癌组织标本PMS2蛋白表达与前列腺癌患者Gleasom分级关联性分析①

陈大伟 (河南电力医院病理科，河南 郑州 450000)

前列腺癌是男性生殖系统常见恶性肿瘤，会压迫尿道导致排尿困难，同时易发生转移至膀胱、血管神经束等部位，严重威胁生命健康[1]。相关研究表明，我国男性前列腺发生例数高达8.14万，死亡率为3.32/10万[2]。前列腺癌发生早期因素为肿瘤细胞异常合成、增殖，其中癌细胞DNA错配是关键因素。PMS2蛋白属于DNA错配修复基因(MMR)，能为错配基因提供糖蛋白配体或与线粒体苹果酸脱氢酶(MDH2)形成二聚体，参与癌细胞DNA异常增殖[3]。临床可通过研究PMS2蛋白在前列腺癌组织中表达情况，为其治疗方案提供实验室指标。本研究选取我院前列腺癌患者104例，旨在探讨PMS2蛋白表达与Gleasom分级的相关性。现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本研究符合我院医学伦理委员会审核批准，选取我院2018-04～2019-04前列腺癌患者104例，其中年龄58～80岁，平均(69.52±5.15)岁；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期33例，Ⅲ期35例，Ⅳ期21例；血清前列腺特异性抗原(PSA)49例<4ng/mL，55例≥4ng/mL；Gleasom分级54例<7分，50例≥7分；远处转移37例，未转移67例。

1.2 纳入标准及排除标准

(1)纳入标准：均经肛门指检、病理活检、超声、术后病理活检确诊为前列腺癌；均签署知情同意书。(2)排除标准：接受过放化疗；前列腺手术史；血液系统疾病。

1.3 方法

(1)标本制作：采用免疫组化方法，采用石蜡切片进行脱蜡，切片厚度为3mm，采用3%过氧化氢(H2O2)处理，于室温下孵育5min，采用去离子水冲洗3次，3min/次，并将1g蛋白加入100mL纯水中配制为浓度为10%牛奶蛋白进行封闭，于室温下孵育5min，加入南京凯基生物有限公司生产的PMS2蛋白抗体，于37℃温度下孵育2h，并利用PBS缓冲液冲洗3次，5min/次，滴加HRP标记过的二抗(罗氏检测公司)，于37℃温度下孵育30min，再次利用PBS缓冲液冲洗3次，5min/次，加入氯化硝基四氮唑蓝(NBT/BCIP)染色剂进行显色，并于5min后复染，脱水、透明、封片。采用上海精密仪器有限公司生产的Olipics电子显微镜下观察，其余配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。(2)PSA检测方法，抽取5mL清晨空腹静脉血，以4000r/min速度离心15min，离心半径为10cm，取上清液置于-80℃冰箱保存，采用化学发光法检测。

1.4 结果判定标准

PMS2蛋白在细胞质与细胞核中阳性表达明显，免疫组化法观察颜色为褐色、棕色、黄色，(1)根据阳性细胞计数后计算百分比评分：>75%计为4分，51%～75%计为3分，10%～50%计为2分，<10%计为1分；(2)根据着色程度评分：褐色或黑色计为3分，棕黄色计为2分，淡黄色计为1分，无色计为0分。结果以阳性细胞百分比与染色程度评分相乘判断：<3分计为(-)，3～5分计为(+)，6～9分计为(++)，>9分计为(+++)；<3分计为阴性，≥3分计为阳性。

1.5 观察指标

(1)前列腺癌组织与癌旁组织中PMS2蛋白表达情况。(2)前列腺癌组织中PMS2蛋白表达情况与Gleasom分级关联性。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 前列腺癌组织与癌旁组织中PMS2蛋白表达情况

前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达74例(71.15%)；阴性表达30例(28.85%)；且前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达率71.15%高于癌旁组织36.54%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 前列腺癌组织与癌旁组织中PMS2蛋白表达情况[n(%)]

2.2 前列腺癌组织中PMS2蛋白表达情况与Gleasom分级关联性

前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达与年龄、Gleasom分级、PSA水平、TNM分期、远处转移有关(P<0.05)。见表2。

表2 PMS2蛋白表达情况与Gleasom分级关联性[n(%)]

3 讨论

前列腺癌早期易发生转移，5年内生存率低于35%，生存时间少于32个月，临床上多采用Gleasom分级评估其恶性程度，但缺少相关预后评估指标[4]。前列腺肿瘤细胞发生发展过程中，DNA错配修复发挥重要作用，能参与原核及真核细胞自身修复机制中，避免癌细胞DNA长期扩增紊乱导致癌基因富集，稳定染色体末端的端粒结构，调节G1/S期细胞比例与细胞周期，抑制早期病变细胞低方向分化[5]。

PMS2是常见DNA错配修复基因，包含2个内含子与12个外显子，全长16kb，主要纠正增强子或启动子起始部分、小片段性及单碱基失调错配，在真核生物中可与MLH1互相结合，形成异源二聚体MLH1-PMS2(MutLα)；并诱导磷酸盐结构重塑与降解，稳定DNA双螺旋结构[6,7]。本研究选取我院104例前列腺癌患者，经测定前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达71.15%，阴性表达28.85%，且前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达率71.15%高于癌旁组织36.54%(P<0.05)。PMS2蛋白参与到前列腺癌发生发展过程中，PMS2表达增加，影响DNA错配、染色体端粒结构、癌基因表达等多方面发挥综合性作用，因此前列腺癌患者中PMS2蛋白表达会增加且大于癌旁正常组织[8]。本研究结果还显示，前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达与年龄、Gleasom分级、PSA水平、TNM分期、远处转移有关(P<0.05)。分析其原因为，PMS2蛋白阳性表达可影响碱基嘧啶二聚体螺旋骨架结构耐降解程度、稳定性、可逆性，并促进癌基因表达，抑制抑癌基因表达，影响早期癌细胞异常病变；PMS2蛋白阳性表达在前列腺癌病情变化、恶性程度、转移中发挥重要作用，且其阳性表达率与癌细胞Gleasom分级等制定前列腺癌治疗方案的重要参考指标具有相关性，可据此判断分级、PSA水平、肿瘤分期、是否转移，从而间接指导临床治疗。

综上所述，前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达率较高，且与年龄、Gleasom分级、PSA水平、TNM分期、远处转移均有关，可指导临床治疗方案的确定。