草甸还阳参和叶状柄垂头菊挥发性化学成分及其抑菌活性

王 泽 ,姚 政,王 怡,王 敏 ,林鹏程

(1.青海民族大学 药学院，青海 西宁 810007；2.青藏高原植物化学重点实验室，青海 西宁 810007)

近几年研究植物挥发性成分发现，其有被开发为一种新型药物用于临床治疗的价值[1-3].菊科植物挥发性成分的抑菌活性极具潜力[4-6].草甸还阳参已被用于中医治疗[7].目前，还未见到有关草甸还阳参和叶状柄垂头菊超临界流体萃取物研究的报道.为进一步开发草甸还阳参和叶状柄垂头菊超临界流体萃取物的药用价值，本文对这2种植物超临界流体萃取物的化学成分和抑菌活性进行了研究.

1 材料与方法

1.1 仪器

HP-Agilent GC/MS (7890/ MSD5975C)联用;AppliedSeparations(美国分离技术公司)7071(SFE-2)型超临界CO2萃取仪,配备主机、Series1500夹带剂泵、萃取釜、空压机和SDC-6冷循环水系统.

1.2 材料

草甸还阳参和叶状柄垂头菊于2018年6月采自青海省黄南州麦秀林场，海拔分别为3 175 m和3 147 m，并由青海民族大学药学院林鹏程教授鉴定为草甸还阳参(Crepispratensis)和叶状柄垂头菊(Cremanthodiumphyllodineum).

2 方法与结果

2.1 SFE-CO2条件

萃取压力为25 MPa,萃取温度为50 ℃,静态萃取,萃取时间2 h.

2.2 GC-MS条件

HP-5 MS毛细管柱 (30 m×0.25 mm，膜厚度0.25 μm)，气相色谱的分析柱压为25 MPa,柱温50 ℃,分析时间120 min.用程序升温方法升温5 min将柱温箱温度由室温升至50 ℃，之后以3 ℃/min的速度将温度升至150 ℃并保持温度不变1 min.最后再以2 ℃/min的升温速度升温至300 ℃.注射器和检测器温度分别为250 ℃和200 ℃.每次检测注射10 μL超临界流体萃取物，其分流比为1︰10[8-11].

2.3 两种菊科植物的超临界流体萃取物化学成分分析

两种植物全草阴干粉碎,过60目筛,准确称量500 g后装进1 000 mL反应釜,按“2.1”的萃取条件进行萃取，得超临界流体萃取物的量分别为:草甸还阳参0.52 g(淡黄色);叶状柄垂头菊0.35 g(淡黄色).

两种菊科植物超临界CO2提取物用色谱纯甲醇充分溶解过滤后,在上述实验条件下对2种植物超临界流体萃取物进行分离[12].通过质谱分析和计算机标准谱库检索,从草甸还阳参中鉴定出28种化学成分，叶状柄垂头菊中鉴定出45种化学成分,并通过保留指数法给出各成分的相对百分含量.

2.4 两种菊科植物超临界流体萃取物的抑菌活性

用滤纸琼脂扩散法，测定了2种菊科植物超临界流体萃取物抑菌圈的直径，并且对于每个超临界流体萃取物抑菌圈的直径平行测定3次，抑菌圈直径数值采用平行测定3次数值的平均值(mean)±标准差(SD)表示.超临界流体萃取物浓度分别为A (3 mg/mL)、B (1.5 mg/mL)、C (0.75 mg/mL).直径的测量单位为毫米[13].

甲型副伤寒沙门氏菌 [CMCC(B) 50093],宋氏志贺氏菌[CMCC(B) 51592],金黄色葡萄球菌 [CMCC(B) 26003],短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202],藤黄微球菌 [CMCC(B) 28001],乙型副伤寒沙门氏菌[CMCC(B) 50094],痢疾志贺氏菌 [CMCC(B) 51105],铜绿假单胞菌 [CMCC(B) 10104],大肠埃希菌 [CMCC(B) 44102],产气肠杆菌 [CMCC(B) 12021],蜡状芽孢杆菌 [CMCC(B) 63301],白色念珠菌 [CMCC(F) 98001],黑曲霉 [CMCC(F) 98003],酿酒酵母菌 [CMCC(F) 23854]，14种菌种为本次2种菊科植物超临界流体萃取物抑菌活性试验供试菌种.

草甸还阳参和叶状柄垂头菊超临界流体萃取物的总离子流图见图1、图2.草甸还阳参和叶状柄垂头菊超临界流体萃取物的化学成分和抗菌活性见表1、表2

注：峰编号和表1中的编号对应，“*”峰为未鉴定出的化学成分

注：峰编号和表1中的编号对应，“*”峰为未鉴定出的化学成分

表1 草甸还阳参和叶状柄垂头菊超临界流体萃取物的化学成分分析

表2 2种菊科植物的超临界流体萃取物对供试菌株的抑菌作用

3 结论

结果表明，在草甸还阳参提取物中,含量最高的是Linoleic(21.2%),其次是Perhydrofarnesyl aceton(15.2%).在叶柄状垂头菊提取物中,含量最高的是Heneicosane(4.87%),其次是Phytol(4.34%).草甸还阳参提取物对副伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、蜡样芽孢杆菌有抑制作用，对铜绿假单胞菌的抗性最强.叶状柄垂头菊提取物对羊水杆菌、金黄色葡萄球菌、黄体微球菌、铜绿假单胞菌、蜡样芽孢杆菌和黑曲霉均有抑制作用，且这5种供试菌种的抑菌活性强弱相近.当提取物样品浓度为3 mg/mL时，对金黄色葡萄球菌的抗性最强.因为这2种植物的超临界流体萃取物具有良好的抑菌活性，因此可应用于抑菌洗手液、香皂和洗发水等产品的研发中.