精浆AMH 水平与精液质量的相关性研究及临床价值分析

凌彩玲，赵可伟，杨皓云，赵清，区旭春

(广州中医药大学第三附属医院检验科，广东 广州)

0 引言

男性精液质量是直接导致男性不育的重要原因之一。成年男性睾丸支持细胞产生抗苗勒氏管激素（anti-Müllerian hormone, AMH)，因此AMH 可能与精子发生有一定关系。抗苗勒氏管激素（AMH），被归为转化生长因子超家族，能够对组织的生长以及分化起作用[1]。广泛参与了生殖细胞的调控、性腺的发育及睾丸的下降。已有研究表明精浆中AMH 能够在精子生成期间发挥调节作用，与精子密度、存活率呈明显正相关[2-3]。李常林等报道不育患者与正常生育力男性精浆AMH 存在明显关系[4]。精浆中AMH 水平降低是男性不育的危险因素。本实验是测定男性精浆中AMH 水平，分析精浆中AMH 水平在男性精液中的浓度。研究AMH 水平对于男性在生育能力中能否给临床提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本实验选择两个组作为研究对象：其中A 组为对照组，B 组为不育组。B 组对象为广州中医药大学第三附属医院桥东院区不孕不育门诊就诊的不育症患者。患者年龄为25-35 岁，平均（26±4.5）岁，无避孕措施，正常备孕1 年以上不育者，女方无生殖系统疾病;A 组选择年龄25～38 岁，平均（25.5±5.5）岁健康已育捐献者。A 组30 例：精子计数大于（或等于）20×109/mL， 精子活率大于75%，（a+b）级精子大于50%,或a 级精子大于25%，精浆PH7.0-8.0，排精量2-7mL 平均为（4±0.5） mL，液化时间小于30min，正常形态精子率大于30%；B 组按照精液中的精液理化检查、显微镜动力学检查、形态等常规参数分B1-B5 五组；B1（精液指标无异常）28 例：精子数量、生存率、活动力、形态等常规指标无异常；B2（精液指标异）32 例：精子数量、生存率、活动力、形态等常规参数指标中存在一个或以上不正常；B3（轻度弱精症）8 例：30%≤（a+b）级精子＜50%；B4（中度弱精症）10 例：15% ≤（a+b）级精子 ＜30%；B5（重度弱精子）14 例：（a+b）级精子＜10%。

1.2 实验仪器与试剂

精液常规参数测定采用北昂医疗BEION V4.20 医学图像软件。AMH 测定采用采用上海江莱生物生产的ELISA 试剂盒。AMH 水平测定采用Rayto-2100C 酶标分析仪。

1.3 方法

1.3.1 精液标本采集

精液标本采集为手淫法，禁欲时间3-7d，将一次射出的全部精液收入干净容器内，置37℃水浴箱内，并每隔10 分钟观察一次，用滴管法观察液化时间。精浆标本制备：精液常规检测后，剩下的精液以 3000r/min 离心10 min，取精浆0.5mL放置于专用5mL 试管中，并于-80℃保存待测。

1.3.2 精浆中AMH 水平的检测

采用Rayto-2100C 酶标分析仪测定，具体操作如下：㈠标本及试剂准备：提前60min 把实验用精浆及AMH 测定试剂盒从冰箱取出置于室温。精浆进行复融操作、AMH 试剂盒平衡至室温。复融后的精浆1000×g 离心20 分钟，取上清即可检测。此操作由专业的检验技术人员严格按照试剂盒操作规程进行检测。

1.3.3 精液检测分析

采用国产北昂医疗BEION V4.20 医学图像软件系统对精液中的精液理化检查、显微镜动力学检查、形态等常规参数进行全自动检测。

1.3.4 统计数据分析

2 结果

2.1 A 组与B 组精浆AMH 水平结果比较

B 组精浆AMH 水平均低于A 对照组 （P＜0.05)；B2 组精浆AMH 水平低于B1 组（P＜0.05）与A 组(P＜0.01，见表1)。

表1 A 组与B 组精浆AMH 水平结果比较

2.2 A 组与B2-B5 组精浆中AMH 水平结果比较

各组不育症患者中精浆AMH 水平均低于对照组（P＜0.05)；三种程度弱精子症随着精子活力降低，精浆AMH 水平分别对应降低，组间结果差异有统计学意义(P＜0.05）如表2。

表2 不育症指标异常组精浆AMH 水平与A 组结果比较

2.3 精浆中AMH 水平与精液其他参数相关性分析

精浆中AMH 水平与精子数量无相关性（P＞ 0.05）；精浆中AMH 水平与精子活动率呈正相关，其中轻度、中度弱精（P＜0.05）；重度弱精（P＜0.01)。而精浆中AMH 水平与精子畸形率在本次研究中暂未显示存在明显相关性。如表3。

表3 精浆AMH 水平与精液其他参数相关性分析

3 结果及讨论

精液的成分是复杂多样的，目前常规检查可知它当中包含了精子、前列腺液、精囊液等成分，并且这些物质在正常状态是处于平衡状态的。一般的精液常规检查只专注于精子的数量、活动率、畸形率等，而对精浆中的其它成分了解甚少。从而导致了许多精液常规参数正常的不育症患者得不到有效治疗。随着科学技术的不断发展，得以让更多问题浮现。精浆中的各种成分研究也引起了重视与关注。实际上，精浆中的各种成分也能直观的反映男性生殖系统的状态，为临床不育症患者的诊断与治疗提供更多的依据。

目前对精浆成分的研究已趋向常态化与多元化，如对精浆中弹性蛋白酶（SPE）、精浆超氧化物歧化酶SOD 活性,精浆ROS、PON-1、MDA 联合精子DNA 碎片检测精子状态，精浆α-葡萄糖苷酶等等一系列研究都已明确证实了精浆中的成分能对精液产生直观的影响。给不育症患者的临床治疗提供依据[5-9]。

抗缪勒管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）,由阿尔弗雷德约斯特教授在二十世纪四十年代发现[10]AMH 在男性和女性体内均有表达，但在生物学作用上存在差异。在女性当中，AMH 广泛用于评估卵巢储备功能、 辅助生殖、诊断多囊卵巢综合征、预测绝经期及诊断卵巢早衰、作为颗粒细胞肿瘤的一个特异循环指标等[11]。而在男性当中，血清AMH 检测用于隐睾症和无睾症的鉴别诊断[12]。对于精浆中AMH 水平，曾有国内外研究初步认它与精子的密度、存活率有相关性[2-3]。国内早期有报道称不育患者与正常生育力男性精浆中AMH 存在差异[4]，与BMI 无明显相关性[13]因此对于肥胖或超重不育患者精液质量评估，精浆AMH 更具意义。同时AMH 也可应用于无精症患者生育能力的评估[14]。AMH 作为精浆的重要组成物之一，它的含量变化是否对不育症有临床意义？国内外对此研究有限，甚至未见同类文献报道。基于以上情况，本研究以此出发，深入研究精浆中AMH 的水平变化对精液的影响。在研究中我们发现男性不育组精浆AMH 水平低于正常已育组，我们的实验提示精浆中AMH 水平测定对男性的生育有指导意义[4]，精液常规指标异常的男性不育组精浆AMH 水平也低于指标正常的男性不育组。实验提示精浆中AMH 水平可明显影响常规精液参数，特别是对精子的活动能力具有决定性作用。可作为精子活动能力评价的一个独立性检测指标。

本研究显示精浆中AMH 水平的变化对精子的后动能力产生的影响最为明显（P＜0.05)，而对精子的密度、畸形率等作用暂不明显（P＞0.05)。精子的生成是一个紧密、严谨并高度有序的过程，整个过程都依赖丘脑-垂体-性腺轴调节，而其中卵泡激素与睾酮等不能直接作用于生精细胞，主要是与睾丸支持细胞上的受体结合，而成年男性睾丸支持细胞产生AMH，AMH 广泛参与了生殖细胞的调控和性腺发育、诱导睾丸下降等，因此可推测AMH 与精子的发生有一定的联系。但精浆中的AMH 是通过何种机制影响精子活动能力的暂时不得而知，还需作进一步的研究。

综上所述，精浆中AMH 水平高低可明显影响精子的质量，导致男性不育症的发生。精浆中AMH 对精子的活动能力影响尤为明显，临床在治疗精子的活动能力低下时，可适当考虑从提高精浆AMH 水平入手，直接使用能刺激睾丸产生AMH 的药物，提高精浆中AMH 的浓度，从而增强精子的活动能力，改善精子整体质量，提高生育能力。