新吉富罗非鱼人工催产试验

王茂元，胡振禧，田田

（福建省淡水水产研究所，福建 福州 350002）

罗非鱼原产于非洲，属于鲈形目（Perciformes）、丽鱼科（Cichlidae）、罗非鱼属，常见品种有尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）、奥利亚罗非鱼（O.aureas）、莫桑比克罗非鱼（O.mossambica）等。因其具有食性杂、生长快、抗病力强、繁殖力强、肉质好、群体产量高等优点，已经成为全世界广泛养殖的淡水鱼类之一，也是我国南方地区重要的出口创汇品种。罗非鱼具有性成熟早、产卵周期短、一年多次营巢产卵、口腔孵育等特点，同时对繁殖条件要求不高，生产中罗非鱼苗的获得主要还是依靠其自然繁殖，很少有人对其进行人工催产繁育研究。随着罗非鱼产业的不断发展壮大，为改善和提高其生产性能，一些学者利用家系选育、远缘杂交、雌核发育、多倍体选育等方法对罗非鱼进行品种选育时，就需要获得大量的成熟卵子或受精卵。但罗非鱼属一年多次产卵型鱼类，其个体间性腺发育不同步，卵子成熟过程短，进行人工繁殖比较困难，难以获得大量成熟卵子进行人工授精，已经成为制约罗非鱼遗传育种的瓶颈问题，也影响罗非鱼相关研究的深入开展。

目前，国内外关于使用催产激素诱导罗非鱼性腺发育或进行人工催产繁育的研究报道较少，所使用的受试鱼和激素的种类与剂量也不尽相同。该研究通过注射不同催产药物组合与剂量，评估混合催产激素对新吉富罗非鱼繁育的影响，为今后开展罗非鱼全人工催产与繁殖奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验用新吉富罗非鱼亲鱼由福建省淡水水产研究所科研中试基地提供，该鱼原引于上海海洋大学水产动物种质试验站，均为1 龄鱼，体重350-500 g/尾。催产药物地欧酮（DOM）、绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体素释放激素A2（LRH-A2）、促黄体素释放激素A3（LRH-A3）均购自宁波第二激素厂。

1.2 雌、雄亲鱼的判别与培育

雌性罗非鱼腹部有3 个孔，即肛门、生殖孔和泌尿孔，泌尿孔在生殖突起的顶端，生殖孔位于肛门和泌尿孔之间，外形为“一”字形的狭长开口，且与生殖突垂直。雄性罗非鱼只有2 个开孔，即肛门和尿殖孔。2019 年4 月选择外部生物学特征明显、无病无伤和体型健壮的亲鱼各100 尾，分别放养在水深1.0 m 和面积100 m2的水泥池中培育。培育期间水温为20～28 ℃，pH 值6.7～7.9，微孔增氧，投喂粗蛋白含量为32%的罗非鱼专用配合饲料，日投饵量为鱼体质量的5%左右。

1.3 试验方法

1.3.1 性成熟亲鱼的选择 催产前1 d 通过活体检视法，分别从亲鱼培育池选择性腺发育良好雌、雄鱼各60 尾，分别暂养在2.0 m×1.0 m×1.2 m 的网箱中。活体检视方法为：性成熟较好的雌鱼，腹部隆起且柔软，性腺轮廓明显，生殖孔颜色为粉红色，轻轻挤压腹部有卵子流出，且卵粒游离有弹性；雄性成熟的雄鱼轻挤腹部有透明、稍黏稠的精液从尿殖孔射出。

1.3.2 催产药物组合与注射 雌、雄罗非鱼亲鱼采用一次性腹鳍基部注射法催产，雄鱼注射剂量为雌鱼的一半，注射剂量控制在1 mL/尾以内。试验设试验组和空白对照组，试验组催产药物分为3 个组合为：

①DOM6 mg/kg+LRH-A26 μg/kg+HCG 2000IU/kg；

②DOM9 mg/kg+LRH-A29 μg/kg+HCG 3000IU/kg；

③DOM 12 mg/kg+LRH-A212 μg/kg+HCG 4000 IU/kg。

空白对照组注射相同剂量的生理盐水。催产后的亲鱼按照雌雄比例1∶1 放入1.0 m×1.0 m×1.0 m的网箱中，每个网箱2～3 对亲鱼，每个网箱放置一个微孔增氧进行24 h 不间断增氧，催产时水温为（28.6±0.5）℃。

1.3.3 人工授精 催产后24 h 检查雌鱼含卵数量，若已经含卵，则不用进行人工授精，若未含卵则进行人工授精，此时发情的雌鱼生殖突会突出。人工授精采用干法受精法，将雌雄亲鱼捞起，用毛巾擦干，先将雌鱼卵子挤入不锈钢盆中，然后用同样的方法挤入精液，用羽毛轻轻搅动，使得精卵充分混合。然后加入清水轻轻搅拌后静置1 min，倒掉污水，再用清水清洗2～3 次，放入孵化器内进行孵化，孵化期间发现有坏死卵时进行剔除，定期换水，水温27.3 ℃。

1.4 受精卵孵化

将受精卵转移至45 cm×30 cm×35 cm 的鱼缸内孵化，缸内设有40 目的15 cm×10 cm×12 cm 孵化网，微充气，使受精卵翻滚悬浮。孵化期间若发现有死卵立即剔除，避免破坏水质，防止受精卵感染水霉。

2 结果

2.1 催产后亲鱼行为观察

人工催产后，经过一段时间亲鱼开始发情，产卵前，亲鱼在网箱内开始相互追逐打斗，雄鱼由于个体上的优势，占据网箱下层水体，雌鱼则在上层水体。即将产卵时，雌鱼生殖突突起，在水层底部游动，并由有做窝行为，不停用嘴啃食网箱底部，在此期间，雄鱼会主动与之嬉咬、追逐、打转，直到雌鱼产卵，雄鱼排精，然后雌鱼会随即将卵吸入口中进行孵化，雌鱼每隔数分钟产卵一批。

2.2 催产结果

此次共催产亲鱼48 对，其中药物组合①共催产16 对，产卵6 对，平均产卵率为37.5%，平均受精率为70.6%；药物组合②共催产20 对，产卵13 对，平均产卵率为65.0%，平均受精率为93.4%；药物组合③共催产12 对，死亡2 对，产卵6 对，平均产卵率为60.0%平均受精率为86.3%。在水温为28.6±0.5 ℃时，催产效应时间20～26 h。

2.3 受精卵观察与孵化

新吉富罗非鱼卵为沉性卵、无黏性，形如鸭梨，充满卵黄，尖的一端为动物极，钝的一端为植物极。卵粒的大小随着亲鱼的大小而略有差异，当受精卵吸水后，卵粒膨胀，卵膜透明，整粒卵饱满而富有弹性。在水温为（28.6±0.5）℃时，受精卵孵化时间为60～72 h，其在人工条件下孵化培育成活率较高，除个别畸形鱼苗出膜2～3 d 后死亡外，正常鱼苗基本都能存活。

3 讨论

罗非鱼为一年多次产卵鱼类，且性腺发育不同步，在进行人工催产繁殖的时候不易选出成熟度合适的亲鱼，会直接影响人工繁殖的效果。因此，罗非鱼亲鱼性腺的成熟度对催产试验起重要作用。在繁殖季节，性腺成熟好的雌鱼，顺着卵巢方向稍用力挤压，能挤出卵，且卵粒游离，饱满有弹性。性成熟的雄鱼轻挤腹部，会有透明、稍黏稠的液体从尿殖孔射出。经实践证实，建议罗非鱼人工催产繁育的时节选择在年初越冬后第一次产卵期进行效果较好。

在生产中，为促使亲鱼能集中产卵，满足生产性育苗的需求，可适当采取生理、生态学调控措施，其中用性激素及类似物进行促熟催产较普遍。不同剂量催产激素的催产效果也不同，剂量过低其催产效果不明显，剂量过高则可能抑制催产效果甚至导致亲鱼死亡，该试验中，催产药物组合②的效果较好，产卵率和受精率较高，说明应当使用适量比例的多种催产激素组合人工催产罗非鱼。