不同枸杞叶茶中黄酮、多酚及氨基酸组成分析

闫亚美，米佳，禄璐，罗青，李晓莺，何军，安巍，秦垦，曹有龙

（宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所，宁夏银川750004）

枸杞的传统药用部位是果实，具有悠久的开发利 用历史。除枸杞果实以外，枸杞叶俗称天精草，是一味重要的中药材，具有补虚益精、清热止渴、养肝明目之功效。近年来，大量研究表明，枸杞叶富含多糖[1]、多酚和黄酮类[2]、亚精胺和萜类[3]等多种功效成分[4-5]，并具有抗氧化[3]、预防肥胖[6]、抗炎[7]、提高免疫力[8]、预防糖尿病[9]等多种功效作用，多被用于加工制成茶叶消费[6]，也可作为新鲜蔬菜食用，市场应用前景广阔。

Zhao等研究表明不同产地的枸杞叶酚类物质组成差异较大[10]。但不同品种、栽培条件和加工厂家/方式下枸杞叶中的成分差异性探讨较少。另外，氨基酸也是枸杞叶茶中的重要的化学成分指标。本文通过初步分析不同生产厂家、品种的枸杞叶及枸杞叶/芽茶样本的总黄酮和总多酚的含量、氨基酸含量及组成情况，旨在为枸杞叶的开发利用提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

芦丁（纯度≥98%）：上海源叶生物科技有限公司；甲醇、无水乙醇：徐州天鸿化工有限公司；亚硝酸钠：上海广诺化学科技有限公司；氢氧化钠、硝酸铝：天津市大茂化学试剂厂；三氯化铝：成都市科龙化工试剂厂。其它试剂均为分析纯。

不同的枸杞叶及其叶/芽茶样本信息如表1所示。枸杞叶茶指将枸杞叶/芽按照绿茶加工工艺制成的样品，枸杞叶/芽指采摘后经冷冻干燥制成的样品。

表1 枸杞叶及叶茶样品信息表Table 1 The information of leaves tea and leaves samples from

1.2 仪器与设备

Hitachi L-8900氨基酸分析仪、BS 224 S分析天平：德国赛多利斯公司；TU-1810紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；JP-1020全数字超声波发生器：武汉嘉鹏电子有限公司；WHY-2往复式水浴恒温振荡器：常州市万丰仪器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 茶叶及枸杞叶/芽样品提取

取各样本200 g左右粉碎，准确称取样品1.00 g（3个平行），分别置于250 mL平底烧瓶中，加入75%乙醇溶液50 mL，于70℃水浴中回流提取2 h，冷却后过滤，弃滤渣，留滤液，再用75%乙醇定容至50 mL容量瓶中，4℃保存待用。

1.3.2 叶茶及枸杞叶/芽中黄酮测定

将1.3.1中提取的样品，吸取0.5 mL，以芦丁作为标准品计量，参考闫亚美等的方法进行总黄酮含量的测定[11]。

1.3.3 叶茶及枸杞叶/芽中多酚测定

将1.3.1中提取的样品，吸取1 mL以没食子酸作为标准品计量，参考闫亚美等的方法进行总多酚含量的测定[11]。

1.3.4 氨基酸的测定

参考周志阳等[12]的氨基酸测定方法进行测定。

1.3.5 数据处理及分析

数据统计分析使用SPSS 21.0软件进行方差分析（analysis of variance，ANOVA），采用 Ducan法对数据进行单因素方差分析，采用因子分析进行主成分分析（principal component analysis，PCA），所有试验均重复 3次。

2 结果及分析

2.1 不同来源的枸杞叶及其叶/芽茶黄酮含量分析

枸杞叶茶及枸杞叶中黄酮含量分析见图1。

图1 枸杞叶茶及枸杞叶中黄酮含量Fig.1 The contents of flavonoids in leaves tea and leaves from wolfberry

由图1可知，9个样品中，各类叶茶及枸杞叶中黄酮含量大小依次为 6、5、4、9、3、7、8、2、1 号。其中，黑果枸杞芽茶的黄酮含量显著高于其它枸杞品种来源的芽/叶。

3个枸杞芽茶样中，黄酮含量分别为1.18%、8.23%和6.49%，各样品之间黄酮含量存在显著差异。其中，黑果枸杞芽茶显著高于其它两个公司产的枸杞芽茶。3个不同叶茶含量分别为2.13%、4.91%和6.88%，三者存在显著差异，但含量介于2%～7%之间，幅度小于芽茶中黄酮含量的幅度（1%～8%），但同一品种的枸杞叶在不同产区种植并加工后的黄酮含量存在差异。3个枸杞叶，包括嫩枝扦插苗的黄酮含量分别为7.59%、4.79%和3.15%。其中，黑果枸杞叶中的黄酮显著低于宁杞1号和7号的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

2.2 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶多酚含量分析

枸杞叶茶及枸杞叶中多酚含量分析见图2。

图2 枸杞叶茶及枸杞叶中多酚含量Fig.2 The contents of polyphenols in leaves tea and leaves from wolfberry

由图2可知，9个样品中，各类叶茶及枸杞叶中多酚含量大小依次为 6、5、2、4、1、7、3、8、9 号。黑果枸杞芽茶的多酚含量显著高于其它枸杞品种来源的芽/叶或枸杞叶。多酚是茶叶中的主要功效成分，具有多种保健作用[13-14]，由此可见，黑果枸杞芽茶具有较高的利用价值。

3个枸杞芽茶样，多酚含量分别为10.37%、14.73%和3.57%，各样品之间多酚含量存在显著差异。其中，黑果枸杞芽茶显著高于其它3个公司产的枸杞芽茶（1号～4号、9号样本）。3个不同叶茶含量分别为12.61%、8.47%和12.52%，三者存在显著差异，但含量介于8.47%～12.61%之间，幅度小于芽茶中多酚含量的幅度（3%～14%）。3个枸杞叶，包括嫩枝扦插苗的多酚含量分别为13.5%、9.66%和8.16%。其中，黑果枸杞叶中的黄酮显著低于宁杞1号和7号的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

9个样品中，各样品黄酮和多酚除个别样品外，黄酮含量和多酚含量样本间均存在显著差异。该结果揭示，生产工艺、品种、栽培条件等可能均影响枸杞叶茶的黄酮和多酚的含量；且除黑果枸杞芽茶外，宁杞1号和宁杞7号的嫩枝扦插苗也可作为良好的富含酚类物质的枸杞叶茶加工原料。除9号样品多酚含量小于黄酮含量外，其它样品的多酚含量均高于黄酮含量。该结果表明，多数枸杞叶茶除黄酮外，还富含有其它类物质的酚类化合物，其组成和结构及其样品之间的差异性有待于进一步研究探讨。

2.3 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量分析

2.3.1 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量的分析

不同来源枸杞叶及其叶/芽茶的氨基酸含量如表2所示。

表2 不同枸杞叶及叶茶中氨基酸含量（n=3）Table 2 The contents of amino acids in leaves and leaves tea from wolfberry（n=3） %

不同枸杞叶及其叶/芽茶中均检测到17种氨基酸，其中，包括7种必需氨基酸，苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸，以及10种非必需氨基酸，天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸。9种样品中均没有检测到色氨酸。其中，含量最高的必需氨基酸为亮氨酸，含量最高的非必需氨基酸为天冬氨酸和谷氨酸，这与周志阳等[12]的研究结果较为一致。除茶氨酸外，谷氨酸和天冬氨酸是重要的鲜味氨基酸[15-16]，枸杞芽/叶富含谷氨酸和天冬氨酸赋予了其作为茶叶的良好原料的滋味源。

2.3.2 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量的主成分分析

对不同枸杞叶及其叶/芽茶的17种氨基酸进行主成分分析，可以观察到组间样本的总体分布趋势，得分图和载荷图如图3和图4所示。

图3 不同来源枸杞叶及叶茶氨基酸含量的载荷图Fig.3 Loading diagram of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

图4 不同来源枸杞叶及叶茶氨基酸含量的得分图Fig.4 Score chart of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

第一主成分对总变异的贡献率为76.5%，第二主成分对总变异的贡献率为11.5%，这两个主成分包含了样本88.0%的信息，能够充分覆盖样本的信息。从图3可以看出，除天冬氨酸以外，其他16种氨基酸均分布在载荷图的左侧，说明这16种氨基酸的相关性较大。图 4 中，2、3、5、6、9 号样品分布在得分图的左侧，1、4、7、8 号样品分布在得分图的右侧。表明，2、3、5、6、9号样品的的氨基酸含量高于1、4、7、8号样品。表明，样本中的氨基酸含量差异较大。比较而言，2和3号来自同一家种植生产厂家，表明枸杞品种因素对氨基酸的含量具有影响；较黑果枸杞芽而言，成龄黑果枸杞树叶氨基酸含量较低，不利于茶叶加工；此外，宁杞1号氨基酸含量较优于宁杞7号，可见，品种差异对枸杞叶茶加工中的氨基酸指标贡献较大，进而影响其茶的滋味品质。

3 结论

黑果枸杞芽茶多酚和黄酮含量显著高于其它各样本，并富含较高的氨基酸。除个别样品外，黄酮和多酚黄酮含量和多酚含量样本间均存在显著差异，且多酚含量均高于黄酮含量。不同品种和栽培条件下的枸杞叶及叶茶的黄酮、多酚、氨基酸含量与组成差异较大。此外，除黑果枸杞芽茶外，宁杞1号和宁杞7号的嫩枝扦插苗也可作为良好的富含酚类物质的资源加以开发利用。