水蛭超微粉调节兔肝脏脂代谢相关酶活性研究

赵耀光，王留

水蛭超微粉调节兔肝脏脂代谢相关酶活性研究

赵耀光，王留

（商丘职业技术学院，河南 商丘 476100）

应用试剂盒检测添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂饲料喂养兔血液、肝脏组织上清液乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）、胆固醇7 α羟化酶（CYP7A1）的活性，研究水蛭超微粉对兔肝脏脂代谢相关酶活性的调节作用。结果表明，0.15 % 水蛭超微粉能够显著降低高脂饲料喂养兔ACC、FAS、HMGCR活性，显著提高（P<0.05）高脂饲料喂养兔CYP7A1活性。

水蛭，中药超微粉；高脂饲粮；脂代谢；酶活性

脂代谢是指脂类在生物有机体内的消化、吸收、远转、分解、转化、排泄等一系列生物转化过程，是机体的基本代谢活动之一，对机体血脂平衡和体脂沉积有重要的调节作用。脂代谢过程在脂代谢相关酶的作用下进行，脂代谢相关酶活性增强或降低会造成脂代谢紊乱，引起机体血脂的异常和体脂的过度沉积，引发代谢障碍综合性疾病，如内分泌失调、动脉粥样硬化性心血管疾病、肝功能障碍、神经功能紊乱等。临床应用活血化瘀类中药调节脂代谢是治疗脂代谢障碍综合性疾病的主要方法之一。水蛭超微粉是中药水蛭饮片经超微粉碎处理加工而成的一种粉状中药散剂，具有活血化瘀、舒肝通经、消肿止痛等功效。试验研究表明，水蛭超微粉能够调节高脂饮食诱导的兔血脂水平，提高机体的抗氧化功能，显著改善高脂饮食引起的血液流变学变化，恢复血液的正常流动性[1-2]。本研究以大耳白兔为试验动物，研究在高脂配方日粮饲喂条件下，添加不同剂量的水蛭超微粉对脂代谢相关酶活性的影响，探索水蛭超微粉降血脂和调节脂代谢作用的机理，为水蛭超微粉新型制剂的开发与利用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物分组与处理

50只3月龄健康大耳白兔在动物饲养室适应性饲养7 d后，随机分成5组，每组10只。正常对照组饲喂基础日粮，高脂对照组饲喂高脂配方日粮，水蛭超微粉低、中、高剂量组分别饲喂添加0.05 %、0.10 %、0.15 % 水蛭超微粉的高脂配方日粮。试验期40 d，试验期内每天观察兔的饮食情况和发病情况。

1.2 水蛭超微粉的制备

中药水蛭超微粉由课题组自制，制备方法详见参考文献[1]。

1.3 样本的采集及处理

1.3.1 血清样品制备 试验期结束后，每组随机抽取试验兔5只，心脏采血分离血清，-20 ℃ 保存备用。

1.3.2 肝组织上清液制备 试验兔采血后，颈椎脱位致死，迅速打开腹腔切取肝脏组织0.5 g，用冷的生理盐水冲洗肝脏组织并用滤纸吸干表面残留液体，加入预冷的灭菌生理盐水5 ml，冰浴中匀浆处理，匀浆液以2000 r/min冷冻离心10 min，取上清液-20 ℃ 冻存。

1.4 检测指标及方法

血清和肝脏组上清液乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）、胆固醇7 α羟化酶（CYP7A1）活性检测采用试剂盒进行检测，试剂盒购于南京建成生物工程公司。

1.5 数据分析

试验数据采用“平均值±标准差”表示，用SPSS 20.0统计分析软件进行单因素方差分析，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 水蛭超微粉对兔血清脂代谢相关酶活性的影响

由表1可知：高脂对照组兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05），HMGCR酶活性与正常对照组相比均差异不显著（P＞0.05）。0.05 % 剂量组兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05），与高脂对照组相比均差异不显著（P＞0.05）；HMGCR酶活性与正常对照组、高脂对照组相比均差异不显著（P＞0.05）。0.10 % 剂量组兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05），与高脂对照组相比均差异不显著（P＞0.05）；HMGCR酶活性与正常对照组、高脂对照组相比均差异显著（P＜0.05）。0.15 % 剂量组兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异不显著（P＞0.05），与高脂对照组相比均差异显著（P＜0.05）；HMGCR酶活性与正常对照组、高脂对照组相比均差异显著（P＜0.05）。

2.2 水蛭超微粉对兔肝脏脂代谢相关酶活性的影响

由表2可知：高脂对照组兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05）。0.05%剂量组兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05），与高脂对照组相比均差异不显著（P＞0.05）。0.10 % 剂量组兔血清ACC、FAS、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异显著（P＜0.05），与高脂对照组相比均差异不显著（P＞0.05）；HMGCR酶活性与正常对照组比均差异不显著（P＞0.05），与高脂对照组相比均差异显著（P＜0.05）。0.15 % 剂量组兔血清ACC、FAS、HMGCR、CYP7A1酶活性与正常对照组相比均差异不显著（P＞0.05），与高脂对照组相比均差异显著（P＜0.05）。

表1 兔血清脂代谢相关酶活性检测结果

注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P＜0.05）；字母相同表示差异不显著（P＞0.05）。下表同

表2 兔肝脏脂代谢相关酶活性检测结果

3 讨论与结论

3.1 水蛭超微粉对兔ACC酶活性的影响

乙酰辅酶A羧化酶（ACC）催化乙酰辅酶A产生丙二酸单酰辅酶A，丙二酸单酰辅酶A在脂肪酸合成酶的作用下合成脂肪酸[3]。乙酰辅酶A羧化酶活性增强时会引起动物血液和肝脏内脂肪合成量增多，增加高脂血症和脂肪肝的发病概率。本试验显示，在饲粮中添加0.15 % 剂量的水蛭超微粉能够显著降低高脂饮食兔血清和肝脏内ACC活性。

3.2 水蛭超微粉对兔FAS酶活性的影响

脂肪酸合成酶（FAS）是催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A生成长链脂肪酸，长链脂肪酸与甘油发生酯化反应生成甘油三酯，脂肪酸合成酶的活性决定了甘油三酯的合成速度。甘油三酯是动物血脂和体脂的主要成分，当脂肪酸合成酶活性增强时，动物机体内甘油三酯合成量增加，导致动物血脂含量升高引发高脂血症，或体脂过度沉积引发肥胖[3]。刘作华等[4]研究表明，提高猪日粮的能量水平能够显著提高猪肌肉组织、肝脏组织、脂肪组织内脂肪酸合成酶的活性，使动物体内脂肪的合成能力提高，体脂沉积增加。本试验结果证实，在饲粮中添加0.15 % 剂量的水蛭超微粉能够显著降低高脂饮食兔血清和肝脏内FAS活性。

3.3 水蛭超微粉对兔HMGCR酶活性的影响

羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）催化肝脏胆固醇的合成，调节HMGCR的活性可以维持机体血清胆固醇代谢的平衡。饲料中胆固醇和脂肪的含量可以影响HMGCR活性[5]梁婧婧等[6]试验发现，饲粮中添加甘薯糖蛋白能够竞争性抑制羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性，减少胆固醇的生成。陈咏然等[7]试验表明，添加50 mg/kg染料木黄酮可显著降低高能日粮喂养肉鸡肝脏羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的活性。本试验发现，饲粮中添加0.1 % ~ 0.15 % 水蛭超微粉能够显著降低高脂饮食兔血液和肝脏HMGCR活性。

3.4 水蛭超微粉对兔CYP7A1酶活性的影响

胆固醇7 α羟化酶（CYP7A1）调节体内胆固醇和胆汁酸的代谢，增强CYP7A1活性可以促进肝脏内胆固醇转化为胆汁酸，促进体内胆固醇的排出，所以调节CYP7A1活性是调节机体胆固醇代谢的重要途径[8]。李瑞[5]研究显示，乳杆菌能够显著提高育肥猪肝脏中CYP7A1活性。王先科[9]试验结果表明，每天给高脂饲喂的SD大鼠灌服苜蓿皂苷150~240 mg·kg-1体重，能够极显著提高大鼠肝脏CYP7A1活性。本试验研究发现，0.15 % 水蛭超微粉能够显著增强高脂饮食兔血液和肝脏CYP7A1活性。

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[2] 王志刚, 刘秀玲, 王留. 中药水蛭超微粉对大耳白兔抗氧化功能和血液流变学的影响[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2018（22）: 182-184.

[3] 单安山, 徐奇友. 动物脂肪代谢与调控[J]. 东北农业大学学报, 2004, 35（2）: 129-134.

[4] 刘作华, 陈代文, 龙定彪, 等. 日粮能量水平对猪脂肪酸合成酶和激素敏感酯酶的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2009, 45（5）: 31-33.

[5] 李瑞. 德氏乳杆菌对育肥猪胆固醇代谢的影响研究[D].长沙: 湖南农业大学, 2014.

[6] 梁婧婧, 苏锡辉, 孟宪军, 等. 甘薯水溶性糖蛋白对大鼠脂肪肝及羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的影响[J]. 食品科技, 2013, 38（8）: 95-97.

[7] 陈咏然, 张明, 田宁, 等. 染料木黄酮对高能日粮肉鸡胆固醇代谢的影响[J]. 中国畜牧杂志, 2018, 54（2）: 93-98.

[8] 张梦娜. D-松醇对高血脂仓鼠胆固醇代谢的影响[D]. 天津: 天津科技大学, 2017.

[9] 王先科. 苜蓿皂苷调节大鼠胆固醇代谢的机制研究[D].郑州: 河南农业大学, 2011.

S853.72

A

1007-1733（2021）01-0017-03

河南省高等学校重点科研项目（20B230008）

（2020–10–05）