宠物源伪中间型葡萄球菌的耐药性调查研究

2021-01-02安妮

新农业 2021年23期

安妮

伪中间型葡萄球菌是由Devriese等人于2005年报道并命名的一种新的凝固酶阳性葡萄球菌。此菌是寄生于猫、狗皮肤和黏膜上最常见的一种凝固酶阳性菌之一，是一种机会致病菌，可引起皮肤和软组织等感染。

由于抗生素的广泛使用，葡萄球菌的耐药性逐渐增加。目前，国内对于金黄色葡萄球菌的耐药性调查研究已经较为广泛，但对于伪中间型葡萄球菌的研究还较为少见。本研究拟用琼脂稀释法对宠物源伪中间型葡萄球菌的药物敏感性进行了检测，为指导宠物临床合理使用抗菌药物提供依据，以减少耐药菌株的产生。

1.1……药物原液的制备

受试药物配制方法如表1。配制的药液用质控菌株进行测定，最小抑菌浓度质控范围内合格后分装，于-20℃或冷冻保存备用。

1.2……菌液制备

将已纯化的伪中间型葡萄球菌在哥倫比亚血琼脂平板上划线培养后，取单个菌落接种于2毫升的MH肉汤中，37℃恒温振荡培养4～8小时，用MH肉汤稀释菌液，使稀释菌液达到0.5麦比浊度，再按1∶100稀释菌液至含菌量约为1×106CFU/毫升，备用。同时制备质控菌葡萄球菌。

1.3……抗菌药稀释

将保存于-20℃的抗菌药物解冻，然后把抗菌药物原液按二倍稀释法在试管中稀释到需要的浓度，取2毫升药液放进做好标记的平皿中。

1.4……药物琼脂平板的制备

用25毫升灭菌移液管吸取18毫升冷却至50～60℃MH琼脂，加入已有2毫升抗菌药物的平皿中，混匀。同时每种药物设有两个空白琼脂平板。在超净工作台中风干冷却后，立即使用。

1.5……细菌接种

将稀释好的菌液加入到无菌的96孔板中，然后用多点接种仪蘸取适量菌液，按照药物浓度从低到高的顺序，接种到琼脂平板表面。将接种好菌液的琼脂平板放置在超净工作台内，直到菌液被琼脂完全吸干。再将平板放入培养箱，37℃恒温培养18～24小时。同样接种质控菌株作为整个试验过程的质控标准。

1.6……结果判定

当接种MH平板上的所有接种点的菌生长良好，而无接种细菌的平皿均无菌落生长，试验组完全不见细菌生长的最低药物浓度为该药物对细菌的最小抑菌浓度。以最小抑菌浓度规定的敏感、中介、耐药折点值范围判断结果。受试药物的敏感折点值判断标准见表2。

试验中144株伪中间型葡萄球菌对8种药物的敏感性见表3。

环丙沙星属于氟喹诺酮类抗生素，此类抗生素具有抗菌谱广、杀菌力强、体内分布广泛等优点，近年来在宠物临床上逐渐成为常用的药物。本研究中，环丙沙星的耐药率在50%以上，可能是由于临床上使用频率增加所致。

青霉素和氨苄西林同属青霉素类β-内酰胺抗生素，头孢唑啉、头孢曲松和头孢噻肟则属于头孢菌素类β-内酰胺抗生素。青霉素类β-内酰胺抗生素与头孢菌素类β-内酰胺抗生素对不同的PBPs具有不同的亲和力，这可能是本研究中伪中间型葡萄球菌对两类药物耐药率不同的原因之一。而且青霉素和氨苄西林在临床上使用也较头孢唑林、头孢曲松和头孢噻肟早，这可能也是前两者的耐药率较后两者高的原因之一。

阿米卡星、庆大霉素属于氨基糖苷类抗生素。本研究中，庆大霉素的耐药率达到24.3%，虽然此药已在临床广泛应用，但是其耐药性维持时间短，停药一段时间后易恢复敏感性，因此分析这是庆大霉素的耐药率依然能维持较低值的原因。阿米卡星较庆大霉素耐药率更低，只有4.9%，这可能是由于其临床应用较后者少。