密花豆的保育学研究进展△

朱艳霞，林杨，黄燕芬，秦双双，韦坤华

广西壮族自治区药用植物园 广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，广西 南宁 530023

鸡血藤是豆科密花豆属（Spatholobus）植物密花豆Spatholobus suberectusDunn 的干燥藤茎，具有补血活血、调经止痛、舒筋活络的功效，主治月经不调、痛经、经闭、风湿痹痛、麻木瘫痪、血虚萎黄[1]，始载于清代《本草备要》[2]。近代研究表明，鸡血藤主要化学成分包括黄酮类（如芒柄花素、黄苷草苷、芒柄花苷、染料木素等）、萜类、甾醇类、蒽醌类、木脂素类、香豆素类、酚酸类等成分，具有调节血液系统、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、抑制黑色素沉着等多种药理活性[3]。鸡血藤颗粒、花红片、正天丸、妇科千金片等200 多个中成药的原料中均包含鸡血藤，市场用量较大[4]。随着医药行业对鸡血藤相关产品的开发，其市场需求量不断加大，过度采挖导致我国野生资源十分短缺，商品药材多从越南、缅甸、柬埔寨进口。因此，了解密花豆资源现状、掌握其生长发育规律、加强保育学研究，对促进鸡血藤产业健康发展、实现资源可持续利用具有重要意义。

1 资源现状

密花豆属植物约40 种，其中密花豆为我国特产，主要分布于云南、广西、广东和福建等地海拔800～1700 m 的山地疏林、密林沟谷或灌丛中[5]。广东境内野生资源主要分布于粤北、粤东北、粤中及粤西山区；广西境内主要分布于贺州、玉林、梧州、防城港等南部地区的山地林中；云南主要分布于云南南部地区；福建也有少量分布。其中，广东、广西境内野生种群多生长于不易到达的深山林中，资源已濒临枯竭；云南的野生种群保存较好，但资源蕴藏量较少[6]。

经市场调查，目前我国安国、亳州、荷花池、玉林四大药材市场上的鸡血藤药材主要从越南、缅甸、柬埔寨等东盟国家进口，统货批发价为9～10 元/kg，选货为11～12 元/kg，大货主要供应华润三九医药股份有限公司、北京同仁堂股份有限公司、广西灵峰药业有限公司等药品生产企业，市场年需求量约1～2万t。

2 迁地保育

2.1 密花豆生物学特性

密花豆为大型木质藤本，喜缠绕，不耐寒，稍耐阴，喜欢深厚、肥沃、湿润、疏松、排水良好的林间熟地，但在贫瘠干旱的地方也能够生长，适应性比较强，具有较好的抗逆性能力。其幼年生长较慢，3～4年后可迅速生长[7]。花期6月，果期11—12月，结实率低，荚果近镰形，长8～11 cm，含种子1 粒，种子扁长圆形，长约18.19 mm，宽约8.93 mm，厚5.06 mm，千粒质量537.53 g[8]。新鲜种子含水量27.27%，发芽率96.70%，随种子含水量的降低其发芽率逐渐降低，当含水量为12.08%时，发芽率降至70.00%[9]。

2.2 引种驯化

2.2.1 引种材料 采用种子繁殖的密花豆于12 月采收成熟种子，随采随播；采用扦插繁殖的密花豆全年均可进行繁殖，从生长健壮、无病虫害的母株上剪取长20～25 cm 且带2～3 个芽的木质化枝条作插穗。

2.2.2 物候期观察 通过对引种到广西药用植物园的密花豆长期观察得出，扦插苗苗期生长比较缓慢，扦插后约20～30 d 插条陆续生根及萌芽，50～60 d 插条平均生根可达3 条以上。育苗3～6 个月后，在苗高>40 cm 时移栽。移栽后第一年，植株灌木状，主藤茎长1～2 m，人工辅助牵引使其缠绕上高大乔木或藤架，全年生物量积累为1～2 kg/株。移栽后第二年，主藤茎长3～4 m，侧枝增至2～4 条，生物量积累至4～6 kg/株。移栽后第三年，生长速度加快，主藤茎徒长，长可达10 m 以上，基部茎粗2 cm 左右，生物量积累至10 kg/株以上。移栽后第四至十年，侧枝数不断增加，主茎优势不明显，每年5—9 月为快速生长期，11 月至次年2 月为缓慢生长期，基部茎粗2～5 cm，藤茎长20～40 m，生物量积累至40 kg/株以上，树冠面积可达20 m2以上。

2.2.3 生态适应性 密花豆的生态适应性较强，山林间、溪边及灌丛均可生长。席飞飞等[10]研究表明，在火龙果和荔枝树下栽培5 年的鸡血藤植株表现出良好的适应性，但火龙果树下栽培的鸡血藤存活率、生物量、生理生化指标等均明显高于荔枝树下栽培的鸡血藤。叶面喷施25 mg·L-1硫酸锌+50 mg·L-1硼砂能促进黄酮类化合物的积累[11]。施用添加适量硼砂的农家肥较有利于醇溶性浸出物、总黄酮、原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素的含量的形成与积累[12]。李斌等[13]研究表明，随着栽培年限的增加，总黄酮的含量有逐渐增加的趋势，但均低于广西野生品。吕惠珍等[14]研究表明，随着栽培年限的增加，水浸出物含量也有逐渐增加的趋势。

2.3 种苗繁育

2.3.1 扦插繁殖 由于密花豆结实率低，难以获得大量种子，因此生产上常用无性繁殖。密花豆插穗生根类型为皮部生根型，生根较容易。扦插繁殖是密花豆最常见的繁殖方式。黄雪彦等[15]研究表明，扦插最佳条件为300 mg·L-1的ABT1 号生根粉浸泡2 h，选用具有2～3 个芽体的木质化硬枝，于春季扦插于珍珠岩或砂壤质黄心土，生根率>87%。谢金兰等[16]研究表明，以1～3 年生粗度>0.8 cm 的木质化枝条做插穗，用500 mg·L-1双吉尔生根粉（GGR）浸泡插穗基部1 h，于春季扦插于黄心土的育苗基质上，生根效果最好。曲芬霞等[17]研究表明，利用8年生以下、茎粗为0.7～1.0 cm 的木质化枝条做插穗，100 mg·L-1的吲哚丁酸（IBA）和200 mg·L-1ABT2号生根粉混合溶液浸泡2 h，于12 月下旬至次年1 月中旬扦插效果最佳。苏辉兰等[18]研究表明，育苗基质以泥炭土-蛭石（1∶1）为佳，50 mg·L-1吲哚乙酸（IAA）浸泡插穗1 h后生根率最好，可达4.36条/株。荣广天等[19]研究表明，选择木质化程度高的枝条为插穗，用300 mg·L-1萘乙酸（NAA）浸泡30 min，能较大程度的提高成活率。芦进财[20]对鸡血藤扦插苗的质量进行了分级，初步得出以苗高、分枝数、茎粗为分级指标，一等苗苗高>7.4 cm、分枝数>3、茎粗>3.49 mm，二等苗苗高1.6～7.3 cm、分枝数2～3、茎粗2.38～3.48 mm，不合格苗苗高≤1.5 cm、分枝数≤1、茎粗≤2.37 mm。

2.3.2 压条繁殖 密花豆藤茎长，分枝多，且多年生植株的匍匐枝条较多，适于压条繁殖。卢沅沅等[21]选用当年生木质化枝条于11 月作压条处理，15～30 d可见白色细嫩的根系，次年开春即可剪下枝条栽植，压条繁殖的生根速度较快，但繁殖效率较低。

2.3.3 组培繁殖 密花豆枝条的汁液多，组织培养时材料易发生褐化。吴桂容等[22]以嫩叶为材料，筛选出愈伤组织诱导的理想培养基为MS 培养基+1.0 mg·L-16-苄氨基嘌呤（6-BA）+0.5 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+0.1 g·L-1维生素C，诱导率达95%，此培养基也具有防止愈伤组织褐化的效果。张亚芳[23]研究表明，愈伤织诱导的最适外植体是嫩叶，愈伤组织诱导培养基为MS 培养基+0.9 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1激动素（KT）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1琼脂，诱导率达88.3%，不定芽分化的最适培养基为MS 培养基+2.5 mg·L-16-BA+0.4 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1赤霉素（GA3）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1琼脂，生根诱导的最适培养基为1/2MS培养基+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1琼脂，内源激素动态调节愈伤组织诱导和芽分化过程，IAA 含量增加有利于愈伤组织形成，GA3含量增加有利于芽分化[24]。

2.4 种质资源保存

密花豆为大粒种子，成熟时含水量较高，保存前需将种子含水量干燥至10%以下，密封贮藏于0～10 ℃。

3 回归保育

3.1 回归保育的适宜区域

适合密花豆回归引种的区域是亚热带水源充足的常绿阔叶林或次生毛竹林，还应满足以下条件：1）远离城市、公路，人迹罕至，生长环境不易被破坏；2）区域内有或曾有野生密花豆分布，生态环境与密花豆的适生环境相似；3）生态环境良好，附近没有污染源；4）植被覆盖良好，以适合密花豆生长的森林类型为佳，物种较完善，具有一定数量的密花豆伴生植物。

3.2 回归保育实践

3.2.1 选地与整地 育苗地选择有遮阴设施的平整地块，排水良好，土层肥沃深厚。种植基地宜选择气候温暖、潮湿阴凉、海拔800～1700 m、坡度40°～80°的山地疏林或密林沟谷或灌丛。结合林地春季除草进行，依山势、坡度及林木生长的密度挖穴，穴深20 cm，将杂草和枯枝落叶埋入土中进行沤制以作基肥，有条件的可以施充分腐熟的有机肥。定植密度50～100株/亩（1亩≈666.67 m2）。

3.2.2 扦插育苗 每年11 月至次年2 月，选择1～2年生无病虫害、健壮的木质化枝条，剪成带2～3节、长约20 cm 的茎段，茎段基部要斜剪约45°，顶部剪平。将其下端4～5 cm 浸入150 mg·L-1ABT1 号生根粉溶液中，浸泡30 min 取出稍晾干，也可用已有虚根的茎进行扦插。茎段60°角斜插入直径10～15 cm的营养袋中，压紧，浇足水。营养土配质量比为本土∶有机肥（9∶1）。有机肥可选择腐熟的鸡粪肥、牛粪肥、绿肥、饼肥等。苗期合理浇水保湿，避免积水烂根。育苗前期遮阴度80%；苗高≥10 cm 后，遮阴度为50%；苗高≥20 cm，可除去遮阴物；苗高≥40 cm即可出圃移栽。

3.2.3 移栽 每年4—6 月，雨后移栽。移栽时苗高以40～50 cm 为宜，过高应修剪枝叶，并剪掉大部分叶片。移栽时，去除营养袋，每穴1 株，覆土压紧，浇足定根水。

3.2.4 伴生植物 根据鸡血藤的生长需人为创造其生长条件，在水、肥、光照达到要求的同时，还可搭配种植一些伴生植物，如两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.) DC.、罗伞树Ardisia quinquegonaBlume、鹅掌柴Schefflera heptaphylla(Linnaeus)Frodin、草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai、萝芙木Rauvolfia verticillata(Lour.) Baill.等灌木，日常管理上需要避免伴生植物长势过于强盛。

3.2.5 人工管理 补苗移栽30 d 后，发现死亡的及时补种。结合林地除草，在移栽后30 d，对小苗周围的杂草进行拔除。水分管理因林下植被丰富，空气湿度高、土壤保水性好，正常的降水已可满足鸡血藤的生长用水需求，无需人工浇水。中耕除草视杂草生长情况，进行拔除，每年除草2～3 次。结合除草，适当在苗基部进行培土。每年追肥1～2 次（施肥时期为3—4 月和8—10 月），可在雨后进行撒施复合肥，有条件的可以施充分腐熟的有机肥。

4 采收加工

4.1 采收期

鸡血藤药材一般于秋、冬两季采收[1]。通过分析广西桂林野生密花豆中黄烷醇、异黄酮、黄酮醇等21 种活性成分的动态积累规律可知，11 月上旬至12 月上旬采收的鸡血藤药材综合质量较好[25]，通过测定人工栽培于广西贺州和南宁的4～10 年密花豆中浸出物含量，得出4 年生以上枝条浸出物含量均达到《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2005 年版标准[14]。通过分析人工栽培于广东清远的密花豆中浸出物、总黄酮、原儿茶酸、儿茶素和表儿茶素的含量与生长年限的变化规律得出，活性成分含量均随着生长年限的增加呈递增，7—9 月采收的4～6 年生枝条浸出物含量均达到《中国药典》2010年版标准[26]。

4.2 加工

鸡血藤质地坚硬，一般趁鲜切成椭圆形、长矩圆形或不规则的斜片，再干燥，切片的厚度为0.3～1.0 cm。研究表明，鲜片中异黄酮和水浸出物含量高于蒸片高于浸片[27]。

5 展望

目前，我国密花豆野生资源逐渐减少，开展迁地保育研究与实践对资源保护和可持续利用具有重要意义。虽然已经开展的密花豆资源调查、引种驯化、种苗繁育、回归保育等方面的研究取得了丰硕成果，但诸多方面还有待深入研究。首先，种子贮藏特性研究，即种子贮藏对低温的耐性如何，对脱水的耐性如何，安全贮藏的临界含水量是多少，种子寿命有多长，如何改善贮藏条件、延长种子寿命，达到长期安全保存种质的目的？第二，组培快繁技术研究，包括对组培苗快速生产各个环节，外植体选择、灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗等的参数条件优化，建立组培苗质量标准，制定组培苗移栽技术规程等。第三，药效成分形成的机理研究，一方面通过基因测序，挖掘次生代谢途径的功能基因，一方面利用功能基因组学、蛋白质组学、代谢组学和系统生物学的方法研究生态环境因子（温度、光照、水分、土壤等）和人为因素（修剪、搭架、施肥等）对次生代谢产物合成积累的影响规律。