破壁灵芝孢子粉胶囊对化学性肝损伤有辅助保护作用动物试验
2021-01-12敬明武葛宇杰刘科亮蒋勇刘丽达
敬明武，葛宇杰，刘科亮，蒋勇，刘丽达
（四川省疾病预防控制中心，四川 成都）
0 引言
破壁灵芝孢子粉胶囊在临床中有一定的应用，为了探究其对化学性肝损伤的辅助保护作用，本研究选取了大鼠进行试验探究，以期能够为临床提供一定的帮助[1，2]。
1 材料和方法
1.1 样品
破壁灵芝孢子粉胶囊，胶囊内容物系红褐色。建议人体每天用量2800mg/60kg.BW，进行试验时，需要对受试物溶液进行配制，溶剂使用蒸馏水。
1.2 无水乙醇
分析纯。
1.3 实验动物
50只雌性SD大鼠,体重180-220g ，生产许可证号为SCXK(川)2018-24.SPF级。实验动物房为屏障系统，使用许可证号为SYXK（川）2016～043，调整好温湿度，分别为20℃-25℃、40%-70%。
1.4 试验分组及剂量设计
对50只SD大鼠实施分组，以平均分的方式，10只为一组，共分成五组，试验设233mg/kg.BW、700mg/kg.BW、1400mg/kg.BW三个剂量组（依次相当于推荐的人体用量的5、15、30倍），分别称取5.83g、17.5g、35.0g受试物，将蒸馏水分别加入，均加到250ml，混合均匀备用，保存在冰箱中，使用完后再调配。另设蒸馏水对照组和50%乙醇模型对照组。用浓度为50%的乙醇造成肝损伤模型，灌胃量14ml/kg.BW（折合乙醇的剂量为7000mg/kg. BW）。
1.5 试验方法
采用酒精肝损伤模型法，将不同剂量受试物给以三个剂量组，给阴性对照组和模型对照组蒸馏水，每日1次，经口灌胃，用量为10ml/kg. BW，持续进行30d，每周进行2次体重测量，以此调整给药量。试验结束时给三个剂量组和模型对照组50%无水乙醇14ml/kg. BW 1次，经口灌胃，给阴性对照组以同体积的蒸馏水，进行16h的禁食后将动物处死，并将肝脏取出进行重量测量，对脏体比进行计算，并用肝脏进行生化指标检测及组织病理学检查。
2 检测指标
2.1 肝匀浆中过氧化脂质降解产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSh）及甘油三酯（triglyceride，TG）的测定
MDA和 GSH测定试剂盒用UV1100分光光度计测定；TG测定试剂盒用CX4全自动生化分析仪进行测定。
2.2 肝脏称重及脏器系数的计算
见表1中的内容。
2.3 肝脏组织病理学诊断标准
2.3.1 病理观察材料
从动物肝左叶中部做横切面取材、切片、染色、镜下观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积。
2.3.2 病理观察方法
使用40倍物镜连续记录每例动物肝组织70个视野，每个视野根据阳性细胞数量及分布范围，采用0、1、2、3、4分的评分方法。计算70个视野得分的平均值，作为该例肝组织的脂肪染色评分。
2.3.3 病理诊断标准
将肝细胞脂滴染色作为病理组织学观察指标，并根据病理改变程度0、1、2、3、4量化，评价肝损伤程度。
2.3.4 肝细胞脂肪染色共分为五级
肝细胞内脂滴散在、稀少：0分；含脂滴的肝细胞不足1/4： 1分；含脂滴的肝细胞不足1/2：2分；含脂滴的肝细胞不足3/4：3分；脂滴差不多代替肝组织：4分。
2.4 试验数据统计
使用SPSS 11.0 for windows软件包分析相关数据。采用方差齐性检验对照组和各剂量组数据，如果方差齐，则实施方差分析，如P＜0.05，则两两比较采用Dunnett法；如果方差不齐，那么就需要转换数据，若还是不齐，则改为秩和检验，如P＜0.05，则两两比较采用Dunnett，s T3法。采用t值检验阴性对照组与模型对照组数据。
3 统计学方法
得出的数据均使用统计学软件SPSS15.0软件进行分析，计量资料采用（±s）表示，并进行t检验，组间差异有统计学意义则使用P＜0.05表示。
4 试验结果
4.1 破壁灵芝孢子粉胶囊对大鼠体重、肝重、肝体比的影响
破壁灵芝孢子粉胶囊各剂量组大鼠的初始体重相比于阴性对照组和模型对照组，方差齐，方差分析结果，P＞0.05，表明各组动物初始体重不存在明显差异，各剂量组动物的中期体重、终重、肝重及肝体比相较于模型对照组，无统计学差异（P＞0.05）。
4.2 破壁灵芝孢子粉胶囊对大鼠肝匀浆中MDA、GSh、TG含量的影响
在肝匀浆中MDA、GSH、TG含量方面，相比于阴性对照组，模型对照组大鼠MDA、TG含量明显上升，GSH含量明显下降，均经由t值检验，均P＜0.01，说明此模型成功，实验有较高的可靠性。在MDA、GSH、TG含量方面，相比于模型对照组，中、高剂量组的MDA明显下降、GSH明显上升，均P＜0.05，具有统计学差异。而TG含量在三个剂量组中差异不大，P＞0.05。
4.3 肝脏组织病理学检查结果
在肝细胞脂肪染色评分方面，相较于阴性对照组，模型对照组大鼠更高，有极显著统计学差异（P＜0.01），说明此模型成功，实验有较高的可靠性。而相较于模型对照组，三个剂量组中中、高剂量组评分明显更低，有显著统计学差异（P＜0.01）。见表1、表2。
表1 破壁灵芝孢子粉胶囊对大鼠肝脏病理变化观察记录
表2 破壁灵芝孢子粉胶囊对大鼠肝脏组织病理学检查结果 （±s）
表2 破壁灵芝孢子粉胶囊对大鼠肝脏组织病理学检查结果 （±s）
注：**表示与模型对照组比较P＜0.01，*表示与模型对照组比较P＜0.05
组别 剂量组(mg/kg.BW)动物数(只) 脂肪染色评分（分）阴性对照 0 10 0.10±0.141**模型对照 0 10 2.48±0.749低剂量 233 10 2.02±0.607中剂量 700 10 1.34±0.566*高剂量 1400 10 1.24±0.672*
5 讨论
破壁灵芝孢子粉胶囊采用经口灌胃的方式持续用于雄性SD大鼠30d后，发现动物能够正常的生长发育[3-5]。建立酒精性肝损伤模型后，中、高剂量组中大鼠肝匀浆中的过氧化脂质降解产物丙二醛含量能够明显下降，肝匀浆中的谷胱甘肽含量上升，均P＜0.05；较之于模型对照组，三个剂量组大鼠肝匀浆中甘油三酯含量无统计学差异（P＞0.05）；在脂肪染色评分方面，中高剂量组明显下降，有显著统计学差异(P＜0.01），组织病理学检查呈现出阳性结果[6]。依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中之规定，破壁灵芝孢子粉胶囊对雌性SD大鼠具有酒精性肝损伤辅助保护作用[7,8]。
