儿童需氧微生物培养瓶培养法等检验方法在新型隐球菌脑膜炎中的诊断价值

杨海刚，夏海雄

（贵阳市第二人民医院医学检验科，贵州 贵阳）

0 引言

新型隐球菌在自然界广泛分布，在鸽粪中大量存在，同时可存在于人体表、口腔及肠道中。可侵犯人或动物，一般以外源性感染为主，但也可致内源性感染，对人类而言，她通常是条件致病菌。新型隐球菌首先呼吸道侵入人体，由肺经血型播散时可侵犯所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，引起慢性脑炎，也可侵犯皮肤、骨、关节和心脏等部位，新型隐球菌病好发于免疫功能低下者，如艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤患者、器官移植及大剂量使用糖皮质激素患者。其引起的感染可出现在人体所有脏器组织中，以感染中枢神经系统引起新型隐球菌脑膜炎最为多见[1-3]。文献报道，现年因临床治疗过程中，因经验性治疗导致广谱抗生素滥用或乱用、以及因治疗需要增加的创操作，同时由于免疫制剂、激素的使用等众多因素的影响，致侵袭性真菌感染及新型隐球菌脑膜炎感染的出现率表现出不断增长的趋势，虽新型隐球菌脑膜炎较其它真菌感染性疾病较少见，同时由于其感染症状无特异性，易出现误诊和漏诊可能，感染后其死亡率一直处于高水平，如得不到及时规范治疗，其预后非常差[4]。为加强对新型隐球菌脑膜炎感染的了解，本文特究回顾性分析贵阳市第二人民医院2015 年11 月至2019 年10 月确14 例新型隐球菌脑膜炎患者临床资料，并重点分析相对应的检测方法，以提高临床医师对该疾病诊断的实验室检测技术认识。

1 对象与方法

1.1 一般资料

收集贵阳市第二人民医院2015 年11 月至2019 年10 月确诊的新型隐球菌脑膜炎14 例临床资料，记录其基础方面疾病、主要临床表现、易感因素、治疗效果及预后。

1.2 诊断标准

出院小结诊断为新型隐球菌脑膜炎；脑脊液培养检出新型隐球菌和(或)脑脊液离心浓缩墨汁负染色阳性为确诊病例。所有的脑脊液检测标本均为抗菌药物使用前或药物浓度低谷时采集。

1.3 统计学处理

用SPSS 23.0 软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示。

2 结果

2.1 基本资料

患者一般资料特点：14 例患者中，男9 例、女5 例，男性居多(9/14)；年龄阶段19-75 岁，平均(36.05±0.52) 岁；有明确禽鸟接触史(3/14)占发病总数的21.4%；其中仅1 例为艾滋病患者，占发病总数7.1%；其余患者13 例，占发病总数92.9%；合并基础疾病(13/14)例，占发病总数的92.9%，其中肝部疾病5 例，肾部疾病3 例，高血压2 例，消化道疾病1 例，慢性乙型肝炎1 例，艾滋病引发疾病1 例。

2.2 临床表现

患者均在诊断过程中出现头痛等相关症状(100%)，后呈现进行性加重；均伴有不同程度颅内压升高(100%)；其中发热患者12例(85.7%)，多主要为低热或者中度发热，高热不常见；由颅内压升高引起呕吐患者9 例64.2%)；腹泻、腹痛患者3 例(21.4%)；脑膜刺激征阳性10 例(71.4%)；严重造成复视、视物模糊2 例(14.3%)。

2.3 不同检测方法的比较

脑膜炎患者脑脊液标本检测结果显示：儿童需氧微生物培养瓶培养法阳性14 例，阳性率为100%；检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性13 例，阳性率为92.9%；墨汁负染色法阳性8 例， 阳性率为57.1%，比较3 种方法的方法学结果，显示培养法显著高于传统墨汁负染色法，儿童需氧微生物培养瓶培养法与快捷简便检测隐球菌荚膜多糖抗原有非常高的符合性，与临床的诊断符合率大100%，可广泛临床用于临床诊断。

3 讨论

新型隐球菌为呈圆形或卵圆形，革兰染色阳性，菌体外有宽厚的荚膜，新型隐球菌是引起人类感染一种条件致病性真菌。人体免疫功能低下，如长期应用广谱抗生素、恶性肿瘤及应用免疫抑制剂等时可机会性导致其感染[5-6]。本研究发现有13 例患者合并有基础疾病，有12 例患者出现最常见的发热症状；有10 例并发隐球菌脑膜炎，查体患者有不同程度出现头晕头痛，伴或不伴恶心呕吐、手脚抽搐、视物模糊等神经系统症状，同时脑膜刺激征均为阳性。研究表明该病的预后主要取决于是否存在基础疾病和有无合并症[7-8]。

墨汁负染色发作为基础和经典的方法，在过去相当长一段时间普遍用于实验室检测新型隐球菌的检测方法。目前，临床常用的方法还有培养法及隐球菌荚膜多糖抗原检测法，当然同时还有其他如影像学、分子技术和病理组织学检查等相互联合诊断方法[9]。本研究中利用墨汁负染色法、儿童需氧微生物培养瓶培养法、隐球菌荚膜多糖抗原对14 例临床诊断隐球菌性脑膜炎患者脑脊液检测，结果显示儿童需氧微生物培养瓶培养法、隐球菌荚膜多糖抗原检测法、墨汁负染色法的阳性率分别为阳性率为100%、92.9%、57.1%。培养法是隐球菌性脑膜炎诊断的金标准，本研究中采用的儿童需氧微生物培养瓶培养法阳性率为100% ，略高于比其他文献，主要的因素是我院脑脊液培养是按儿童需氧微生物培养瓶标本推荐量1～3mL 由临床医生直接床旁无菌操作接种于瓶内，这样可有效提高接种标本微生物含量，同时因该儿童需氧微生物培养瓶的营养物质成分比较丰富，这样既可有效减少送检过程及检验中环节导致标本污染可能，又可一定程度上提高阳性检出率，当然本次研究提供的数据有限，不具有广泛代表性，但这是今后值得关注和研究的方向。墨汁负染色法作为传统的可靠的诊断方法，阳性率（57.1%），与张江峰等的4 种检测方法在隐球菌性脑膜炎中的诊断价值中报道的阳性率48.3%比较我院阳性率较高[9]，该方法主要依赖标本的采集时机、采集量和检验人员的技能水平，检验人员经验不足均易发生漏诊的情况。目前，隐球菌荚膜多糖抗原检测法越来越多的得到临床认可，临床广泛应用该方法快速快速筛查隐球菌性脑膜炎，且阳性率与培养法相当，是一个非常好的快速诊断方法。

总之，培养法是辅助诊断隐球菌性脑膜炎的金标准，虽耗时比较长，一般得3-5 天，但其与临床诊断的符合率，特别是我院采用儿童需氧微生物培养瓶的诊断符合率达100%，临床为明确诊断和抗菌药物指导建议首选的方法；传统的墨汁染色方法对隐球菌性脑膜炎检测更直观且更可靠但阳性率低，是临床实验室最基本的检测方法，但受检验人员技术因素及其它因素影响较大，隐球菌荚膜多糖抗原检测方法具有操作简单，报告迅速等特点，便于临床的快速筛查，且与培养法的符合率高，可与培养法进行相互佐证，在临床诊断中具有非常高的诊断优势。因此，仔细观察患者临床表现，认真询问病史和居住环境，依据检验方法的联合共同使用，对新型隐球菌性脑膜炎的及时、快速、准确诊断具有十分重要的意义。