扶正康复合剂对胃癌SGC7901细胞荷瘤裸鼠细胞因子的影响

董学妍,滕晓晶, 王智毅,王贤军,余道军

(1.浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院 检验科, 浙江 杭州 310006; 2.杭州市妇产科医院 检验科, 浙江 杭州 310008)

胃癌的发病率位居恶性肿瘤第2位，严重影响着人类健康[1]。目前，胃癌的临床治疗仍以手术切除为主，同时辅以放疗和化疗。但放化疗在杀伤肿瘤细胞的同时也常会对机体的免疫功能造成一定程度的损伤，免疫功能越低，患者的预后也越差[2-3]。诸多临床实验研究[4-6]显示，中药在治疗肿瘤、减轻放化疗毒副作用、增强患者免疫力等方面都发挥着巨大的作用。扶正康复合剂是浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院的临床经验方，主要用于恶性肿瘤的中医维持治疗。扶正康复合剂的抗肿瘤作用机理尚未阐明，因而影响了其市场的拓展和应用[7-8]。本研究以胃癌荷瘤裸鼠为模型，探讨扶正康复方对胃癌肿瘤生长的抑制作用及其对细胞因子的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物和细胞 SPF级BALB/c雄性裸鼠购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物生产许可证：SCXK(沪)2017-0005，使用许可证号：SYXK(浙)2018-0012。42只SPF级BALB/c雄性裸鼠4～5周龄，体质量18～22 g，饲养于SPF级屏障环境中。胃癌SGC7901细胞株购于中科院上海富恒细胞库。

1.2 实验材料和试剂 扶正康复合剂由浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院中药房提供。每贴生药用9倍质量的水煎煮提取3次，每次1 h，最后成约180 mL药液。顺铂注射液购于南京制药有限公司(006013CF)，小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒购于上海信裕生物有限公司。

1.3 胃癌SGC7901移植性裸鼠建模和分组 BALB/c裸鼠适应性生长3 d后，按裸鼠体质量大小顺序编号，采用随机化工具将裸鼠分成6组，每组7只，分别为模型组、扶正低剂量组[12 g/(kg·d)]、扶正高剂量组[24 g/(kg·d)]、顺铂组[2 mg/(kg·d)]、联合用药低剂量组[顺铂2 mg/(kg·d)+扶正康复合剂12 g/(kg·d)]、联合用药高剂量组[顺铂2 mg/(kg·d)+扶正康复合剂24 g/(kg·d)]。将0.2 mL(含细胞数1×106个)胃癌SGC7901细胞株悬液注射入各组裸鼠左下肢外侧皮下，待皮下肿瘤生长至1 cm×1 cm大小为胃癌SGC7901荷瘤裸鼠建模成功。

1.4 给药方式 依照《中药药理实验方法学》[9]的动物用药剂量公式计算扶正低剂量组、扶正高剂量组的用药剂量分别为12 g/(kg·d)和24 g/(kg·d)，给予7 d 0.4 mL/d灌胃。顺铂组给予0.2 mL/d腹腔注射，共注射7 d。模型组给予生理盐水灌胃。

1.5 裸鼠体质量、肿瘤组织质量及抑瘤率计算 各组裸鼠于给药7 d后采血并剥离肿瘤组织，称体质量和肿瘤组织质量，计算抑瘤率。抑瘤率(%)=(对照组平均肿瘤组织质量—实验组平均肿瘤组织质量)/对照组平均肿瘤组织质量×100%。

1.6 TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-6水平检测 对各组裸鼠进行眼球取血，1.5 mL全血经3 600 r/min离心15 min，离心半径为13.5 cm，取血清。采用双抗体夹心ELISA法检测各组裸鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平，实验操作严格按照酶联免疫试剂盒说明书。

1.7 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计学处理，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对肿瘤生长的影响 顺铂组、扶正高剂量组、联合用药低剂量组、联合用药高剂量组的肿瘤组织质量均低于模型组，联合用药高剂量组的肿瘤组织质量低于顺铂组，差异均有统计学意义(P<0.05)，其抑瘤率为57.78%。见表1。

表1 各组裸鼠肿瘤生长情况

2.2 对TNF-α、IFNγ、IL-2、IL-6水平的影响 顺铂组裸鼠血清中免疫相关细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平均低于模型组，联合用药低剂量组和高剂量组裸鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平均高于顺铂组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组裸鼠血清TNF-α、IFNγ、IL-2、IL-6水平

3 讨论

中医药治疗可提高肿瘤患者免疫功能，改善临床症状。胃癌主要表现为脾胃亏损，中医对胃癌的治疗遵循扶正培本的原则[10]。扶正康复合剂的主要成分为人参、石斛、茯苓、猪苓、白术、防风、米仁、巴戟天、谷麦芽等15味中药，具有大补元气、滋养阴津、补脾益胃等功效，是浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院治疗肿瘤的临床经验方。顺铂在胃癌、睾丸癌、卵巢癌、子宫癌、膀胱癌、颈部癌、前列腺癌、脑癌等多种肿瘤的治疗中表现出显著优势。但使用顺铂治疗常会出现胃肠道反应、骨髓抑制现象、脱发、色素沉淀等不良反应。本研究结果显示，联合用药高剂量组的肿瘤组织质量明显低于顺铂组，抑瘤率为57.78%，提示扶正康复合剂联合顺铂治疗可抑制肿瘤生长，抑瘤效果优于单独使用顺铂。扶正康复合剂中人参的主要成分为人参皂苷，人参皂苷具有抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用，人参皂苷Rh2的剂量与抑制胃癌SGC7901细胞增殖成正相关[11]；扶正康复合剂中的石斛可起到抗肿瘤、抗病毒、增强免疫调节等多种功能[12-13]。

在肿瘤的发生发展过程中，机体的免疫系统发挥着重要的免疫监视作用。当宿主免疫功能低下或受抑制时，肿瘤的发生明显增加。同时，肿瘤的产生对机体免疫系统可产生一定抑制作用。研究[14-15]表明，免疫细胞Th1/Th2失调是导致肿瘤发生、发展的重要原因。Th1主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α等细胞因子，参与细胞免疫和迟发性超敏性炎症反应；Th2主要分泌IL-4、IL-6、IL-10等细胞因子，参与体液免疫应答[16-17]。正常生理情况下，Th1和Th2处于动态平衡，维护机体正常的细胞免疫和体液免疫。当肿瘤发生时，Th1和Th2功能发生紊乱[18]。本研究结果显示，顺铂组裸鼠血清中免疫相关细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平均明显低于模型组，表明顺铂可对机体免疫功能造成一定的损伤。同时，本研究结果显示，联合用药低剂量组、联合用药高剂量组裸鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6水平均明显高于顺铂组，表明扶正康复合剂可影响裸鼠分泌TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6免疫相关细胞因子，具有调节免疫功能的作用。有研究[19]显示，人参多糖增强机体免疫水平的功效是通过提高IL-2、IL-8 和TNF-α水平实现的。另有报道[20]指出，茯苓能明显抑制小鼠H22 实体瘤和肉瘤细胞的生长，提高T淋巴细胞的增殖能力，增加血清中TNF-α的含量，发挥机体的抗肿瘤能力和免疫调节作用。人参和茯苓是扶正康复合剂中的主要成分，扶正康复合剂增强机体免疫能力的功效可能与人参和茯苓有关。

综上所述，扶正康复合剂能抑制胃癌SGC7901细胞荷瘤裸鼠肿瘤的生长，能促进裸鼠分泌免疫相关细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6。