mL的梓醇对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取养阴润肺糖浆2.0 mL，加流动相定容至50 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照液的制备 本院的投料处方去掉地黄，制法: 按照本院投料处方与工艺，制成缺地黄的养阴润肺阴性对照糖浆1000 mL(批号：180314，阳江市人民医院)，再按“2.3供试品溶液的制备”方法制备缺地黄的阴性对照溶液，注入高效液相色谱仪中，测定，结果阴性糖浆在梓醇峰相应保留时间位置没有干扰，如图3所示。

2.5 线性关系考察 精密吸取上述制得的0.2 mg/mL的梓醇对照品溶液1、3、5、7、9 mL分别置100 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得2 μg/mL、6 μg/mL、10 μg/mL、14 μg/mL、18 μg/mL的标准液。分别吸取10 μL，注入高效液相色谱仪中，测量峰面积A。以对照品溶液浓度C为横坐标(X)，峰面积A为纵坐标(Y)[6]，绘制标准曲线：Y=5815.5X-3439.1，r=0.9996。结果梓醇在2～18 μg范围内具有良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密量取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定梓醇的峰面积A，结果平均峰面积为13616.3，RSD=0.14%，结果表明精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批号(180327，含量为0.2765 mg/mL)的养阴润肺糖浆6份，按“2.3供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，测定，结果RSD为0.5%，表明本方法重现性良好。

2.8 稳定性试验 取同一养阴润肺糖浆(批号：180327)供试品溶液，分别于供试品溶液制备后的0、2、4、6、8 h进行测定，结果RSD=0.05%，表明供试品溶液在制备后8 h内稳定。

2.9 准确度(加样回收率)试验 取已知含量的养阴润肺糖浆(批号：180327、0.2765 mg/mL)各6份，置50 mL量瓶中，再分别加入梓醇对照品适量，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得加样回收供试品溶液。吸取供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪中，计算回收率，结果平均回收率为99.4%(n=6)，RSD=0.6%，表明本法准确度良好，见表1。

2.10 含量测定 取3批养阴润肺糖浆，分别按“2.3 供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，吸取供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪中，测定并计算含量，结果见表2。

表1 准确度试验 (n=6)

表2 含量测定

3 讨论

由于梓醇性质的影响，检测波长选择210 nm；梓醇的吸收峰较大且干扰小，效果较好,故选择210 nm波长。

文献报道[7]梓醇 HPLC 图谱中梓醇色谱峰形不太好，与相邻峰的分离度不高，对实验结果的准确性易造成影响。本实验通过实验进行了合理调整，确定实验的流动相条件以乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)为流动相。由于供试品杂质峰比较多，可在供试品制备过程中，先加10 mL甲醇，过微孔滤膜(0.45 μm)，挥干，再加流动相溶解并定容至50 mL，供试品杂质浓度降低，达到更理想的分离效果。

本方法快速、方便，分离度好，无其他成分干扰,适合于养阴润肺糖浆中梓醇的含量测定。