六神曲炮制及现代研究进展

尹 磊，朱月健，李冬梅，段体斌，葛德助

(1.安徽普仁中药饮片有限公司，安徽 亳州 236800；2.中药提取安徽省技术创新中心，安徽 亳州 236800；3.安徽济人药业有限公司，安徽 亳州 236800)

六神曲为面粉(麦粉)和其他药物混合后，经发酵而成的加工品，其一般制法为取面粉(麦粉)，与杏仁、赤小豆以及青蒿、苍耳、辣蓼汁或煎煮液混合均匀后发酵、切丁、干燥而成，其性温，味甘、辛，归脾、胃经，具有健脾和胃、消食调中等功效[1]。六神曲临床应用广泛，但主要化学成分尚不清晰，各省地方炮制规范和标准也具有一定差异性，历版中国药典至今未收载该品[2]。本研究主要对六神曲的古代文献记载内容以及现代炮制工艺、化学成分、药理作用和质量标准等文献资料进行综述分析，为制定统一的炮制加工标准提供参考。

1 六神曲炮制工艺历史沿革

1.1 古代炮制工艺

“曲”最早载于南北朝《雷公炮炙论》：“曲，凡使，捣作末后，掘地坑深二尺，用物裹，内坑中至一宿，明出，焙干用。”根据历代古籍记载，最早在宋代已记载“六神曲陈久者良，炒用”，虽然各个朝代所记载的炮制方法和组分比较相似，但其配方物料比例和发酵方法出入很大。具体内容见表1。

表1 六神曲古代炮制工艺

续表1

通过对历代古籍的搜集整理发现，不同朝代的制曲工艺都不尽相同，元代制神曲是用白面、生姜等，组方较少比较单一；到了明代则用白面、青蒿、赤小豆、杏仁、苍耳、野蓼等，虽然制曲的工艺各有出入，但其基本组方物料种类已和现代六神曲组方物料种类基本相同，并且发酵时间和发酵温度均提出在六月进行高温发酵，至表面生黄白衣，与当前发酵条件、发酵终点判断类似。

1.2 现代各省地方炮制方法

六神曲是发酵类中药的代表之一，各个地区的炮制工艺和标准不尽相同。北方地区多使用面粉，而南方地区麦麸用量较大，各原料比例也不同[3]，且包括辣蓼、青蒿和苍耳草鲜药与干品，直接榨汁和煎煮取汁混匀发酵，赤小豆与苦杏仁煮熟后发酵与生品粉碎直接发酵等。具体情况，见表2。

表2 六神曲现代炮制工艺

通过对各省份炮制标准的对比，发现各省标准规范中六神曲的组方虽有一定区别，但均主要由面粉(麦麸)、赤豆、苦杏仁和青蒿、苍耳草、辣蓼组成。主要区别在于物料的鲜用与干用以及赤小豆、苦杏仁的生熟制用及软材发酵形态等，浙江省制定的炮制规范15版限定单一发酵菌种，生产的成品相对品质稳定。同时根据以上炮制工艺方法记载，很多工艺方法较为简单，且不适合饮片企业大规模生产，需要进一步的优化。

2 六神曲现代研究

2.1 炮制工艺研究

目前六神曲的炮制用料种类基本固定，工艺相关的研究主要集中在物料配比、发酵条件和发酵菌种研究等。高慧[4]比较苍耳草、辣蓼与青蒿鲜品、干品以及直接干品粉碎投料发酵后成品的色谱图和酶活性，发现三种结果没有显著性差异，同时也比较了苦杏仁生品和煮后拌料发酵薄层图和酶活性，二者之间也没有显著性差异。程亦雄[5]通过筛选单一纯化菌种赛氏曲霉进行六神曲深层次液态发酵研究，并确定其工艺：面粉麦麸量12 g(比例为1∶6)，苦杏仁与赤小豆各0.48 g，青蒿、苍耳草、辣蓼各0.28 g，KH2PO40.20 g，150 mL清水混匀，发酵温度28 ℃，摇床转速180 r/min，发酵7 d，浓缩干燥。贾丹丹[6]通过分析六神曲发酵过程中的微生物种类，发现其呈现先上升后下降的趋势，并且最终分离鉴别的菌种包括细菌、真菌和酵母菌，对于六神曲物料的耐受性较强且均产生酶解活性，该项发现也证实了六神曲发酵时混合菌种的共同作用。相较于传统发酵工艺，当前关于六神曲的炮制工艺逐步延伸到单一菌种发酵或优势种群发酵，规范物料组方配比和发酵条件逐步固定，形成的产品质量也不断提升和可控。

2.2 化学成分研究

有关六神曲化学成分的研究较少，并且其发酵物料种类较多，发酵过程中的内在成分转化也较为复杂。练晶军[7]研究发现六神曲主要成分为挥发油、维生素B族、麦角固醇、苷类、淀粉酶和蛋白酶等。陈缤[8]分析发现，神曲发酵后青篙素和苦杏仁普色谱峰均消失，推测其在发酵过程中成分结构发生转化，并分离到发酵后新化合物，初步推断为十八碳烯酸。王丽芳等[9]比较分析六神曲发酵过程中使用青蒿等鲜品与干品的药效物质，结果显示鲜品组发酵槲皮苷等成分均显著高于基本组及干品组。张慧茹等[10]从六神曲氯仿提取物中分离得到11个长链烯酸类化合物，其中部分化合物具有抗炎活性。徐云等[11]通过分析六神曲发酵过程中多种消化酶活性动态变化，发现糖化酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶在发酵4天后达到高峰，随后逐步稳定，蛋白酶在发酵前4天变化不大，随后逐步增加并稳定。练晶军[7]分析发现，市场上六神曲淀粉酶活性及指纹图谱等均显示出较大差异，通过分析发酵过程中淀粉酶活性和指纹图谱变化，发现淀粉酶活性随着发酵时间延长而增加，并于7天后趋于稳定，指纹图谱显示信息组成在发酵3天后基本稳定。综上所示，六神曲作为多组分药物发酵品，其成分较为复杂，且发酵前后变化较大，并产生新化合物，需要对其发酵过程进一步分析，以明确其能够反映六神曲发酵程度的优劣。

2.3 药理作用研究

作为健胃消食要药，六神曲自古代即被临床使用，尤善消米面食。张红玲等[12]分析食积小鼠灌服六神曲后的胃泌素、胆碱酯酶以及血清中NO等的含量变化，发现小鼠胃泌素、胆碱酯酶的分泌增加，血清中NO的含量降低。王秋红等[13]研究麸炒六神曲乙酸乙酯提取部位的抗菌效果，发现最低抑菌浓度为0.64 g·L-1，最低杀菌浓度为0.65 g·L-1。郭丽双等[14]通过实验研究，破坏小鼠肠道微生物菌群，形成肠道组织溃疡，并灌服六神曲液，以自然恢复为对照，结果发现实验组肠道溃疡恢复速度较快，也证实了六神曲对于小鼠肠道溃疡的修复作用。刘峰等[15]通过分析六神曲对大鼠肠平滑肌收缩作用，发现六神曲能够增强对大鼠肠平滑肌的收缩作用。庄彦华等[16]通过比较患有肠易激综合征(IBS)患者服用六神曲煎液前后粪便乳酸杆菌和双歧杆菌以及肠杆菌的数量变化，结果显示服药后患者粪便中有益菌群数量增加，肠杆菌的生长受到抑制。六神曲中含有丰富的消化酶，发酵过程中因特种微生物或微生物群分解发酵基质产生淀粉酶、蛋白酶等，进而达到健胃消食的作用。

2.4 质量标准研究

现有各省地方炮制规范关于六神曲的质量标准多是性状描述，部分增加了显微鉴别，对于六神曲发酵层度的优劣性无法评价。而文献资料针对六神曲的成分含量测定、指纹图谱以及酶活性等质量控制已有大量记载，尤其酶活性的检测更能反映出其临床疗效。黄国能[17]研究发现消化酶是曲剂发酵过程中的代谢产物和重要的药效物质，其含量变化可作为判断质量优劣的标准。王云庭等[18]以麦芽低聚糖酶的活力作为分析评价指标，考察不同产地、不同样品六神曲的品质差异。王丽芳等[9]比较各组六神曲样品间发酵前后化学成分的差异，建立15个共有指纹峰，确定槲皮苷、木犀草素、槲皮素3种成分并检测其含量，以槲皮素为参照峰，计算15个共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，能够有效反映出六神曲的质量。谢彦博[19]对六神曲HPLC指纹图谱进行研究，结果发现根据组方物料中有效峰的数量，可以在配方中调整物料的配比，通过加大苍耳草和青蒿的比重，可有效调节六神曲的产品质量。朱德全等[20]研究发现利用六神曲的乙醇提取物的红外光谱鉴别能快速鉴别六神曲饮片，并用于指导六神曲的真伪鉴别工艺，可以有效控制六神曲的质量。

3 结语

综上所述，六神曲主要包括面粉(麦麸)、杏仁、赤小豆和苍耳草、辣蓼、青蒿六种物料，但各地配比和发酵方式有所差异，北方地区发酵基质多采用面粉，南方多采用麦麸与面粉混合物，对于杏仁和赤小豆，处理方式多采用粉碎后直接混合发酵，苍耳草等三种草药鲜品榨汁与干品煎煮对于六神曲质量影响不大，对于发酵时间多以发酵7天左右为优，其酶活性和指纹图谱等也均趋于稳定；同时对于发酵菌种目前多采用自然发酵，部分省市采用单一米曲霉孢子发酵，成品质量也符合传统要求，并且对于发酵菌种或菌群的分离鉴别也先后分离出多种菌种，包括细菌、真菌、酵母菌等，类似传统发酵技术，考虑是否能够采用六神曲自然干燥后的成品进行优势菌种群进行后期添加发酵，一方面逐步纯化优势菌种群，便于企业内菌种的不断繁殖、保存，并且也能够确保菌种群同时起到发酵作用，提升成品质量；最后对于发酵方式目前主要分为物料混匀整体发酵后切丁和制丁后发酵，结合目前行业生产实际，制丁后发酵便于行业规模化生产且发酵程度较整体发酵高。

通过比较六神曲传统发酵工艺、当前研究文献与行业实际，工业化和规模化生产需求迫切需要对当前生产水平进行转变，其统一的炮制方法和标准也急需制定，以适应六神曲现代智能调控生产，提升其产能和质量的稳定性。