三味拳参口服液中氧化苦参碱、苦参碱薄层鉴别检测方法研究
2021-01-19郭艳钦王梦雪李云波杜西翠李泽庭刘格格位寿朋李莹洁肖亚彬李淑娜边青岩
郭艳钦，王梦雪，李云波，杜西翠，李泽庭，张 趁，刘格格，武 珊，位寿朋，李莹洁，肖亚彬，李淑娜，边青岩
（1.河北锦坤动物药业有限公司，河北 辛集 052360；2.河北省兽用中药制剂技术创新中心，河北 辛集 052360；3.河北省兽药监察所，石家庄 050035；4.辛集市动物疫病预防控制中心，河北 辛集 052360；5.乐亭县农业农村局，河北 乐亭 063600；6.饶阳县农业农村局留楚动物防疫站，河北 饶阳 053900）
中药苦参为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）的干燥根。春、秋二季采挖，除去根头和小支根，洗净，干燥。性苦、寒。归心、肝、胃、大肠、膀胱经。具有清热燥湿、杀虫去积、利水的功效。主治湿热泻痢、黄疸、水肿、疥癣[1]。
苦参中含有大量的生物碱，其中苦参碱和氧化苦参碱含量最高，加起来占苦参药材根总干重的2%，其中大部分以氧化苦参碱形式存在，同时还有其他相近的生物碱[2]。
三味拳参口服液为兽药成方制剂，收载于《兽药质量标准》（2017 年版）中药卷。由拳参、穿心莲、苦参三味中药提取浓缩而成。具有清热解毒、燥湿止痢的功效，主治湿热泄泻[3]。《兽药质量标准》规定了氧化苦参碱薄层鉴别方法，但在实际检测中发现，按照该标准规定方法进行薄层检测时，氧化苦参碱对照品斑点在原点位置，无法根据氧化苦参碱对照品斑点判定样品是否合格。通过多次试验摸索，对原标准检测方法进行了改进：在三氯甲烷加入前调节pH 对电极损伤比较小；样品制备过程中用超声提取代替加热回流提取；展开过程用极性比较大的甲醇代替丙酮。改进后的方法可以达到比较满意的检测结果，现介绍如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
AUW220D 型十万分之一电子分析天平，感量为0.000 01 g，岛津国际贸易有限公司生产；KH-500E 型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司生产；DK-98-Ⅱ型恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司生产；硅胶G薄层板，青岛海洋化工厂生产；层析缸，上海信谊仪器厂有限公司生产。
1.2 试剂
苦参碱对照品，中国食品药品检定研究院提供，含量为98.7%，产品批号为110805-201709；氧化苦参碱对照品，中国食品药品检定研究院提供，含量为92.9%，产品批号为110780-201909；三味拳参口服液样品，河北锦坤动物药业有限公司生 产， 产 品 批 号 为 20191201、 20191202、20191203；三氯甲烷、浓氨溶液、乙醇、苯、丙酮、甲醇、乙酸乙酯等均为分析纯；试验用水为高纯水。
2 方 法
2.1 改进前方法
2.1.1 溶液的制备
（1）氧化苦参碱对照品溶液：精密称取氧化苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。
（2）供试品溶液：取三味拳参口服液10 mL，加三氯甲烷25 mL，摇匀，然后加浓氨溶液调pH至9.5，加热回流1 h，放冷，取三氯甲烷液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，即得。
2.2 改进后方法
2.2.1 溶液的制备
（1）氧化苦参碱对照品溶液：精密称取氧化苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。
（2）苦参碱对照品溶液：精密称取苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。
（3）供试品溶液：取三味拳参口服液10 mL，先加浓氨溶液调pH 至9.5，再加三氯甲烷25 mL，摇匀，超声（220 V/50 Hz）提取30 min，放冷，取三氯甲烷液蒸干，残渣加乙醇2 mL 使溶解，即得。
3 结 果
3.1 改进前薄层色谱层析结果
吸取2.1.1 中氧化苦参碱对照品溶液和供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，展距为10.5 cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。显色结果见图1。
3.2 改进后薄层色谱层析结果
吸取氧化苦参碱对照品溶液、苦参碱对照品溶液、供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，展距为10.5 cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。显色结果见图2，在供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上显示相同颜色的斑点。
图1 改进前薄层色谱层析结果
4 讨 论
4.1 pH调节
在实际检测过程中发现，样品加入三氯甲烷后调节pH，对电极损伤非常大，认为先调节pH后再加三氯甲烷更为合理，改变方法后对试验结果没有影响。
4.2 样品制备过程
原标准是加热回流1 h，其过程可能会造成氧化苦参碱转化成苦参碱。陆蕴如等[4]研究了苦参在复方中化学成分的变化，结果表明，含苦参的复方制作成制剂时，受水、加热等因素及与共存的还原性成分的作用，使氧化苦参碱含量逐渐降低直至消失，苦参碱含量逐渐增加。室温超声提取[5]时，薄层色谱法可以检出明显的氧化苦参碱斑点。因此将样品制备方法加热回流1 h 改为超声（220 V/50 Hz）提取30 min，效果更好。
4.3 展开剂选择
原标准展开剂为苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2），展开显色后，氧化苦参碱对照品在原点位置形成一个橙红色斑点，没有得到上行展开的斑点，根据对照品无法判定样品斑点中是否有氧化苦参碱斑点，从而无法得出产品是否合格的结论。经过多次试验摸索，将展开剂[6]中的丙酮用极性比较大的甲醇代替，其他色谱条件不变，展开显色后，氧化苦参碱和苦参碱都可以得到清晰的斑点。
图2 改进后薄层色谱层析结果
5 结 论
综上所述，三味拳参口服液氧化苦参碱薄层鉴别法在原标准基础上，经过改进，样品制备方法更加简单、快捷，可在很大程度上减小对检测结果的影响。薄层展开结果比较理想，可以得到清晰的氧化苦参碱和苦参碱斑点，从而可以对氧化苦参碱和苦参碱两种成分进行质量控制。希望本研究结果可对以后该标准修订提供有价值的参考。
