健妇胶囊中阿魏酸含量测定方法的改进

朱玉芳 刘潇潇

广东省药品检验所，广东 广州 510663

健妇胶囊由海狗肾、鹿胎、山茱萸、酒当归、炒白术等11 味药组成，具有补血养血，活血化瘀，调经止带的功效，临床常用于治疗赤白带下、血崩血漏、宫冷不孕、月经不调[1]。酒当归活血通经，为本方中主要药味之一，主含阿魏酸、挥发油、维生素B12、叶酸等成分[2-5]。健妇胶囊现行标准中酒当归含量测定方法操作繁杂，结果重现性差，提取效率低。为了更加有效地控制产品质量，确保疗效，本研究从化合物的性质和规律入手，对原提取方法进行改进，建立HPLC法测定健妇胶囊中阿魏酸的含量，为健妇胶囊质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SHIMADZU LC-20AT高效液相色谱仪(岛津公司)；Sartorius CP244S/CP225D电子天平(德国Sartorius公司)；Thermo Fisher D低温离心机(赛默飞世尔科技有限公司)；Elmasonic S 300H超声仪(德国Elma公司)；Milli-Q超纯水制备仪( 美国Millipore 公司) 。

1.2 试药 阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110773-201614，含量以99.0%计)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯；健妇胶囊(批号：130801、131001、131201、141101、141102、141103、160401、160402、160403)，缺当归阴性样品由实验室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 SHARPSIL -H C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-1%醋酸溶液(35∶65)，检测波长为322 nm，流速为0.8 mL·min-1，柱温为30 ℃，进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含阿魏酸20μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%碳酸钠溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率350 W，频率37kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用5%碳酸钠溶液补足减失的重量，摇匀，离心(转速为每分钟5000转)8 min，精密吸取上清液25 mL，用乙醚洗涤2次，每次25 mL，弃去乙醚液，水溶液用盐酸调节pH值至1～2，用乙醚振摇提取5次，每次25 mL，合并乙醚提取液，低温水浴挥干乙醚，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 取缺当归阴性对照样品，按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。

2.5 专属性试验 精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，分别按“2.1”项下条件测定，记录色谱图，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液显示对应的色谱峰，阴性对照溶液无对应色谱峰。结果表明，阴性溶液对检测结果无干扰。如图1所示。

2.6 线性关系考察 精密称取阿魏酸对照品0.01210 g(十万分之一天平称取)，加甲醇制成每1 mL中含阿魏酸19.1664 μg的对照品溶液，分别精密吸取1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，按“2.1”项下条件测定，以峰面积Y为纵坐标，对照品进样量X为横坐标，其回归方程为：Y=7.3E+6X-3773.0(r=1.0000)，阿魏酸在0.02～0.48 μg范围内，进样量与峰面积之间呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取浓度为19.1664 μg/mL的阿魏酸对照品溶液10 μL，按“2.1”项下条件连续进样6次，测得阿魏酸峰面积的RSD=0.1%，表明进样精密度良好。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于1、4、8、12、16、20、24 h精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测得样品中阿魏酸峰面积的RSD=0.2%。说明样品中阿魏酸在24 h内稳定。

2.9 重复性试验 取健妇胶囊样品(批号：160401)6份，每份约2 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，结果RSD为0.8%，表明分析方法重复性良好。

2.10 回收率试验 取已知阿魏酸含量的样品(批号：160401)6份，每份约1 g，精密称定，分别精密加入浓度为17.9685 μg/mL的对照品溶液5 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，平均回收率为91.3%，RSD为1.3%，表明该方法可行。结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.11 样品的含量测定 取健妇胶囊样品九批，按“2.3”项下方法制备，按“2.1”项下条件测定，计算阿魏酸的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择 取阿魏酸对照品溶液在210～400 nm波长范围内扫描，结果在波长为322 nm处有最大吸收，故以322 nm作为阿魏酸的检测波长。如图2所示。

3.2 提取溶剂的选择 阿魏酸化学名为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(Ferulic acid)，是一种芳香酸，在植物体内很少以游离态存在，主要与低聚糖、多胺、脂类和多糖形成结合态。根据阿魏酸的理化性质，采用碱解法可以水解出游离态的阿魏酸，故选取5%碳酸钠提取结合乙醚萃取以增加阿魏酸的提取率。取3批样品(批号：160403、160402、160401)，分别按原方法和新建立的方法对酒当归中的阿魏酸进行测定，结果表明，采用新建立的方法测定健妇胶囊中阿魏酸的含量结果约为按照原测定结果的3倍，可见原方法对样品中阿魏酸提取不完全，其原因是原方法标准采用乙醚作为提取溶剂，仅检测出游离态的阿魏酸，提取效率低。采用5%碳酸钠溶液提取，能水解结合态的阿魏酸，提取效率高，能更好地对健妇胶囊中的酒当归进行质量控制。见表3。

3.3 含酒当归中成药的质量控制 《中国药典》2015年版一部收载含酒当归的中成药品种中，有8个(小金丸/片/胶囊、中风回春丸/片、当归龙荟丸、固本益肠片、参茸白凤丸、参茸固本片、独活寄生丸、豨莶通栓丸/胶囊)均采用薄层色谱法对其中酒当归进行检测，其前处理方法中，中风回春丸/片采用加氨水提取，其他品种均采用直接用乙醚提取。鉴于薄层色谱鉴别不需进行回收率考察，故采用乙醚提取即可。据文献报道[6-10]，采用高效液相色谱法对中成药中酒当归进行阿魏酸含量测定，其前处理方法大多采用加碱溶液进行提取，以保证提取完全，回收率符合药典规定。因此，对于中成药中酒当归的质量控制，可视处方组成、处方量及制法采用适宜的检测方法，进而确定科学简捷的前处理方法。

表3 两种不同方法的样品测定结果

3.4 结论 酒当归能活血通经，当归经过酒炙，活血作用增强，是健妇胶囊处方中重要药味之一。健妇胶囊现行标准为进口药品注册标准JZ20020011，为2000年前研发，已不符合实际需要，因此，需要优化酒当归中阿魏酸的含量测定方法。本实验所建立的阿魏酸测定方法较原方法提取效率高了3倍，操作更加简便，准确，重复性好，可用于健妇胶囊中阿魏酸的含量测定，为中成药中酒当归的质量控制提供依据。