宫颈癌组织bFGF 表达与临床病理特征及HR-HPV病毒载量的关系

马金平，王雅莉，娄欢，李红娟

（郑州大学附属郑州中心医院妇科，河南 郑州 450000）

细胞因子或者癌基因水平的改变,能够影响到柱状上皮的早期异常分裂过程,最终促进宫颈癌的发生发展[1]。生长因子调控蛋白的波动能影响癌基因的激活,加剧癌基因对肿瘤增殖的影响[2]。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是生长因子家族成员，其对于下游癌细胞内信号通路的上调作用,能够促进肿瘤信号通路蛋白的交错激活,促进了癌细胞对于局部癌旁组织的侵袭[3]。有部分研究者探讨了b FGF 在宫颈癌患者中的表达情况,认为在宫颈癌患者中，bFGF 蛋白的表达浓度明显上升[4]，但关于其与宫颈癌患者体内高危型人乳头瘤状病毒 （HRHPV）载量关系的研究甚少。本研究探讨了宫颈癌组织bFGF 表达情况及其与宫颈癌病理学特征、高危型人乳头瘤状病毒（HR-HPV）病毒载量的关系，旨在为宫颈癌的发生发展机制提供参考依据。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象的资料情况 选取 2018 年 1 月-2019 年1 月病理科收集的90 例宫颈癌组织作为宫颈癌组,癌旁组织标本为对照组。年龄44～65 岁，平均54.3±7.4 岁,依据国际妇产联盟分期(FIGO)标准：其中Ⅰ期宫颈癌22 例，Ⅱ期宫颈癌42 例，Ⅲ期宫颈癌20 例，Ⅳ期宫颈癌6 例；宫颈癌组织病理学分化情况：高、中、低分化患者分别为31 例、35例、24 例；其中检测出淋巴结转移患者39 例；肌层浸润深度≥1/2 的宫颈癌患者有35 例；肿瘤病灶：≥3.0 cm 47 例。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：⑴符合中华妇产科学会制定的《宫颈癌诊断与治疗指南(第四版)》中的宫颈癌诊断标准[5]；⑵经病理学检查证实,病理诊断标准符合中华医学会病理学分会女性生殖系统疾病学组及中国优生科学协会阴道镜与宫颈病理学会病理学组发布的 《宫颈癌及癌前病变病理诊断规范》中规定的取材、操作及诊断标准；⑶均为首次诊断的患者，既往无放化疗史；⑷本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定，并经我院伦理委员会批准。排除标准：⑴伴有其他部位的恶性肿瘤；⑵手术后复发的宫颈癌患者；⑶甲状腺功能障碍患者；⑷合并宫颈、生殖系统其他重大疾病的宫颈癌患者。

1.3 免疫组化检测 采用石蜡切片，脱水操作后采用3%H2O2室温条件下孵育20min， 磷酸盐缓冲液清洗3 次，每次5min，磷酸盐缓冲液稀释后的山羊血清封闭抗体5min，倒去血清后不清洗，加入一抗（购自赛默飞世尔中国 浓度：1：1000）5ml，37℃孵育2h，或者放置4℃冰箱过夜孵育，磷酸盐缓冲液清洗3 次,每次5min,加入生物素荧光标记的二抗（购自赛默飞世尔中国 浓度：1：2000）3ml，37℃孵 育20～30min，磷酸盐缓冲液清洗 3 次，每次 5min，加入Streptavidin/HRP 辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育20～30min,磷酸盐缓冲液清洗3 次,每次5min,增强型HRP-DAB 底物显色试剂盒 (PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。

bFGF 蛋白主要表达在宫颈癌组织细胞的细胞浆，显微镜下观察呈黄色、棕黄色、褐色则表现为阳性表达[9]，⑴依据bFGF 蛋白阳性染色强度：无色(0 分)、淡黄色(1 分)、棕黄色(2 分)、褐色(3 分)；⑵bFGF 蛋白阳性表达细胞占视野下所有细胞的比例：占比≤10%为 1 分、占比范围 11%～50%(2 分)、占比范围 51%～75%(3 分)、占比范围＞75%(4 分)，染色强度与阳性染色细胞占比范围积分的乘积为总分，总分＜3 分为阴性、≧3 分为阳性。

1.3 HC2-HPV-DNA 检测及评价 常规窥器暴露宫颈后,将HPV 采样刷放置于宫颈口按逆时针转3圈,并停留10s。将需要部分采样刷留在标本储藏瓶中，密闭后做好标记并送检。采用杂交捕获法并应用基因杂交信号放大系统（DML2000TM,美国Digene 公司提供） 进行 HC2-HPV-DNA 检测，HPV试剂盒为上海莱特公司提供,严格按照说明书进行操作。以光量读数与阴性测定值的比值（RLU/CO）对HPV 病毒载量进行划分, 由于RLU/CO 离散度较大，因此对其进行常用对数转换（即lg RLU/CO）将 HPV 病毒载量分为＜1,1～＜2，2～＜3，≥3 四个等级。HR-HPV 载量分析：同一级别宫颈病变，HPV载量越高,患病的危险度越高；不同级别宫颈病变，HPV 载量越高，患高级别病变的危险度越高。

1.4 统计学方法 本研究收集的所有数据均在SPSS21.0 中进行统计分析，年龄采用进行统计描述，数据比较分析应用t 检验；χ2检验分析bFGF蛋白阳性表达率；bFGF 蛋白阳性表达率与HRHPV 病毒载量的关系采用Mann-Whitney U 检验；P＜0.05 为差异具有统计学显著性。

2 结果

2.1 两组bFGF 蛋白阳性表达率比较 宫颈癌组bFGF 蛋白阳性表达率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表 1。

2.2 宫颈癌组织中的bFGF 蛋白阳性表达率与患者临床病理特征的关系 不同FIGO 分期、 是否发生淋巴结转移的宫颈癌患者癌组织中bFGF 蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）；不同组织学分化程度、分型、不同病灶大小、不同肌层浸润深度的宫颈癌组织中bFGF 蛋白阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），见表 2。

表1 二组bFGF 蛋白阳性表达率比较

表2 宫颈癌组织中的bFGF 蛋白阳性表达率与患者病理学特征的关系

2.3 宫颈癌组织中的bFGF 蛋白阳性表达率与HR-HPV 病毒载量的关系 宫颈癌组织中bFGF蛋白阳性表达与阴性表达者HR-HPV 病毒载量的总体分布差异具有统计学意义（P＜0.05）见表3。

3 讨论

表3 宫颈癌组织中的bFGF 蛋白阳性表达率与HR-HPV 病毒载量的关系

高危型HPV 病毒特别是HPV16、HPV18 病毒感染，能显著促进宫颈柱状上皮细胞异常分裂，在E6/E7 蛋白高度整合宿主细胞的过程中, 高危型HPV 感染导致的宫颈癌发病率持续上升[6]。临床上宫颈癌患者的中晚期阶段病情进展速度较快，远期带瘤生存时间较短,宫颈癌复发转移的风险较高[7,8]。现阶段缺乏对宫颈癌综合性病情评估的可靠指标，虽然鳞状上皮细胞抗原能发挥一定作用，但评估宫颈癌临床病理特征的满意度仍然较低[9,10]。本次研究通过对宫颈癌患者病灶组织中bFGF 蛋白的表达进行分析研究,不仅能深入揭示宫颈癌发生发展的可能机制,而且还能为宫颈癌临床病理特征或者综合性病情评估提供依据。

bFGF 蛋白主要表达于间质组织、胚胎组织及未分化成熟组织中，在炎症、损伤修复或者恶性肿瘤患者中，由于机体反馈性调节系统的激活，bFGF蛋白的表达浓度均可显著上升。bFGF 蛋白对上皮细胞增殖状态的诱导作用能提高上皮细胞的扩增风险，抑制早期癌细胞的凋亡。部分学者的研究认为bFGF 蛋白的高表达能够促进卵巢癌或者子宫内膜癌的发生[11]，但关于其与宫颈癌临床病理特征的关系研究较少，同时未能深入揭示bFGF 蛋白与HR-HPV 的关系。

本研究免疫组化结果提示,宫颈癌组织中bFG F 蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织。bFGF 蛋白的高表达主要在肿瘤生物学特征恶化、肿瘤信号通路激活或者癌基因损伤修复方面发挥作用,进而持续维持癌细胞的增殖转录过程。有研究发现,在宫颈癌组织中,bFGF 蛋白阳性表达率可超过65%，而在有明显的宫旁组织或盆腔淋巴结转移的患者中，bFGF 蛋白阳性表达率可进一步升高[12,13]，提示bFGF 蛋白阳性表达能显著加剧宫颈癌进展。分析原因可能与bFGF 蛋白高表达能提高肿瘤细胞浸润范围，促进其对阴道壁或宫旁组织的侵袭，最终促进宫颈癌进展有关；而bFGF 蛋白对淋巴结转移的影响, 主要在于其能提高淋巴结内皮黏附分子snail 的激活程度，而最终促进淋巴结转移的发生。而本研究结果显示，bFGF 蛋白表达并不会影响癌细胞的分化过程。

宫颈癌组织bFGF 蛋白阳性表达的患者中，HR-HPV 病毒载量较高,表明宫颈癌患者HR-HPV病毒载量可能影响bFGF 蛋白的表达。而以往研究认为，HPV E6 蛋白是HR-HPV 的主要转化蛋白，主要通过使P53 泛素化分解而使其失去对细胞生长的负调节作用,最终引起细胞过度增生并向恶性转化[14-16]。HR-HPV 可能就是通过P53 调节通路上调bFGF 蛋白表达，而显著加剧病毒颗粒基因对于宫颈细胞的整合程度,进而导致宫颈上皮细胞的癌变过程, 这也可能是HR-HPV 导致宫颈癌发生发展的机制之一[17], 但仍有待进一步的研究予以证实。

综上所述，bFGF 蛋白在宫颈癌组织中呈高表达，与FIGO 分期、淋巴结转移情况密切相关，HRHPV 可能通过上调bFGF 蛋白表达而促进宫颈癌的发生发展。