紫外分光光度法测定刺梨原汁中总黄酮含量的研究

耿宁　刘易伟　卿云光

摘要：建立一种操作簡单、结果可靠、测定成本较低的检测刺梨原汁中总黄酮含量的方法。通过实验验证，方法定量限为7.00mg/100g，在常见样品浓度和检出最高限的测试结果变异系数（CV值）分别为2.3%、1.9%，4个刺梨原汁样品中总黄酮含量分别为80.24、72.34、86.69、74.39mg/g，平均回收率为100.3%。

关键词：刺梨原汁;总黄酮;含量测定

刺梨是贵州的特色食品资源[1]，含有丰富的活性成分黄酮类物质，贵州省生产的刺梨鲜果，加工产品主要以刺梨原汁为主，然后再利用刺梨原汁加工成浓缩汁、饮料等多种营养食品和保健品[2]，刺梨原汁中含有丰富的活性成分总黄酮，是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生，改善心脑血管疾病的症状[3] [4]。建立一种适合刺梨原汁中总黄酮含量的测定方法，为检测机构和相关企业提供更适合的检测方法，提高检测效率，也对于规范刺梨产品加工企业质量管理、强化市场监管、促进贵州刺梨产业的健康发展具有重要意义和作用。

一、仪器、试剂及材料

1.仪器

TU-1901紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2.对照品

芦丁对照品（供UV法测定，含量为92.4%），中国食品药品检定研究院。

3.试剂

无水乙醇、甲醇，均为分析纯。

4.样品

“刺梨原汁”（贵州天泷集团投资开发有限公司，样品1）;“刺梨原汁”（贵州贵定敏子食品有限公司，样品2）;“刺梨原汁”（贵州山果王健康实业有限公司，样品3）;“刺梨汁”（贵州绿视野绿色开发有限公司，样品4）。

二、方法与结果

1.试样制备

称取1g（精确至0.01g）的试样至25ml容量瓶中，用乙醇定容，摇匀后，超声提取20min，室温静置30min，取上清液1mL于25mL比色管中，用甲醇定容后待测。

2.标准曲线的制备

以芦丁为对照品，精确称取芦丁标准品109.7mg（含量为92.4%）于100mL容量瓶内，用甲醇定容至刻度，得1.014mg/mL芦丁储备溶液。依次稀释至浓度为1.01μg/mL、2.03μg/mL、3.04μg/mL、4.06μg/mL、5.07μg/mL、6.08μg/mL芦丁对照品溶液，以甲醇溶液为零点，于360nm处测量吸光度。以芦丁对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校准曲线，线性方程为y=0.0299x-0.0003，R2=0.9999，表明芦丁含量在0～6.08μg/mL范围内具有良好的线性关系，经计算，该方法在0～380mg/100g范围内，样品中总黄酮浓度与吸光度呈良好的线性关系。

3. 检出限（LOD）和定量限（LOQ）实验

样品空白独立测试20次实验，计算结果为0.63 mg/100g，计算标准偏差（s）为2.278×10-16。

根据LOD=样品空白平均值+3s，即LOD=0.63+3×2.278×10-16，计算结果保留小数点后两位，LOD=0.63 mg/100g。

为增加数据可信度，且检测样品的结果范围为55～90 mg/100g，取LOQ值=10×LOD值，即LOQ=6.30 mg/100g，最终取值LOQ=7.00mg/100g。

4.精密度实验

精确称取1号样品12份，其中6份分别加入3mg芦丁对照品，按照“1.试样制备”方法处理并测定，结果如表1所示。结果显示本方法在常见样品浓度和检出最高限的测试结果变异系数（CV值）分别为2.3%、1.9%，均符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》中相关规定，表明方法精密度良好。

5. 样品检测及回收率实验

分别取样品1、2、3、4号样品做加标回收试验，然后按照“1.试样制备”处理，结果如表2所示，样品1、2、3、4中总黄酮含量分别为80.24、72.34、86.69、74.39mg/mL，且平均回收率为100.3%，表明方法准确性好。

三、结语

综上所述，本文以芦丁为对照品，通过紫外分光光度法测定总黄酮含量，操作简单、结果可靠、测定成本较低，在总黄酮含量为7～380mg/100g范围内，精密度良好，测试结果准确，适用于刺梨原汁中总黄酮的测定。测试样品1、2、3、4中总黄酮含量分别为80.24、72.34、86.69、74.39mg/100g，而相关报道中提到刺梨鲜果中总黄酮含量高达0.89%[4]，说明在加工过程中，刺梨鲜果中的大部分黄酮类化合物残留在刺梨果渣内，如何将总黄酮类化合物更有效地提取到刺梨原汁中，本方法可以为下一步研究奠定基础。

参考文献：

[1] 贵州省刺梨发展现状分析[J]. 刘易伟，杨舒清.  食品安全导刊（下旬刊），2020，（第2期）

[2].黔南州刺梨产业链分析[J]. 罗桃，王玉奇，陈文本.  中国林副特产，2020，（第5期）：106-107

[3] 刺梨中活性物质的提取与性能探讨[J].陈代秀，夏伟丽，胡思前，郭艳华，张玉敏.  化肥设计，2020，58（02）：13-17

[4] 刺梨黄酮的精制及其抗氧化活性比较[J].张汇慧，吴彩娥，范龚健，等. 南京林业大学学报（自然科学版），2015，39 （3）：101-105

[5] 刺梨总黄酮的含量测定及资源利用[J].杜薇，刘国文. 食品科学，2003（01）：112-114.

作者简介：耿宁 ，贵州省黔南州都匀人，食品安全检测员，工程硕士。