血清PTX3及GP73水平对酒精性与非酒精性脂肪性肝病的鉴别诊断价值

张海玲 付 岭 朱国玲 张艳敏 张 杰 蒋晓忠

近年来，随着人们生活水平的提高及生活方式的改变，脂肪性肝病的发病率呈逐年上升趋势，且发病人群趋于年轻化[1-2]。根据是否存在过量乙醇摄入，可将脂肪性肝病分为酒精性脂肪性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)[3]。前者因长期饮酒，导致乙醇及其代谢产物堆积所引起，易进展为肝硬化、肝纤维化及重症肝炎等，威胁患者的生命安全；后者则与代谢综合征及胰岛素抵抗等有关，可升高心脑血管疾病的发病风险[4-5]。由于脂肪性肝病缺乏特异性症状，且不同类型之间容易混淆，易被误诊，从而影响患者的疗效，故对于脂肪性肝病类型的鉴别诊断尤为重要。正五聚蛋白3(PTX3)是一类具有抗炎、调节脂代谢、降低胰岛素抵抗的生物学效应的脂肪因子，高尔基体73(GP73)是一类常用于诊断肝细胞癌的生物学标志物，目前关于两者应用于鉴别诊断AFLD与NAFLD的报道较少。本研究检测了AFLD与NAFLD患者血清PTX3和GP73的表达水平，并探讨两者的鉴别诊断价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年5月至2019年5月在开滦总医院体检的103例脂肪性肝病患者的临床资料，根据体检结果分为AFLD组(13例)及NAFLD组(90例)。纳入标准：(1)AFLD组、NAFLD组患者分别符合《酒精性肝病防治指南(2018年更新版)》[6]、《非酒精性脂肪性肝病防治指南(2018更新版)》[7]中的诊断标准；(2)年龄为25～65岁；(3)预计生存期≥1年。排除标准：(1)合并心、肺、肾等严重功能障碍者；(2)肝细胞癌、自身免疫性肝病、病毒性肝炎、肝硬化及其他慢性肝病患者；(3)恶性肿瘤患者；(4)妊娠、哺乳期者；(5)血液系统疾病患者；(6)精神疾病患者。AFLD组中男性10例，女性3例；年龄为25～65岁，平均年龄为(47.08±12.39)岁；肝功能Child-Pugh A级9例，B级3例，C级1例。NAFLD组中男性67例，女性23例；年龄为26～65岁，平均年龄为(47.15±12.48)岁；肝功能Child-Pugh A级62例，B级23例，C级5例。两组的性别、年龄相比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 血清PTX3及GP73水平检测方法

两组患者在清晨空腹状态下，采集5 mL外周血，3 000 r/min离心处理15 min，取上层血清，-80 ℃冷藏待检。样本检测：采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清PTX3水平，试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。采用双抗体夹心法检测血清GP73水平，试剂盒由上海江莱生物科技有限公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。96孔微孔板内置入抗人GP73抗体，配备固态载体，并向其中依次滴入血清样本及标准品，洗板，滴入生物素化抗人GP73抗体，洗净未结合生物素化的抗体后，滴入辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素，完全洗净后再滴入底物(TMB)显色。HRP催化使得TMB转变成蓝色，滴入稀硫酸后停止反应，最终转变成黄色，样本中的GP73表达水平与颜色深浅呈正相关。设置酶标仪波长为450 nm，空白孔校零后测量各孔吸光度值(A值)，A值与样本中GP73表达水平呈正相关，采用标准曲线计算样本GP73的水平[8]。记录并比较两组患者血清PTX3及GP73水平的差异。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组的血清PTX3及GP73表达水平比较

由表1可知，AFLD组的血清PTX3和GP73表达水平均高于NAFLD组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。

表1 两组的血清PTX3及GP73表达水平比较()

2.2 血清PTX3和GP73的表达水平对AFLD与NAFLD鉴别诊断的价值

由表2及图1可知，血清PTX3水平对AFLD与NAFLD鉴别诊断的AUC为0.753，敏感度为79.2%，特异度为74.7%；血清GP73诊断的AUC为0.846，敏感度为84.6%，特异度为80.5%；两者联合诊断的AUC为0.947，敏感度为94.6%，特异度为86.5%，均高于单项诊断，差异均有统计学意义(P均<0.05)。

由表3可知，以NAFLD为因变量，将PTX3、GP73作为自变量，经多因素Logistic回归分析显示，PTX3、GP73均为影响NAFLD的独立危险因素。

表2 血清PTX3及GP73水平对AFLD及NAFLD鉴别诊断的价值

表3 NAFLD影响因素的Logstic回归分析

图1 血清PTX3和GP73水平及两者联合诊断价值的ROC曲线

3 讨论

脂肪性肝病系由多种因素导致的脂肪过量堆积于肝细胞中而引起的病变，是临床常见的一种肝脏病变类型[9-10]。脂肪性肝病可分为AFLD和NAFLD，其中以NAFLD患者居多，根据病情严重程度又可分为轻、中、重度NAFLD[11]。脂肪性肝病已成为继病毒性肝炎后又一大严重威胁人类健康的肝病，且近年来年轻人群的发病率显著升高。脂肪性肝病患者的临床症状隐匿，易与其他肝病混淆，常被忽视；其为可逆性疾病，通过及时诊断及治疗便可痊愈。鉴别诊断脂肪性肝病的类型有助于进行针对性治疗[12-13]。目前可根据患者的病史、临床症状辅以实验室检查结果及影像学检查来诊断脂肪性肝病的类型[14]。

AFLD患者多有5年以上的饮酒史，且因摄入乙醇含量不同存在程度各异的肝损伤，此类患者易进展为肝硬化、肝纤维化、酒精性肝炎甚至肝细胞癌等[15]。目前AFLD缺乏特异性诊断标志物，确诊难度较高。NAFLD的发生机制尚未明确，已知其与代谢异常、胰岛素抵抗、氧化应激反应等密切相关，故临床中多以血糖、血脂水平来诊断此病[16]。

PTX3是一种由381个氨基酸组成的五聚体蛋白脂肪因子，主要由脂肪细胞、树突状细胞及单核/巨噬细胞受脂多糖、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)等刺激分泌而来，且只在内脏脂肪及胚胎中表达，已被证实可在多种疾病中扮演重要角色。PTX3与多种可溶性受体配基结合，参与调节血管再生、细胞凋亡、动脉粥样硬化、免疫防御等过程，且其水平受多种因素影响。有研究报道，PTX3在NAFLD中表达水平较高，并参与了肝纤维化的发生、发展[17]。目前关于PTX3在AFLD和NAFLD患者中的表达情况的报道较少。本研究结果表明，AFLD组患者血清PTX3表达水平高于NAFLD组患者。

GP73是一类特异性Ⅱ型高尔基体跨膜蛋白，又名高尔基膜蛋白1(GOLM1)或者高尔基体磷蛋白2(GOLPH2)。GP73由膜内区域、疏水N端及膜外C端组成，跨膜结构完整。一般情况下，GP73只在胆管上皮细胞中表达，在肝细胞中的表达水平较低甚至不表达[18-19]。GP73在肝细胞癌、病毒性肝炎、肝硬化等肝病患者中的表达水平较高，并与肝纤维化程度呈明显相关性，提示GP73可作为肝损伤的一类特异性标志物[20]。本研究结果显示，与NAFLD组患者比较，AFLD组患者血清GP73表达水平明显升高，提示GP73是一类潜在的肝病诊断标志物。此外，本研究结果亦表明，血清PTX3及GP73表达水平对AFLD与NAFLD具有一定的鉴别诊断价值，且两项联合检测的效能优于单项检测，提示两者联合检测的诊断价值较高，值得临床推广应用。