玫瑰花颗粒对抑郁小鼠行为学及血清5-HT的影响

梁明坤， 韦宇婷， 梁杏秋， 覃 辉， 钟 静*

(1.广西中医药大学附属瑞康医院 神经内科， 广西 南宁 530011； 2.广西中医药大学 基础医学院 ， 广西 南宁 530001)

0 引言

抑郁症(Depression)又称抑郁障碍，主要临床特征是显著而持久的心境低落，属于心境障碍的主要类型.近年来，抑郁症患病率呈上升趋势，不仅威胁患者的健康，使生活质量下降，而且给家庭和社会造成极大负担，已成为严重的社会和医疗问题[1].一旦患病将是一个痛苦的过程，每次发作持续至少2周以上、长者甚或数年，并且易反复发作，甚至有自杀倾向[2].

然而，到目前为止，抑郁症的具体病因尚不完全清楚，多因素参与了发病的过程，包括生物、心理与社会环境等方面因素，其中生物学因素涉及了遗传、神经生化、神经内分泌等方面[3]，这就使得抑郁症的研究受到了限制，加上还没有特异性的检查项目，使得很多早期抑郁症患者得不到合理的治疗，西医西药的治疗虽然有一定的疗效，但是副作用大[4]，病情容易反复，有些甚至需要终身服药.因此，很有必要寻找一种更为安全有效的抑郁症治疗方法.

玫瑰花为蔷薇科植物玫瑰的干燥花蕾，其性微温，味甘、微苦，归肝、脾、胃经，具有舒肝解郁、和血调经、开窍化淤、疏肝醒脾等功效[5].玫瑰花是一种具有较高药用价值和经济价值的药用植物，药用历史悠久，历代草本均有玫瑰花在药用方面的记载[6].随着医疗模式的转变和人们保健意识的增强，玫瑰花被制成颗粒剂，在心脑血管疾病治疗、肿瘤预防、抗衰老和美容保健方面都有应用[7,8].

目前，研究玫瑰花对抑郁症的治疗作用及其机理还是很少.研究发现玫瑰花粉具有较理想的抗抑郁活性[9].玫瑰花颗粒比玫瑰花粉较安全稳定、便携，更适合推广.但玫瑰花颗粒的抗抑郁作用及其可能的作用机制尚不够明确.本研究采用慢性不可预知性温和应激( CUMS) 建立小鼠抑郁模型，通过小鼠体重测试、强迫游泳实验、悬尾实验、旷场实验来评价玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠的抗抑郁作用，同时通过 ELISA试剂盒检测小鼠血清中5-HT的含量表达，初步探讨玫瑰花颗粒抗抑郁的作用机理.

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物

SPF级成年雄性ICR小鼠，体重20～22 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号SCXK(湘)2016-0002.饲养温度为(24±1) ℃，光照12 h黑白循环，自由摄食、饮水.实验前，于饲养环境中适应1周.

1.1.2 药物与试剂

玫瑰花颗粒(广西中医药大学附属瑞康医院制剂中心生产，批准文号：国药准字Z41021897)；盐酸氟西汀胶囊(苏州中化药品工业有限公司，国药准字：H20064844)；小鼠5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒(货号：JL12087，上海将来实业股份有限公司).

1.1.3 主要仪器

ANY-maze动物行为分析系统(美国Stoelting公司)；连续波长检测仪(INFINITE M200PRO)；自制全透明强迫游泳圆筒及悬尾实验、旷场实验检测箱.

1.2 实验方法

1.2.1 造模、分组及给药

将60只ICR小鼠随机分为正常对照组，抑郁模型组，盐酸氟西汀组(1.58 mg/kg)，玫瑰花颗粒低(3.67 g/kg)、中(7.34 g/kg)、高(14.68 g/kg)剂量组，每组10只.除正常组对照组，各组小鼠适应性饲养1周后，进行21 d造模，采用孤养结合慢性不可预见性温和刺激方法造模，根据随机数字表不可预见性每天给予1种应激，每种刺激平均出现3次且不连续出现.具体方法包括：夹尾5 min、禁食24 h、禁水24 h、游泳6 min(25 ℃)、悬尾6 min、污笼24 h、无垫料.造模3周后，进行行为学测试，小鼠强迫游泳及悬尾实验不动时间明显增加，可以初步判别小鼠造模成功.造模成功后，小鼠按10 mL/kg进行灌胃给药，每天1次，连续28 d，正常对照组及抑郁模型组给予等容积生理盐水灌胃.

1.2.2 体重检测

实验开始后，分别记录给药第1 d、7 d、14 d、28 d小鼠体重，以观察各组实验小鼠体重的变化.

1.2.3 强迫游泳实验(FST)[10]

动物具体分组及给药方式、剂量、时间同1.2.1，于末次给药1 h后，将小鼠放于直径25 cm，高40 cm的透明圆柱形玻璃缸中，缸内水深15 cm，水温(24±1 ℃)，老鼠停止在水中挣扎，或表现出漂浮状态，只有轻微的身体运动才能使它们的头漂浮在水面上，表现出绝望状态，从小鼠入水后计时6 min，适应2 min，记录后4 min内累计不动时间(s).

1.2.4 悬尾实验(TST)[11]

动物具体分组及给药方式、剂量、时间同1.2.1，于末次给药1 h后，用不粘胶将小鼠尾部1.5 cm处悬挂于悬尾箱内，使其呈倒悬状态，头部距离地面30 cm，小鼠为了能够克服不正常体位而挣扎活动，但在活动的一段时间内出现间断性不动，表现出失望心理状态，记录小鼠停止挣扎不动或无任何活动的时间.用摄像设备记录6 min，适应2 min，记录后4 min累计不动时间(s).

1.2.5 旷场实验(OFT)[12]

动物具体分组及给药方式、剂量、时间同1.2.1，于末次给药1 h后，将小鼠放入敞箱，敞箱装置为长宽各60 cm，高25 cm，底面划一个30 cm×30 cm等边方格的木箱，使其与外框组成“回”字形方格，内面用黑漆涂满.将小鼠从边缘放入装置内，用摄像设备观察小鼠7 min，适应2 min，记录后5 min内总运动距离及穿越至中心方格次数(四爪均进入的方格方可计数)，在观察下一只小鼠之前，用75%的酒精和1%的次氯酸钠彻底清洁敞箱.

1.2.6 单胺类神经递质5-HT的测定

最末次行为实验结束后，立即麻醉，心脏采血0.5～1.0 mL，室温下静置90 min，4 ℃ 3 000 r/min离心15 min后，取上清液，-20 ℃保存待测.严格按照ELISA试剂盒操作说明书步骤测定实验小鼠血清5-HT的含量.

1.2.7 统计学分析

2 结果与讨论

2.1 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠体重的影响

在给药第1 d、7 d、14 d、28 d，给药前后各组小鼠体重均无显著性差异.其结果如图1所示.

图1 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠体重的影响

2.2 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠强迫游泳(FST)的影响

给药第7 d、14 d和28 d，与对照组相比，模型组小鼠强迫游泳不动时间明显增加(P<0.05)；与模型组相比，玫瑰花颗粒高、中剂量组小鼠强迫游泳不动时间均显著减少 (P<0.05，P<0.01)，而盐酸氟西汀组小鼠不动时间均无明显变化.其结果如图2所示.

与对照组对比：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：#P<0.05,##P<0.01

2.3 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠悬尾实验不动时间的影响

给药第7 d、14 d和28 d，与对照组相比较，模型组小鼠悬尾不动时间显著增加(P<0.05)；与模型组相比，给药第7 d，盐酸氟西汀组和玫瑰花颗粒高剂量组小鼠的悬尾不动时间均显著减少 (P<0.01，P<0.05 )，但给药第14 d及28 d，盐酸氟西汀组和玫瑰花颗粒各给药组小鼠的悬尾不动时间均无明显改善(P> 0.05).其结果如图3所示.

与对照组对比：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：#P<0.05,##P<0.01

2.4 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠旷场实验的影响

在旷场实验,给药第7 d、14 d和28 d，与对照组相比，模型组小鼠水平总运动距离明显减少(P<0.01)；与模型组相比，盐酸氟西汀组和玫瑰花颗粒低、中、高剂量组均能明显增加CUMS模型小鼠的水平总运动距离(P<0.05，P<0.01)；而盐酸氟西汀组在给药第14 d后小鼠的旷场实验水平总运动距离无明显变化(P>0.05).在给药第7 d后，盐酸氟西汀组及玫瑰花颗粒各剂量组均能明显增加旷场实验中小鼠进入中心方格的次数(P<0.05，P<0.01 )，而在给药第14 d和28 d后，盐酸氟西汀组及玫瑰花颗粒各剂量组均无效(P>0.05).其结果如图4、5所示.

与对照组对比：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：#P<0.05,##P<0.01

与对照组对比：*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较：#P<0.05,##P<0.01

2.5 玫瑰花颗粒对CUMS模型小鼠血清5-HT的影响

与对照组相比，模型组血清5-HT含量明显低于对照组(P<0.01)；给药28 d后，与模型组相比，玫瑰花颗粒高、中剂量组血清5-HT含量明显增高(P<0.01，P<0.05).其结果如图6所示.

随着发病率逐年上升，学者们对抑郁症的研究也越来越关注.为研究抑郁发病及机制，研究者经过不断探索，对抑郁症不同的动物模型进行实验研究，而良好、有效的动物模型更能真实反映研究的客观性与科学性，有利于抑郁症的临床治疗[13].由于慢性不可预见性温和应激抑郁模型的造模方法与临床上抑郁症患者发病主要原因接近，能较好地模拟抑郁状态[14].因此，在这项研究中，采用传统的建模方法长期不可预知温和刺激经典模型建立小鼠抑郁模型.其理论研究依据与人类对于抑郁症中慢性、低水平的应激源导致我国抑郁症的发生并加速中国抑郁症进行发展的机理更接近，小鼠利用单独饲养模式模拟人类失去社会和家庭支持的孤独状态[15-18].

实验研究结果分析显示，玫瑰花颗粒给药第1 d、7 d、14 d、28 d，给药前后各组小鼠体重均无显著性差异，说明玫瑰花颗粒对小鼠体重无影响，其原因可能是玫瑰花颗粒是玫瑰花的提取物制成的颗粒剂，与特殊工艺制备得到的玫瑰花粉末发挥药效的部位不一致.与对照组相比，抑郁模型组小鼠在旷场实验中水平总运动距离显著缩短，且进入中心方格次数显著减少.水平总运动距离缩短说明了动物进行的活动度降低，进入中心方格次数减少反映了模型组小鼠对新鲜生活环境的好奇程度降低，强迫游泳和悬尾不动时间的延长反映了动物的行为绝望状态的增加[19].可见，该动物模型表现为抑郁，活动减少，兴趣丧失和抑郁症的临床表现相似，这种抑郁状态可以维持数月，是较理想的抑郁动物模型[20].

3 结论

研究结果表明，与模型组相比，不同剂量玫瑰花颗粒均能显著增加小鼠的自发活动及运动距离，可见玫瑰花颗粒具有较好的抗抑郁作用.本研究中的强迫游泳不动时间的实验数据提示玫瑰花颗粒不但具有明显的抗抑郁作用，且随着剂量的升高，抗抑郁的效果更好.单胺递质不足是抑郁症发病的原因之一[21,22]，Elisa实验结果显示玫瑰花颗粒能显著增加小鼠血清5-HT含量.因此，加强对单胺递质的研究，有助于中医药对抑郁症的预防与治疗.

综上所述，玫瑰花颗粒能明显改善小鼠抑郁行为，且能显著增加血清5-HT含量，但具体的作用机制有待进一步研究.