安康市生猪屠宰企业非洲猪瘟自检中存在的问题及应对措施

李 曼，陈少谋，魏小丽，邱孝萌

（1.安康市畜牧兽医中心，陕西 安康 725000；2.白河县畜牧兽医中心，陕西 安康 725800）

非洲猪瘟（African Swine Fever, ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus, ASFV）感染家猪和各种野猪（非洲野猪、欧洲野猪等）引起的一种急性、出血性、烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。2018年8月，辽宁省沈阳市确诊我国首例非洲猪瘟，至今全国所有省份都已出现非洲猪瘟疫情，对我国生猪产业带来重创。为降低非洲猪瘟扩散风险、切断病毒传播途径、有效防范非洲猪瘟，保障生猪产品的有效供给和质量安全，农业农村部要求自2019年7月1日起，各屠宰场须自行开展非洲猪瘟检测工作。从安康屠宰企业实施情况看，各屠宰企业均能够按照要求购买荧光定量PCR仪和诊断试剂，配备检测技术人员，能够按照“批批检、全覆盖”的要求开展非洲猪瘟自检，企业生物安全意识明显增强。但由于屠宰场实验室检测环境条件、仪器设备条件、实验室检测人员等各方面条件参差不齐，在检测过程中仍然发现一些问题。因此，规范开展非洲猪瘟荧光PCR检测，提高检测结果的准确性和可信度，是当前工作中面临的重要任务。

1 存在问题

1.1 样品采集方式

按照要求，屠宰企业应按照生猪不同来源实施分批屠宰，样品采集可在入场前也可在入场后，但应确保批批检，头头检。安康市各屠宰企业多选择入场后从血池或血液储存器具中采样，此种采样方法较进场前采样简便、易于操作，不需要投入过多人力，但却存在一旦检出阳性样品需停产消毒的风险。而且在实际操作中存在采集样品数量不均、混合不充分、无法控制混样比例的问题，影响检测的准确度，极易漏检。

1.2 混样比例问题

目前采用的荧光PCR方法的最低检出量一般在10个病毒拷贝左右，按照要求同一张检疫合格证需为同一来源，混样比例不要超过1∶50，混样比例越高，漏检风险越大。在实际操作中我们也发现由于样品采集过程中不能保证每份血清样品等量混合，从而导致部分血清超过规定稀释倍数，造成漏检。还有部分屠宰企业为了节约检测成本随意提高混样比例，极大地降低了检测的准确性。同时还存在部分待宰散户仅有十几只甚至几只生猪，按要求采样检测成本较高，散户难以承受等问题。

1.3 实验室环境简陋设施不完善

荧光PCR方法灵敏度高、特异性强，但对设施和环境要求也高，一般的PCR检测室设置为配液、核酸提取、扩增3个功能室，且需有缓冲间物理屏障、空气流向等要求以防止核酸污染。目前，安康市大部分屠宰企业没有进行合理分区，甚至整个检测过程混在一个区域进行，极易造成实验室核酸污染。此外，实验室恒温设备、超净工作台、生物安全柜、高压灭菌器等设备不全，甚至有些实验室连基本的个人防护工具也没有配备，既不能保障样品及人员安全，也无法保障环境安全。

1.4 仪器设备和检测试剂质量参差不齐

目前市售的荧光PCR仪价格从几万到几十万元不等，检测通道有2、3、4通道，种类五花八门。检测试剂厂家繁多，质量和灵敏度参差不齐。屠宰企业在选购荧光PCR仪和检测试剂时更多的是考虑降低成本，而忽略了检测精度和使用有效期等问题。有些仪器公司买仪器送试剂，但仪器只能使用配备的专用试剂，常常遇到检测精度不足、通量不够等问题。部分企业购买的检测试剂中还存在试剂量不足、试剂保质期临期甚至过期等问题。

1.5 检测人员专业水平有待提升

检测人员是确保检测结果准确的最核心要素。对安康市开展的屠宰企业非洲猪瘟检测比对结果进行分析发现，即使是相同的仪器设备、相同的试剂耗材，相同的检测样品，检测结果却差异显著。很多屠宰企业配备了专职检验员，经过专业培训后检测准确率较高，而个别屠宰企业临时抱佛脚，仅仅经过仪器设备厂家的简单培训就上岗，操作不规范，检测结果差异性大。

2 应对措施

2.1 做好样品采集和试剂管控

在样品采样过程中要避免交叉污染，保证采样的均一性，不要超比例混样。检测样品可以根据不同的对象和要求进行混样检测。样本送达实验室后要及时进行分离和制备，尽快进行检测，如不能马上进行检测要放置于-20 ℃保存。采购的非洲猪瘟病毒诊断用品应当取得农业农村部核发的产品批准文号，要严格按试剂盒的要求妥善保存试剂，避免使用伪劣、过期或失效试剂。

2.2 完善实验室基础设施

非洲猪瘟检测实验室应进行分区，合理划分配液、核酸提取、扩增3个独立工作区域，从而形成单向流程的保护屏障，避免试验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对试验过程造成污染。实验室必须配备荧光PCR仪、低温离心机、核酸提取仪、生物安全柜、冰箱、移液器等主要仪器设备，并严格按照操作规程进行维护，保证其在规定参数内正常运行。

2.3 强化人员培训，实行专人专岗

兽医实验室必须配备具有畜牧兽医专业相关学历的专职检测人员，经专业的检测技术、生物安全培训，获得上岗资格后方可开展荧光PCR检测工作。同时要制定并执行定期考核和培训制度，定期参加实验室培训，以提升检测人员的检测技能。

2.4 有效规范开展检测工作

采用农业农村部批准的非洲猪瘟病毒诊断制品进行检测，不同厂家试剂盒其检测方法略有不同，应严格按说明书的要求操作。用于非洲猪瘟检测的样品，应根据不同的要求做好留样。检测结果为疑似阳性的样品应进行复检，复检后仍为疑似或阳性的样品应及时报告当地畜牧兽医主管部门或动物疫病预防控制机构。如果需要留样的，应单独保存，并在样品复核和送检完成后对样品及时进行无害化处理。荧光PCR试验完毕后，为避免病毒通过污染的用具、废弃的物品进行传播，要做好人员和物品进出的管控，检测接触的器械及时消毒，检测后的废弃物及时进行无害化处理。

生猪屠宰企业非洲猪瘟自检对于切断非洲猪瘟传播途径、降低流通环节传播风险意义重大。目前来看安康市屠宰企业自检在实验室配备、检测人员、试剂及耗材、规范操作等方面上还有待进一步的改善和提高，屠宰企业应该充分认识，及早完善实验室建设，建立相关管理体系，确保非洲猪瘟检测工作顺利准确进行。