化学发光微粒子免疫测定法、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验及ELISA三种梅毒血清型诊断方法的比较

王征，区晓雯，夏勇

(广州医科大学附属第三医院检验科,广东广州 510150)

梅毒(Syphilis)是具有高传染性的性传播疾病，其病原体是属于密螺旋体属的梅毒螺旋体(Treponema pallidum，TP)。在我国近年来发病率持续上升，目前仍然是一个全球性的健康问题[1]。梅毒诊断测试的准确性对于控制疫情的流行至关重要。主要特异性抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)，梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)以及化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)。由于CMIA特异性好，敏感性高，自动化方便操作，重复性好等往往作为手术、输血前的筛查试验，由于其高灵敏度，另一方面也容易造成假阳性[2]。因此需要实验室自定检测抗T.pallidum的S/CO截断值。提高CMIA检测的灵敏度与特异性。

目前已报导的影响梅毒血清学检测结果的因素包括自身抗体、恶性肿瘤、年龄、妊娠、感染性疾病、其他螺旋体感染等。本研究通过分析梅毒不相符样本的临床特点结合ROC曲线，探讨其在我院诊断梅毒的最佳截断值及影响因素。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集本院2017年7月至2018年2月的355份美国雅培公司I2000化学发光免疫分析仪检测抗T.pallidum的血清标本，包括阳性标本(S/CO>=1)237例，阴性标本118(S/CO<1)例。年龄在10～97岁，年龄中位数为48岁，男女比例为1∶2，所有355份标本血清分装两份于-80℃并对其进行ELISA以及TPPA检测。检测所有TPPA阴性标本的抗核抗体和类风湿IgG抗体。

1.2 研究材料

1.2.1仪器设备 雅培I2000 SR化学发光免疫分析仪，离心机，酶标仪。

1.2.2试剂与耗材 美国雅培公司化学发光法检测试剂ARCHITECTR Syphilis TP，Anti-TP梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)购自珠海丽珠试剂股份有限公司，TPPA试剂购自日本富士株式会社，抗核抗体检测试剂盒(酶联免疫法)、类风湿因子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)均购自AESKU公司。

1.3 统计学方法

使用SPSS 22.0 统计软件，用抗T.pallidum S/CO值做受试者工作特征(ROC)曲线，计算曲线下面积(AUC)。当AUC最大时，为抗T.pallidum诊断价值最大时的S/CO临界值。同时，对TPPA初筛阴性标本进行抗核抗体(抗ANA)、类风湿因子抗体(抗RF-IgG)检测，对各组中的阳性率进行χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CMIA，ELISA及TPPA三种检测方法的血清学结果

将收集到的已有化学发光结果的355个样本进行TPPA，ELISA检测。在237例CMIA阳性标本中，TPPA阳性有199例，ELISA阳性有214例。118阴性标本中，TPPA阴性有118例，与CMIA结果相符，ELISA阴性有115例，见图1。

TPPA+ELISA+CMIA+CMIA-

2.2 CMIA,ELISA和TPPA检测抗T.pallidum的结果分布与符合率

将CMIA结果按不同S/CO区间分组，并计算阳性符合率。38例CMIA初筛阳性、经TPPA确认为阴性的标本中，1.0≤S/CO<2.0有23例，占60.5%；2.0≤S/CO<3.0有7例，占18.84%；3.0≤S/CO<4.0有7例，占18.84%；4.0≤S/CO<5.0有1例，占2.6%；结果表明S/CO值越接近临界值(S/CO=1.00)，TPPA试验阴性的比例越大，见表1。

表1 不同S/CO值段的TPPA与ELISA结果比较

2.3 CMIA+TPPA-阴性标本年龄、性别分布

在38例CMIA+TPPA-标本中，男性13例，女性25例，男女比例为1:1.92。年龄小于20岁、21～40岁、41～60岁以及大于60岁的人群各占2.6%，47.4%，7.89%及42.11%，见图2。

181614121086420CMIA假阳性例数女男60岁以上41～6020岁以下年龄21～40

2.4 自身抗体对CMIA结果的影响分析

CMIA+TPPA-组的抗ANA抗体阳性率为21.1%；CMIA-TPPA-组的抗ANA抗体阳性率为8.5%，两者比较有统计学差异(P=0.035，即P<0.05)；CMIA+TPPA-组RF-IgG的阳性率为13.2%，CMIA-TPPA-组RF-IgG阳性率为2.5%，两者比较有统计学差异(P=0.046，即P<0.05)，见表2。CMIA+TPPA-组男性自身抗体阳性率28.6%，女性自身抗体阳性率21.4%。CMIA+TPPA+组中男性自身抗体阳性率12.2%，女性自身抗体阳性率10.4%。

表2 CMIA+TPPA-组与CMIA-TPPA-组样本的抗ANA和RF-IgG检测情况

2.5 ROC曲线分析

使用SPSS 22.0软件绘制ROC曲线，得出不同临界值下对应的性能指标，结果见表3和图3。当临界值为2.56时，CMIA检测的特异性和敏感性同时为最大值，分别为94.2%和96.0%，此时ROC 曲线下的面积最大，为0.992，诊断性能最高。

表3 CMIA检测抗T.pallidum的灵敏度和特异性分布情况

ROC曲线1.00.80.60.40.20.0敏感性0.00.20.40.60.81.01-特异性

2.6 CMIA+TPPA-临床特征分析

38例假阳性标本临床特点以不孕不育为主(3例不育，10例不孕)，其次为肿瘤，见图4。

14121086420不孕不育肿瘤发热心血管疾病自身免疫性糖尿病妊娠其他

3 讨论

化学发光是用于临床诊断、术前检查非常普遍的检测梅毒的方法,本次实验对CMIA 、ELISA和TPPA三种方法检测血清中梅毒特异性抗体的结果进行比较。在355例血清标本中，CMIA与TPPA的总符合率为89.3%，较低于ELISA与TPPA的总符合率(94.4%)。在检测的118份化学发光阴性标本中，TPPA均为阴性，CMIA敏感性为100%，而ELISA存在假阳性。由于CMIA的敏感性极高所以产生较高的假阳性率。在实际应用中往往用其来进行筛查，并用另一种血清学检测方法来复检确证。TPPA是确证实验的一种，其灵敏度较差，对早期梅毒存在漏检风险。一些其他检测梅毒的方法，如Western blot蛋白印迹方法虽然有更高的灵敏度和特异性，但有报道将结果不一致的标本用Western blot方法复查，其依然有30%样本检测结果呈现为单一条带的“不确定”[3]，其中有部分可能是与莱姆病及钩端螺旋体抗体的交叉阳性[4]。一些新的分子检测技术如PCR，因为缺乏特异性基因作为检测T.pallidum的金标准，以及受患者身体状况影响比较大，包括免疫状态，抗生素服用情况等[5]，只能做为血清学测试的补充。所以遇到结果不一样的情况，要密切随访和定期复查。

从患者年龄来看CMIA假阳性主要集中在大于60岁的老年人(男女各占一半)以及处于育龄期的女性(20-40岁)，与以往报道一致。本次结果中育龄期梅毒假阳性女性患者临床诊断以“不孕”为主，文献鲜有报道，本院就医人群主要以孕产妇及生殖助孕为主，而本次结果未有突出出以往报道的妊娠因素相关的梅毒假阳性，思考其原因，不孕群体的梅毒假阳性是否可能由钩端螺旋体及莱姆病的交叉抗原导致？有报道钩端螺旋体可导致牲畜的不孕[6]，在人类研究中此方面鲜有报道，我们将在以后的研究中继续探讨不孕人群梅毒假阳性的原因。在老年人群中，其CMIA结果值较其他年龄段假阳性结果值偏高，其自身抗体阳性比例是所有年龄段里最高的(ANA抗体阳性或RF-IgG阳性率为50%)，与以往报道一致，这与老年人自身免疫抗体升高有关，而不孕不育样本的自身抗体阳性比例为7.7%，并未显示明显升高。根据患者的临床诊断及实验室结果可以看出，不孕及有自身免疫抗体对假阳性影响最大，其它因素包括肿瘤、外伤、感染、糖尿病及甲状腺疾病，这与报道大部分一致[7]。

根据本实验室的数据结果，绘制ROC曲线，得到最佳cut-off值为2.56。综上，当患者为育龄期女性或是大于60岁的老人并且CMIA结果比较低时应引起检验人员及临床医生的重视，与患者及时沟通病史、症状，并加做TPPA或western blot辅助诊断，对仍无法确认结果的患者定期复查，随访以便进行及时有效的治疗。