湖北贝母石油醚段化学成分研究

李宇 彭湘敏 张娜 刘丹 冉亚兰 赵仁君 何美军

摘 要：探究湖北贝母石油醚段的化学成分。本文将湖北贝母经60%乙醇超声提取获得总浸膏，再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明，石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2个化合物，利用1D和2D NMR波谱数据分析，鉴定其结构分别为beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。该研究可为湖北贝母药材的开发利用、临床使用提供理论依据。

关键词：湖北贝母;抗菌活性;石油醚段;化合物

中图分类号：S-3

文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20201115002

收稿日期：2020-09-22

基金项目：湖北省农业科学院中药材研究所2019年青年科学基金项目（项目编号：2019ZYCJJ05）

作者简介：李宇（1990-），男，硕士，助理研究员。研究方向：中药材天然产物;通讯作者何美军，副研究员。研究方向：中药材天然产物。

湖北贝母为百合科植物湖北贝母（Fritillariahupehensis Hsiao et K.C.Hsia）的干燥鳞茎，原野生于湖北省恩施自治州，俗称“板贝”或“窑贝”，民间习作川贝药用，使用历史悠久[1]。湖北贝母在主产地恩施自治州利川市和恩施市至少有150a以上的种植历史，以前又称板贝、窖贝、奉贝，临床上一直作川贝使用[2]。中药贝母始载于《神农本草经》，是中医临床应用最为广泛的止咳祛痰药之一[3]。湖北贝母具有清热化痰、止咳、散结的功效，传统用于治疗热痰咳嗽、瘰疬痰核、痈肿疮毒[4]。现代药理实验表明，湖北贝母具有镇咳平喘[5]、抗炎[6]、抗癌[7]、抗肿瘤[8]等作用。贝母中的活性成分主要有生物碱、挥发油等，目前，絕大多数文献是对贝母生物碱化学成分及药理作用等方面，其它成分的相关研究比较少见[9]。

湖北贝母是湖北恩施重要的药材之一，因此研究湖北贝母石油醚段化学成分以及其含量具有重要意义。该研究可为湖北贝母药材的开发利用、临床使用提供理论依据，也为湖北贝母向外更好发展打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

J&K色谱纯乙腈。本研究所用湖北贝母样品采集于湖北省恩施市的人工种植品，经湖北省农业科学院中药材研究所由金文高级农艺师鉴定为湖北贝母鳞茎。

1.2 仪器与设备

Bruker maXis高分辨飞行时间质谱仪;Aglient Technologies 7890A/5975C GC-MS联用仪;Agilent 1260高效液相色谱仪（配DAD检测器）;Phenomenex色谱柱（50mm×4.6mm， ODS 5μm）;Agilent Poroshell反相色谱柱120 EC-C18（4.6mm×150mm，4μm）;HS-GF254硅胶薄层板。

1.3 方法

将干燥的湖北贝母鳞茎20kg，粉碎，过40目筛，共用40L的60%的乙醇萃取，采用60%乙醇100L冷浸提取96h，过滤，减压浓缩回收乙醇，得到浸膏800.27g。再加3倍体积的石油醚萃取3次，合并石油醚相，减压回收石油醚，得到贝母石油醚段浸膏80.2g。

贝母石油醚段浸膏采用硅藻土拌样，硅胶柱层析（Φ10cm×50cm）分离，以石油醚/乙酸乙酯体系（100：0、80：20、50：50、20：80、0：100，V/V）洗脱，得到8个组分Fr.A1～Fr.A8。根据HPLC和TLC分析结果，将Fr.A4～Fr.A6合并正向硅胶分离，以石油醚/氯仿体系（100：0、98：2、96：4、94：6、92：8、90：10、80：20，V/V））洗脱，得到10个组分Fr.B1～Fr.B10。根据HPLC分析，经半制备HPLC、ODS色谱柱（250mm×10mm，5μm），组分Fr.B6～Fr.B7合并，经半制备HPLC、ODS色谱柱分离，以CH3CN/H2O（85：15，V/V）体系洗脱30min，流速为2.5mL·min-1，得到化合物2（tR24.5min，10mg）。组分Fr.B8走凝胶柱，以乙腈洗脱，得到化合物1。

2 结果与分析

2.1 湖北贝母石油醚段化合物分离鉴定

2.1.1 化合物1

为白色无定型晶体，化合物1在UV（190～450nm）及可见光波段无吸收。1H NMR谱表明该化合物存在共轭双键质子（δH5.32）。通过HRMS-ESI质谱检测，其[M+K]+=453.3560，推测其分子式为C29H50O。1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.32（1H，d，J=5.0Hz，H-5）3.50（1H，ddd，J=15.4，10.6，4.4Hz，H-3），1.02（3H，dd，J=18.9，9.7Hz，H-19），0.94-0.85（12H，m，H-19/26/27/29）;13C NMR（CDCl3，101 MHz）δ140.8（C-5），121.7（C-6），71.8（C-3），56.8（C-14），56.1（C-17），50.1（C-9），45.8（C-24），42.3（C-4），42.3（C-13），39.8（C-12），37.3（C-1），36.5（C-10），36.2（C-20），34.0（C-22），31.9（C-7），31.7（C-8），29.2（C-25），28.3（C-16），26.1（C-23），24.3（C-15），23.1（C-28），21.1（C-26），19.8（C-19），19.4（C-27），19.1（C-21），12.0（C-29），11.9（C-18）。化合物1的1H和13C NMR化学位移值与文献报道的beta-Sitosterol的核磁数据基本一致，推断该化合物为beta-Sitosterol[10]。

2.1.2 化合物2

为白色无定型晶体，化合物2的UV吸收光谱在340nm波长处显示有最大吸收波长。高分辨质谱HRMS-ESI[2 M-H]-为441.1559，推测分子式为C12H14O4。HNMR（400MHz MeOD）7.59（1H，d，J=15.9Hz，H-8），7.16（1H，s，H-7），7.05（1H，d，J=7.1Hz，H-5），6.79（d，J=7.8Hz，1H，H-6），6.32（d，J=15.8Hz，1H，H-9），4.22（2H，dd，J=14.1，7.0Hz，H-10），3.88（s，3H，H-1），3.31（s，1H，），1.31（t，J=7.1Hz，4H，H-12）;13C NMR（101MHz，MeOD）δC：168.01（C-10），150.19（C-2），148.24（C-3），145.37（C-8），122.85（C-5），115.28（C-4），113.81（C-7），110.18（C-9），60.01（C-11），55.01（C-1），13.26（C-12）。化合物2的1H和13C NMR化学位移值与文献报道的ethyl ferulate核磁数据基本一致，推断该化合物为ethyl ferulate[11]。

3 结论

由于湖北贝母石油醚段有抗菌活性，本研究进而对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索，石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2种化合物，利用1D和2D NMR波谱数据分析，鉴定其结构分别为beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。beta-Sitosterol是植物甾醇类成分之一，存在于某些植物或种子中，具有降血脂、抗癌、抗炎症等作用，可作为苦檀子质量控制的指标[12]。β-谷甾醇-硬脂酸油脂凝胶和凝胶乳液对β-胡萝卜素具有增强缓释效应[13]。beta-Sitosterol可保护大鼠心肌缺血再灌注损伤，可能参与ERK1/2信号通路，缓解心肌缺血再灌注大鼠出现的氧化应激和炎症损伤，并抑制其心肌细胞的凋亡[14]。ethyl ferulate能有效抑制SGC-7901细胞增殖，并能诱导SGC-7901细胞凋亡[15]。近年来，ethyl ferulate逐渐进入人们的视野，以其为主要物质的医疗药物、功能性食品等如雨后春笋般诞生，其良好的清除自由基、抗菌消除炎症、预防肿瘤、降血脂等特性深受人们喜爱和关注，因而使其具有了良好的开发和应用前景[16]。

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（责任编辑 李媛媛）