TOC法在体外诊断试剂清洁验证实施中的要点

王赛楠

（北京北方生物技术研究所有限公司，北京 100076）

《药品生产质量管理规范》已经于2011年3月1日实施，GMP第七章 第一百四十三条规定：制药企业的生产设备应制定详细的使用和清洁操作规程，清洁操作规程应当规定具体而完整的清洁方法、清洁用设备或工具、清洁剂的名称和配制方法。清洁方法应当经过验证，证实其清洁效果，以有效防止污染和交叉污染。清洁验证应当综合考虑设备使用情况，所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置，残留物的性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素[1]。

体外诊断试剂现有的清洁验证方法，大多采用化药的清洁验证模式，既将抗原或抗体作为目标残留物。但是体外诊断试剂的基质多数为小牛血清或含有牛血清白蛋白的缓冲液，这两种基质成分具有多样性、未知性，而且抗原抗体的成分含量低等特点，只单一的测定抗原抗体的残留量并不能体现出清洁的程度。现有的体外诊断试剂清洁验证目前主要存在两大问题:第一，只检测残留物中的抗原抗体等含量，该方法只能证明检测成分清洁程度，不能证明设备上未知成分的清洁程度；第二，现有的检测方法达不到所需的精度要求，误差较大。考虑到体外诊断试剂主要成分都是有机物，因此将标准品冻干粉末做为活性成分，采用TOC法完成清洁验证。

1 “C”碳含量的测定

在我单位某产品中，其主要成分为抗原，牛血清白蛋白，以及无机盐等，我们无法根据分子式计算出其中”C”碳含量的百分比。通过查询资料，发现目标物的浓度和TOC值之间的关系，公式为:A = (XTOC － 4σ)/C。式中，A 代表目标物质碳百分含量;XTOC 为 TOC 结果平均值;σ 标准偏差;为保证清洁验证结果可靠，选取较为严格的 4σ 下线区间进行计算;C 为目标物质浓度。[2]通过测量多份产品的TOC值，可以根据上面的公式计算出其中碳含量。

2 确定残留物的可接受标准

在验证清洗过程时，要核实确保对冲洗水中的残留物或污染物进行直接测量。只是简单检测冲洗水的质量而不检测潜在的污染物的做法是不被认可的[3]。

（一）目前制药业普遍接受的限度标准[4]：①微粒浓度：以目检为依据的限度，如不得有可见的残留物。（4 ug/ cm2的结果是可接受的）；②分析检测浓度：10ppm (1/1000 000) ；③生物活性的限度：正常治疗剂量的1/1000。

（二）因体外诊断试剂不会进入人体内，所以确定可接受标准为10ppm，既待清除产品（X）在后续产品中（Y）出现不超过 10mg·kg-1。假设，我们下一批产品为Y，产量为4kg，则在下一批产品中的X的含量不能超过40mg。采取棉签擦拭法取样，残留限度（C）=总残留/总接触面积，单位为(mg/100cm2)。每100cm2的面积上残留物用VL纯化水溶解，得到最低残留限度D=C/V。

（三）根据目标物质碳百分含量，即可得到清洁验证TOC 限度值E（mg/L）= D*A 。式中:E代表清洁验证 TOC限度值；A 代表目标物质碳百分含量。

3 棉签擦拭法回收率的计算

操作方法：将已知浓度的残留物溶液以受控的方式涂布在材质试样上，自然晾干，采用清洁验证方案中的相同的擦拭方法进行取样。选用合适的溶剂提取拭子上的残留，然后检测提取液中残留物的数量。回收量与材质试样上的加入量之比就是取样百分回收率。

实施次数：至少需要两个人进行，每人需要重复三次。

结果：任意一个擦拭取样人员的最低平均回收率最为棉签擦拭法的回收率。

可接受标准：回收率≥50%，重现性RSD≤20%。

因为 TOC法属于非专属性检测法，通过检测水中有机碳的含量来推测水中有机物杂质的含量，这种方法被广泛应用于清洁验证中，而且 TOC 检测方法具有省时，省力，节能减排的优势。它表征所有有机物的污染程度，为清洁验证提供了有力的安全性和可靠性保障。