球毛壳菌Cg-1对水果采后致病菌的抑制效果

李丽丽

摘要：本文对球毛壳菌Cg-1菌株应用于水果采摘后病害的防治进行了综述，包括防治机理、防治效果、防治的优势。球毛壳菌Cg-1是一种植物内生菌，该菌株能生活在植物体内，经诱导产生的粗酶液和抗生物质粗提液均具能明显抑制多种植物病菌菌丝的生长和孢子萌发，使采后水果延长保质期。试验表明该菌株对水果采摘后防病抑病优于假丝酵母，无毒、无污染，对多种病害具有较好的抑制效果。

关键词： 内生真菌;采后病害;抑制效果

Abstract： the application of Chaetomium globosum Cg-1 strain in the prevention and control of diseases after fruit picking was reviewed， including prevention and control mechanism， prevention and control effect and advantages. Chaetomium globosum Cg-1 is a kind of endophytic bacteria， which can live in plants. The crude enzyme solution and antibiotic crude extract produced by induction can obviously inhibit the growth of hyphae and spore germination of various plant pathogens， and prolong the shelf life of postharvest fruits. Experiments show that the strain is superior to Candida spp. in preventing and suppressing diseases after fruit picking， and it is non-toxic and pollution-free， and has a good inhibitory effect on various diseases.

Key words： endophytic fungi; Postharvest diseases; Inhibition effect

引言

水果采摘后腐爛大多由真菌引起，水果在采收、包装、贮存和运输过程中若受到机械损伤[1]，霉菌很容易通过伤口侵蚀水果，并在水果上大量生长，从而造成水果的腐烂。真菌则是水果最主要的致腐病原菌，前人制定出诸如低温冷藏、气调贮藏、减压贮藏等对抑制真菌病害行之有效的环境控制措施[2]。现今社会，对水果新鲜度的要求更为严格，对保鲜技术更为重视，基于此，球毛壳菌Cg-1就目前我国国内水果采摘后的保鲜和贮存致病菌的防治具有非常好的抑制效果。

1.水果采后真菌病害的分离和鉴定

1.1从健康组织中分离潜伏侵染病原菌

在贮运的水果中选取侵染病菌的果实，取病变的组织部位进行分离[3]。

1.1.1分离方法：在无菌超净工作台上，将所取病变组织部位首先放入70%的酒精中浸泡30s，迅速用灭菌滤纸吸除酒精后，移入2%的次氯酸钠溶液浸泡1min，再用灭菌水清洗3次（本操作可在灭过菌的培养皿或20ml小烧杯中进行），取出后用滤纸吸干组织块，植入PDA平板培养基中25℃下培养2～3d，当培养出的菌落直径生长至1cm时，用接种针挑取菌丝尖端植入另一皿PDA培养基内培养同上;重复上述操作3次即可作为纯化菌种回接种果实，进行病原致病性能的再鉴定，最后转接入试管，4℃冰箱保存，并鉴定到属和种。

1.1.2对分离菌株进行病原致病性再鉴定

分离纯化后的菌株必须经过再次回接寄主试验才能确认它们是否具有导致水果采后腐烂的致病性能。即将分离菌株回接在寄主水果上，如果发病症状与贮运中腐败症状相符合，

便可作为采后病原菌进一步研究其致病条件与控制方法。采用已纯化后的病原菌株回接被测果实，通过接种观察病斑发展速度和发病程度，可判断被接菌株致病能力的大小。

2水果的选择和予处理

2.1水果的选择

选择市场上常见的秋子梨，拉丁学名：Pyrus ussuriensis Maxim.，选择大小均匀一致、外观无病害的购买。

2.2予处理

将梨先用自来水清洗，再侵泡在0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1分钟，取出，用自来水冲洗，冲掉残余次氯酸钠，再用在酒精灯上灭过菌的打孔器打洞，位置选在果实的赤道部位，打一个直径5毫米深5毫米的洞。

3球毛壳菌Cg-1对水果致病菌的抑制效果实验

3.1球毛壳菌Cg-1的培养：

球毛壳菌Cg-1菌株的子囊孢子产孢培养基组成：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，水1000ml，pH值自然。新鲜马铃薯去皮后，切成边长0.5cm的小方块，加水1000ml，煮沸后再加热30min，然后用四层纱布过滤，保留滤液，加入20g葡萄糖，18g琼脂，定容1000ml，121℃灭菌25min备用。将活化的球毛壳菌Cg-1菌株的菌丝饼接种于PDA平板上，25℃培养12-15天，可获得大量子囊孢子;经过一段时间的低温冷藏后，子囊孢子即可用1/2浓度的马铃薯葡萄糖液体培养基配制成浓度为1*106的孢子菌悬液备用。

3.2病原菌及孢子悬液制备：

梨灰霉病（Botytis cinerea Pers）

用接种环在培养好的梨灰霉病试管斜面上刮取适量孢子，转移至无菌生理盐水中，用血球计数板计数，并用无菌生理盐水调整浓度至所需要的浓度，待用。

3.3抑制病斑过程：

将球毛壳菌Cg-1分别配置1*106，1*107，1*108的浓度，以假丝酵母和无菌水做对照。果实打孔后，按要求用移液枪加入上述各浓度的球毛壳菌Cg-1菌悬液30ul，放置一小时后再加入15ul的致病菌孢子悬浮液，其中梨的伤口处加入5*104个/ml的梨灰霉孢子悬浮液。果实风干后置于塑料筐中，用保鲜膜进行封闭，以保持筐内的湿度。将果实置于培养室内进行贮藏，其中，梨果的贮藏温度为25℃[4]，贮藏7天。

每個处理分三组，每组随机挑选5个水果，实验重复三次。经过若干天的培养，用游标卡尺测定水果病斑，记录病斑直径并计算发病率。

抑制率=（CK病斑直径-处理病斑直径）/CK病斑直径*100%

4.结果与分析

4.1在设定的浓度下，待清水对照组梨的病斑直径长到40mm大，分别将试验组梨取出培养箱，用游标卡尺量取病斑直径。病斑直径大小见表1，球毛壳菌Cg-1对梨灰霉病的抑制效果随着浓度的增大病斑直径明显减小。在使用浓度1*108下，抑制率达到58.91%，抑制效果非常明显（可见附图）。

4.2在国内，范青等研究了假丝酵母对水果灰霉病的抑制，当接种灰霉孢子浓度为1*105个/mL时，在25℃，1*108CFU/mL的酵母悬浮液能完全抑制病害。球毛壳菌Cg-1与对照组假丝酵母在相同的抑菌浓度下，Cg-1组的病斑直径明显小于假丝酵母对照组的。表明球毛壳Cg-1对水果灰霉病的抑制效果优于假丝酵母。

4.3接种浓度为1*108球毛壳菌Cg-1的梨子，25℃贮存30天未见病斑，相同条件下对照组超过20天则出现病斑。

参考文献

[1]孙俪，仇农学，吴竞爽.苹果贮运时的机械损伤的预测模型[J]，农业工程学报，1996，12（4）：208～212.

[2]范青，田世平，徐勇.假丝酵母对苹果采后灰霉病和青霉病抑制效果的影响[J]，中国农业科学，2001，34（2）：163～168.

[3]范青，田世平，徐勇，等.季也蒙假丝酵母对采后桃果食软腐病的抑制效果[J]，植物学报，2000，42（10）：1033～1038.

[4]范青，田世平，姜爱丽，等.采摘后果实病害生物防治拮抗菌的筛选和分离[J]，中国环境科学，2001，21（4）：313～316.