RNAH19在甲状腺乳头状癌中的表达及对侵袭的影响

李新秋，舍 勇，陈 军

（仁怀市人民医院肝胆外科，贵州 仁怀 564500）

甲状腺乳头状癌（PTC）具有恶性程度低、生长缓慢的特征，经手术治疗后预后较好，但仍有部分患者因癌细胞侵袭而导致预后较差。因此，寻求PTC肿瘤标志物对于该疾病的早期诊断和治疗具有重要价值。长链非编码RNA(lncRNA)具有稳定性高、组织及疾病特异性，可在肿瘤患者外周循环中检测出该物质[1]。目前，lncRNA逐渐用于PTC诊断中，研究发现H19在甲状腺肿瘤组织中表达下调，与患者预后密切相关，但对于lncRNA H19与PTC的关系仍处于探究阶段。为进一步寻求更准确的PTC诊断方式，本研究旨在探究lncRNA H19在PTC中的表达及对侵袭的影响。具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年1月～2019年12月于我院行手术治疗的50例发生肿瘤侵犯周围组织PTC患者资料，纳入观察组，并选同期50例肿瘤未侵犯周围组织的PTC患者资料作为对照组。对照组男16例，女34例；年龄23～55岁，平均（35.24±5.80）岁。观察组男17例，女33例；年龄24～56岁，平均（35.60±5.85）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），研究有可对比性。

1.2 方法

（1）标本采集：空腹无菌采取5mLEDTA抗凝血，静置30min后1200g离心10 min，取上清液于4℃下1200 g再离心10 min，取250 μl血浆加入750 μl TRIzol® LS试剂后-80℃保存。收集患者手术时新鲜肿瘤组织，于-80 ℃下冻存直至RNA提取。（2）总RNA提取：严格按TRIzol® LS试剂（美国Invitrogen公司）说明书进行总RNA、肿瘤组织提取，溶于DEPC处理的水中。（3）实时定量PCR检测：根据Genebank中H19及内参GAPDH的序列，利用Primer 5.0软件设计引物，由上海生工生物技术科技有限公司合成引物。利用SYBR® Advantage® qPCR Premix（大连TaKaRa公司）进行PCR扩增扩增结束后得到Ct值，采用 2-△△Ct法计算H19的表达水平。

1.3 评价指标

比较两组患者的lncRNA H19表达水平，并绘制受试工作者曲线（ROC）检验lncRNA H19表达水平预测PTC预后的价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行数据处理，以“±s”表示计量资料，组间用独立样本t检验，绘制ROC曲线得到lncRNA H19表达水平预测PTC预后的曲线下面积（AUC），AUC＞0.7预测价值高，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 lncRNA H19表达水平

观察组的lncRNA H19表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者lncRNA H19表达水平对比（±s）

表1 两组患者lncRNA H19表达水平对比（±s）

组别 lncRNA H19对照组(n=50) 3.05±0.61观察组(n=50) 4.03±0.82 t 6.780 P 0.000

2.2 lncRNA H19表达水平预测PTC预后的价值分析

将lnc RNA H19表达水平作为检验变量，将PTC预后状态作为状态变量，将预后良好设为1，将预后不良设为2，绘制ROC曲线（见图1）得到lnc RNA H19表达预测PTC预后的AUC为0.910，最佳截断值为3.59，95%置信区间0.854-0.966，P＜0.001，敏感度为83.3%，特异度为62.50%。提示ncRNA H19表达水平预测PTC预后的价值较理想。

图1 lncRNA H19表达水平预测PTC预后的ROC曲线分析

3 讨 论

PCT患者经甲状腺切除术治疗后病死率较低。但PTC肿瘤细胞侵袭会影响预后，需对PTC患者进行早期准确的诊断。而选择有效的肿瘤标志物对于提高早期诊断准确性具有重要价值。目前，已有报道显示lncRNA H19在膀胱癌、乳腺癌中有促进肿瘤增殖作用，但有关其在PTC中的作用报道较少，因此，本研究探究lncRNA H19与PTC的侵袭的关系。

本研究结果显示，观察组的lncRNA H19表达水平高于对照组，说明lncRNA H19在侵袭性PTC癌组织中呈高表达。绘制ROC曲线得到lnc RNA H19表达诊断PTC的AUC为0.910，敏感度较高，提示ncRNA H19表达水平预测PTC预后的价值较理想。分析原因在于，lncRNA为转录本长度常规200nt的RNA分子，以RNA的形式对基因表达水平进行调控，其存在于转录调控、转录后调控、表观遗传调控等多种层面上，在胚胎发育调节、亚细胞结构分布、干细胞定向分化等方面具有重要作用[2]。因此，lncRNA表达异常会导致疾病发生。而H19长度为2300bp，位于染色体11p15.5上，可与胰岛素样生在因子2相互作用，对生长控制具有重要作用，且可在胚胎发育过程中表现父系印记的lncRNA分子。lncRNA H19在肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭过程中具有重要作用，其表达上调提示了致癌属性。刘娜等[3]相关研究显示lncRNA H19在甲状腺癌中呈高表达，其表达水平会影响甲状腺癌的预后，有望成为抗肿瘤治疗的新靶点，与本研究结果相似。不同之处在于该研究也对miRNA let7表达与甲状腺癌的病理特征关系进行探究，而本研究主要分析lncRNA H19表达与PTC的关系。本研究因样本量较少，研究结果可能存在误差，不足之处有待未来扩大样本量进一步研究。

综上所述，lncRNA H19在侵袭性PTC癌组织中呈高表达，可能与PTC细胞的增殖和侵袭密切相关，且预测PTC预后的价值较理想，可作为侵袭性肿瘤的标记物。