致陆良县哺乳仔猪腹泻病原分析

董昱廷 王乔平

（曲靖市动物疫病预防控制中心，云南曲靖 655000）

1 材料与方法

1.1 材料

样品采集自陆良县5个规模化猪场，用棉拭子取腹泻仔猪稀粪样本147份，组织病料5份.

1.2 方法

1.2.1 大肠杆菌、沙门氏菌的分离鉴定

将棉拭子取得的稀粪样本分别涂布于麦康凯琼脂培养基上，37℃培养24 h，选取疑似大肠杆菌和沙门氏菌单个菌落，接种到新麦康凯琼脂培养基上37℃纯化培养24h。将分离菌株涂片，进行革兰氏染色，在显微镜油镜下观察细菌形态。

取纯培养菌落接种肉汤培养基，于37℃培养24h，用接种针蘸取菌液接种于自制生化管，接种项目为三糖铁（TSI）、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、MR试验、V-P试验，确定菌属。

伊红美蓝培养基培养实验，将分离菌株按常规细菌接种方法接种到伊红美兰培养基上，37℃恒温培养24-48h，在折射光下观察菌落，长出菌落呈紫黑色，带有金属光泽的为致病性大肠杆菌，菌落呈紫黑色，无金属光泽的为非致病性大肠杆菌。

1.2.2 PCV、PRV的鉴定

取1000μl DEPC水到1.5ml离心管，把采集的粪便样本（棉拭子）放入浸泡20min，4℃10000r离心10min，收集上清液4℃保存备用。

病毒DNA按照百泰克生物技术有限公司的全血基因DNA快速提取试剂盒的说明书操作步骤提取。

1.2.3 PEDV、TEGV的鉴定

取700μl上述病料上清液放入1.5ml离心管，加入800μl RNAiso Plus，充分混匀，静置10min，4℃10000r离心10min；吸取上清液600μl到新的离心管，加入氯仿300μl，混匀后静置10min，4℃10000r离心10min；吸取上清液400μl，加入400μl异丙醇，混匀，静置10min，4℃10000r离心10min；弃上清液后加入1ml乙醇（DEPC水配制），4℃10000r离心5min；弃液干燥，加入冷藏的DEPC水20μl，混匀后瞬时离心，立即进行反转录。

2 结果与分析

来源于陆良县的5个猪场均分离到大肠杆菌，152份样品中阳性病料数147份，阳性猪场率100%。大肠杆菌阳性率为100%（152/152）。

A、B、C、D四个猪场分离到沙门氏菌，152份样品中阳性样品数26份，阳性猪场率80%，沙门氏菌阳性率为17.11%（26/152），其中19份来源于A猪场，3份来源于B猪场，3份来源于C场，1份来源于D场。A、B、C、D猪场的阳性率分别为为57.58%（19/33）、15%（3/20）、11.11（3/27）、14.29%（1/7）。

A猪场和E猪场检测到199bp的PEDV特异条带。总152份样本，阳性样品数共8份，阳性猪场2个。PEDV的阳性率为5.26%（8/152），其中，有6份来源于A猪场，有2份来源于E猪场，A猪场、E猪场的PEDV阳性检出率分别为18.18%（6/33）、3.08%（2/65）。B、C、D三个猪场PEDV的阳性检出率为零。5个猪场均未检测到TGEV。

A猪场、C猪场、E猪场检测到705bp的PCV特有条带，总152份样本中阳性病料数69份，阳性猪场3个。PCV的阳性率为45.39%（69/152），其中，有20个样品来源于A猪场的，有2个样品来源于C猪场，有47个样品来源于E猪场的。A猪场、C猪场、E猪场PCV的阳性检出率分别为60.61%（20/33）、7.41%（2/27）、72.31%（47/65）。B和D两个猪场的PCV阳性检出率为零。5个猪场均未检测到PRV。

3 讨论

PEDV于1971年在英国发现，会引起猪的猪流行性腹泻（PED），我国自20世纪80年代以来陆续有该病的报道。PCV可分为PCV-1和PCV-2两个血清型。PCV-2对猪具有致病性，可引起猪断奶后系统衰弱综合征、皮炎和肾炎综合征、增生性坏死性间质性肾炎。沙门氏菌会引起猪的沙门氏菌病又称猪副伤寒，是一种世界性疾病，在美国依阿华沙门氏菌病所造成的损失仅次于猪痢疾。本次试验中，被检的5个猪场中，有2个猪场混合感染大肠杆菌和沙门氏菌，1个猪场混合感染大肠杆菌、PCV和PEDV，1个混合感染大肠杆菌、沙门氏菌和PCV；1个混合感染大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV。可见云南省陆良县仔猪腹泻病的病原混合感染现象十分严重，应做好加强生物安全措施；免疫接种，疫苗选择需慎重，接种时间需严格遵守；加强饲养管理，注意畜舍的湿度、温度、卫生情况；提高母猪饲料中维生素的营养水平，适当使用免疫增强剂；对疑似发病猪群做好隔离工作，对猪群紧急接种。