肾元颗粒对慢性肾脏病3~5期非透析患者血清成纤维细胞生长因子23、成纤维细胞生长因子受体4、Klotho蛋白的影响

程虹 邹新蓉 李颖霞 王小琴

[摘要] 目的 觀察肾元颗粒对慢性肾脏病（CKD）3～5期非透析患者的血清成纤维细胞生长因子23（FGF23）、成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）和Klotho蛋白含量的影响，以探讨肾元颗粒对CKD患者血管钙化的可能作用机制。 方法 选取湖北省中医院2018年6月—2019年6月收治的CKD患者60例，按随机数字表法将其分为对照组（28例）和治疗组（32例）。对照组采用尿毒清颗粒治疗，治疗组采用肾元颗粒治疗。连续治疗3个月，观察两组治疗前后生化指标[血清钙、磷、甲状旁腺激素（PTH）及估算的肾小球滤过率（eGFR）]水平及血清FGF23、FGFR4和Klotho蛋白含量。 结果 治疗前，两组钙、磷、PTH、eGFR比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;治疗后，治疗组血清中磷、PTH含量低于对照组，钙、eGFR高于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。治疗前，两组FGF23、FGFR4、Klotho蛋白含量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;治疗后治疗组血清FGF23、Klotho蛋白含量高于对照组，FGFR4含量低与对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 肾元颗粒能够抑制FGF23、FGFR4水平，提高Klotho蛋白含量，这可能是肾元颗粒治疗CKD患者血管钙化作用机制之一。

[关键词] 慢性肾脏病;肾元颗粒;成纤维细胞生长因子23;成纤维细胞生长因子受体4;Klotho蛋白

[中图分类号] R277.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）10（a）-0125-04

Effect of Shenyuan Granules on serum fibroblast growth factor 23， fibroblast growth factor receptor 4 and Klotho protein in non-dialysis patients with chronic kidney disease of stage 3-5

CHENG Hong1，2   ZOU Xinrong1，2   LI Yingxia3   WANG Xiaoqin1，2

1.Department of Nephrology， Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan   430061， China; 2.Institute of Nephrology， Hubei Institute of Traditional Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan   430074， China; 3.the First Clinical College， Hubei University of Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan   430061， China

[Abstract] Objective To observe the effect of Shenyuan Granules on the serum fibroblast growth factor 23 （FGF 23）， fibroblast growth factor receptor 4 （FGFR 4） and Klotho protein in non-dialysis patients with chronic kidney disease （CKD） of stage 3-5， so as to explore the possible mechanism of Shenyuan Granules on vascular calcification in CKD patients. Methods A total of 60 patients with CKD admitted to Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine from June 2018 to June 2019 were selected and they were divided into the control group （28 cases） and the treatment group （32 cases） by random number table method. The control group was treated with Niaoduqing Granules， while the treatment group was treated with Shenyuan Granules. After 3 months of continuous treatment， the levels of biochemical indexes （serum calcium， phosphorus， parathyroid hormone [PTH] and estimated glomerular filtration rate [GFR]）， and serum FGF23， FGFR4 and Klotho protein content were observed before and after treatment. Results Before treatment， there were no statistically significant differences in calcium， phosphorus， PTH and eGFR between the two groups （P > 0.05）. After treatment， serum phosphorus and PTH in the treatment group were lower than those inthe control group， while calcium and eGFR were higher than that in the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Before treatment， there was no significant difference in FGF23， FGFR4， and Klotho protein content between the two groups （P > 0.05）. After treatment， serum FGF23 and Klotho protein content in the treatment group were higher than those in the control group， and FGFR4 content was lower than that in the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Conclusion Shenyuan Granules can inhibit FGF23 and FGFR4 levels and increase Klotho protein content， which may be one of the mechanisms of Shenyuan Granules in the treatment of vascular calcification in patients with CKD.

[Key words] Chronic kidney disease; Shenyuan Granules; Fibroblast growth factor 23; Fibroblast growth factor receptor 4; Klotho protein

慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）是指各种原因引起的肾脏的结构或功能异常≥3个月，包括肾脏的形态或病理异常、与肾脏相关的血尿成分异常、肾脏的影像学异常;或不明原因估算的肾小球滤过率（eGFR）下降[<60 mL/（min·1.73m2）]大于或等于3个月。CKD进展会导致终末期肾衰竭、诱发心血管疾病，对患者生命带来威胁[1]，全球約10%的人口受到CKD的影响[2]。肥胖、糖尿病、高血压和血脂异常等均是CKD的主要危险因素[3]，血管钙化是导致CKD合并心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）的重要因素。目前对CKD合并血管钙化的防治方案仍存在诸多不足，开发新的治疗干预措施将会减少全世界面临CKD的风险[4]。中医药在延缓CKD向终末期肾脏病发展，治疗并发症，改善患者生活质量方面起着重要作用[5]。

尿毒清颗粒是治疗CKD的常用中成药，在CKD的临床治疗中发挥了重要作用[6]。肾元颗粒是湖北省中医院（以下简称“我院”）肾病科在大量临床治疗中积累的经验方，可改善患者肾功能、提高患者生活质量，与中药辨证口服方比较，具有更明显的效果[7]。本研究拟观察肾元颗粒与尿毒清颗粒对CKD患者血清成纤维细胞生长因子23（FGF23）、成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）和Klotho蛋白含量的影响，以探讨肾元颗粒对CKD患者血管钙化的可能作用机制，以期为后续CKD血管钙化的中医药治疗提供一定的临床依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月—2019年6月我院收治的CKD患者60例，其中男34例，女26例;平均年龄（52.50±7.16）岁。按随机数字表法将其分为对照组（28例）和治疗组（32例），两组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性，见表1。本研究经我院医学伦理委员会批准（批件号：2011[363]），所有患者及家属均签署知情同意书。

纳入标准[8]：①年龄18～74岁;②eGFR<60 mL/（min·1.73m2）。排除标准：①有严重并发症者，如严重的心功能不全、肝硬化等。②由系统性疾病、自身免疫性疾病引起CKD者。③近2年内有肿瘤的化学治疗者。④近6个月内使用过免疫抑制剂者。⑤感染，孕期或哺乳期的女性，精神病患者及拒绝本研究者。

1.2 方法

对照组温水冲服尿毒清颗粒[康臣药业（内蒙古）有限责任公司，国药准字Z20073256，批号：160224]，5 g/次，2次/d;治疗组温水冲服肾元颗粒（我院院内制剂，鄂药制字Z20070209，批号：20190306），5 g/次，2次/d，两组均连续服用3个月。治疗前后抽取患者静脉血分离血清，进行相关生化指标检测。

1.3 观察指标

1.3.1 血清钙、磷、甲状旁腺激素（PTH）及eGFR检测  抽取空腹静脉血5 mL，室温静置30 min，3000 r/min离心5 min，离心半径8 cm，取上层血清于-80℃保存备用。采用全自动生化检测仪（贝克库尔曼特，型号：AU5800）检测血清中钙、磷（宁波美康生物科技有限公司，批号：190701101）、PTH（西门子医疗，批号：023）含量及eGFR。

1.3.2 FGF23、FGFR4及Klotho蛋白检测  采用酶联免疫吸附法（ELISA）对血清FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量进行测定，具体操作严格按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料用百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后血清钙、磷、PTH、eGFR比较

治疗前两组血清钙、磷、PTH、eGFR比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;治疗后，治疗组钙、eGFR高于对照组，血清磷、PTH含量低于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。

2.2 两组治疗前后血清FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量比较

治疗前两组FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;治疗后，治疗组FGF23、Klotho蛋白含量高于对照组，FGFR4低于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。

3 讨论

骨矿物质代谢紊乱是CKD患者常见并发症，其导致的血管钙化严重影响患者生活质量，且与增加患者死亡率相关，降低血磷，维持血钙，控制PTH在正常范围内是治疗CKD的目标[9-10]。临床数据[11]显示，CKD患者早期便出现了钙磷代谢紊乱现象，高磷摄入可进一步加重肾脏损伤[12]。本研究观察了肾元颗粒与尿毒清颗粒治疗CKD患者后对血清中钙、磷、PTH和eGFR水平的影响，结果显示治疗组钙、eGFR高于对照组，血清磷、PTH含量低于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。

通过调节FGF23和维生素D对肾脏、骨骼和消化系统的影响，可维持血清中钙磷水平保持相对恒定[13]。FGF23作为一种新的CKD生物标志物，是FGF家族的成员之一，可调节磷和维生素D代谢，在CKD早期水平升高，是加速CKD进展和加重心血管并发症的潜在致病因子[14-16]。FGF23虽属于FGF家族，但其与FGF19、21及其他成员存在两个不同之处：①他们并非生长因子，而是调节各种代谢过程的内分泌因子;②他们的生理受体不是FGF受体（FGFRs），而是FGFRs和Klotho蛋白的二元复合物[15]。FGF23通过结合FGFRs与Klotho蛋白，调节钠依赖性磷酸共转运蛋白的表达、维生素D的活性和PTH的分泌[17]。FGF23通过FGFR4直接靶向目的细胞，对FGF23/FGFR4信号的干预可能具有缓解CKD的作用[18]。Singh等[19]研究结果亦证实了FGFR4阻断剂具有治疗CKD的效果。Grabner等[20]研究证实FGF23通过活化FGFR4及下游信号，介导了心血管钙化。Maren等[21]发现FGF23、FGFR4过度表达是CKD患者心血管事件的危险因素。Klotho蛋白是一种与衰老有关的蛋白质，是近年来研究的热点，其作为协同受体，与FGFR结合行成复合受体通过磷酸化等反应调节PTH的释放从而将钙磷控制在合适水平，其在骨矿物代谢中起着关键性作用[22]。补充Klotho蛋白或上调Klotho蛋白表达，可抑制肾间质纤维化进展，抑制PTH分泌[23]。本研究结果显示，肾元颗粒与尿毒清颗粒治疗后，CKD患者血清FGF23和FGFR4水平低于治疗前，而Klotho蛋白含量高与治疗前，提示肾元颗粒对慢性肾脏病患者血管钙化有一定调节作用，其机制可能与FGF23/FGFR4通路有关。

《素问·宣明五气》云：“肾藏精，精生髓，髓成骨。”肾所藏之精，所主之液皆可化生骨髓。若肾精充实，则髓化有源，骨得其养而坚固有力;若肾精亏虚，则骨失其养，发为“骨痿”“骨痹”。既往的动物实验显示肾元颗粒能抑制肾性骨病模型大鼠骨组织FGF23的表达[24]，能改善钙磷代谢，减轻CKD伴发的血管钙化损伤。肾元颗粒组方中淫羊藿能补肾壮阳、益精健骨，已有研究表明淫羊藿总黄酮（主要成分为淫羊藿苷）可能通过增加成骨细胞骨保护素的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟，从而抑制骨吸收[25]，还可以提高肾脏BMP-7蛋白的表达，并作用于骨组织，发挥其诱导成骨作用。黄芪能补益肺脾，能减轻小管间质的损伤，抑制肾纤维化。大黄功能清湿热化瘀祛浊排毒，抑制肾脏高代谢，抑制系膜细胞增生，改善脂质代谢，从多方面延缓慢性肾衰竭、改善骨矿物质代谢紊乱。

综上所述，肾元颗粒可升高CKD患者血清钙、Klotho蛋白含量及eGFR水平，降低血清磷、PTH、FGF23、FGFR4含量，其对CKD患者Klotho蛋白、FGF23、FGFR4的调节作用，可能是肾元颗粒防治CKD患者血管钙化的作用机制之一。

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（收稿日期：2020-07-08）