不同传染病四项ELISA 试剂检测献血者结果差异性分析

范许洲，王伟，严京梅，黄雪莲，栾建凤

（东部战区总医院输血医学科（原南京军区南京总医院），江苏 南京210002）

输血相关传染病检测是确保血液及血液制品安全和减少医疗纠纷的重要措施。目前常规使用酶联免疫检测（ELISA）方法实施输血相关四项传染病检测（简称传染病四项，包括乙肝肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体、梅毒抗体和艾滋病抗体），虽然ELISA 已经具有了较高的灵敏度和特异性，但各家试剂的差异及试验干扰会产生试验结果的差异，干扰了检测结果的准确性。为保障血液的安全，献血者的血液必须用两家不同厂家的试剂检测两次，任何一家试剂检测阳性均作阳性处理，两家检测均阴性的血液再用核酸检测（NAT）[1-3]。献血者血液的检测为我们评价ELISA 试剂的检测结果提供了基础，并为实施患者输血前检测提供借鉴。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2016 年 1 月至 2018 年 10 月本血液中心39824 份无偿献血者传染病四项检测。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 ELISA 检测试剂初检为厦门英科新创科技有限公司,复检试剂乙型肝炎肝表面抗原、丙型肝炎抗体、梅毒为北京金豪制药股份有限公司，人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗原抗体检测试剂盒为北京万泰药业股份有限公司。核酸检测仪器：科华核酸提取仪、荧光 PCR 仪（ABI7500）试剂为科华核酸检测试剂盒。STAR 全自动加样仪（瑞士HAMILTON），FAME24/32 全自动酶免分析系统（瑞士HAMILTON）。所有试剂均为经检验合格且在有效期内使用； 所有仪器设备均按要求进行维护保养，并确保能够正常工作。

1.2.2 试验结果的判读 两种ELISA 检测试剂结果一致，判读结果，若只有一种出现阳性结果时，用同样的试剂对原试管进行双孔复检,结果均为阴性则表示合格；任意一孔出现阳性且复检后仍为阳性则表示不合格；ELISA 检测后,剔除酶免双试剂阳性、单试剂阳性的样本及重度脂溶血样本，其余样本进行核酸检测。核酸混样检测结果阴性为合格，混样阳性进行拆分实验验证, 拆分结果阴性为合格，拆分结果阳性为不合格。

1.3 统计学方法 采用 GraphPadPrism5.0 统计软件处理数据, 两组数据之间的相互比较采用 t 检验；计数资料采用百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA 检测结果 总阳性见表1。

表1 2016-2018 年39824 例献血者传染病四项ELISA 检测结果

表2 2016-2018 年献血者传染病四项ELISA 检测双试剂与单试剂阳性结果

2.2 ELISA 检测单试剂与双试剂阳性结果 见表2、图 1。

图1 2016-2018 年献血员传染病四项酶免检测双侧与单侧反应阳性比较

2.3 核酸检测结果 35431 例酶免检测阴性且质量合格的标本进行HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DN A 检测,只有 HBV-DNA 阳性标本 12 例：2016 年 5例，2017 年 4 例，2018 年 3 例。其它标本各项目核酸检测均为阴性，不同年份不合格率比较：χ2=2.73,P＞0.05，见表 3。

3 讨论

本文中39824 例无偿献血者血液样本，ELISA检测的总阳性率为1.88%,剔除ELISA 双试剂及单试剂阳性标本及质量不合格标本后，35431 例血液样本进行核酸检测,总阳性率为0.13%,且均为HB V-DNA 阳性（15 例），低于王湘屏[4]等人报道核酸阳性率0.278%、梁浩坚[5]等人报道核酸阳性率0.22%，但高于杨琳琳[6]等人报道核酸阳性率0.06%，叶祖兴[7]等人报道核酸阳性率0.07%。提示：一是虽然血液样本经 ELISA 检测为阴性，但HBsAg 仍有一定比例核酸检测阳性率；二是双试剂ELISA 检测有效提高了血液的安全性。

表3 2016-2017 年酶免检测阴性标本核酸检测结果

将无偿献血者血液样本ELISA 检测的双试剂和单试剂阳性率进行比较，发现HBsAg、抗-HCV与抗-HIV 和/或P24 检测中单侧阳性率均高于双侧,且新创试剂与金豪试剂检测阳性率不同,HBsAg与抗-HCV 两种试剂阳性率存在差异且有统计学意义,提示不同厂家的ELISA 试剂检测结果存在差异。这可能是由于试剂的稳定性、特异性、敏感度不同以及操作等原因造成[8-11]。有研究报道，ELISA单试剂有反应标本经核酸检测阳性检出率达0.752 %,ELISA 无反应 （S/CO≤0.7）标本中，阳性检出率0.27%,两者相比差异有统计学意义（χ2=8.801, P=0.003）。本统计中抗-TP 结果一致性高，可能与献血人群的年龄段分布有关,据报道，抗TP-ELISA 假阳性多出现于老年人、有多次妊娠史及患免疫系统疾病的人群[12-16]，而本报道中的献血者主要年龄段在青少年[17]。

以上的分析结果提示,单ELISA 试剂的检测存在一定的假阳性和假阴性。提示：一是作为献血者血液的检测单试剂阳性血液均应列为不合格血液，以提高血液使用的安全性；二是对于采供血机构应提倡对这些献血者做进一步的确认,以免使潜在的献血员被误屏蔽；三是对于献血者和输血者，假阴性和假阳性均会给他们带来不良后果。假阴性延误治疗；误判阳性，尤其是艾滋和梅毒的误判有时甚至导致严重的社会问题，检验人员对ELISA单试剂阳性的结果需谨慎,首先应该用原试剂复查原始管，确保实验无误，仍为相同结果时，最好用确认方法确认后发放结果。