规模化猪场猪圆环病毒2型感染的实验室诊断

徐春志 ，蔺俐仲 ，邓珊珊 ，张 海 ，景书灏 ，杨 源 ，刘 艳 ，袁 林 ，袁 标

（1. 贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550081；2. 贵阳市草地站，贵州 贵阳 550081；3. 清镇市农业农村局，贵州 贵阳 551400；4. 息烽县农业农村局，贵州 贵阳 550300）

猪圆环病毒（PCV）属圆环病毒科圆环病毒属，为无囊膜单股环状负链DNA病毒[1]，分为PCV1、PCV2和PCV3共3个血清型[2]。PCV1对猪只无致病性。PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，表现为断奶后仔猪，特别是6～8周龄仔猪，以发热、精神不振、被毛粗乱、消瘦、皮肤苍白、咳嗽、呼吸困难为常见症状。PCV3是一种从猪体内鉴定的新亚型，其临床症状和致病机制尚不明确[3]。猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪以繁殖障碍为主的动物传染病，也被称为“猪蓝耳病”。伪狂犬病（PR）是由伪狂犬病病毒（PRV）引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病。

试验通过采用ELISA方法对贵州省某规模化猪场送检的怀孕母猪、产房母猪、后备母猪、种公猪、哺乳仔猪、保育仔猪6个猪群90份血清样本进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒gB蛋白、伪狂犬病病毒gE蛋白血清抗体检测；采用荧光PCR方法对送检的90份血清样本和1份猪淋巴结组织进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型核酸检测。旨在确诊该规模化猪场保育仔猪异常死亡原因，以期为该猪场防控策略的制定提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 检测样本

采集某规模化猪场猪血清样本90份（其中：怀孕母猪20份、产房母猪10份、后备母猪17份、种公猪3份、哺乳仔猪20份、保育仔猪20份），病死猪淋巴结组织样本1份。经调查，该猪场分别免疫过猪口蹄疫O型灭活疫苗、高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗、猪瘟传代细胞苗和猪伪狂犬病gE基因缺失苗。具体免疫程序如下：FMD（每4个月免疫1次）；CSF（种公猪每年春、秋各免疫1次；种母猪配种前10 d免疫1次，产后10 d加强免疫1次，以后每次免疫应于产后进行，妊娠期不再免疫）；PRRS（种公猪每年春、秋各免疫1次；后备种猪配种前5～6周和2～3周各免疫1次；生产母猪配种前12 d免疫1次，以后每5个月免疫1次）和PR（种公猪每年春、秋各免疫1次；后备种猪配种前7 d免疫1次，以后每隔4个月免疫1次）。

1.2 检测试剂盒

猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒gB蛋白、猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒以及猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型荧光PCR检测试剂盒均购自无锡优联生物技术有限公司。

1.3 检测方法及结果判定

采用ELISA抗体检测试剂盒对采集的90份血清样本分别进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒gB蛋白和猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体检测；对送检的血清样本和病死猪淋巴结样本采用猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型荧光PCR检测试剂盒分别进行检测。检测方法和检测结果判定参照试剂盒说明书进行。

2 结果与分析

2.1 不同猪群猪瘟抗体检测结果

不同猪群采集的90份血清样本经猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行检测，结果见表1。

由表1可知，怀孕母猪、产房母猪、后备母猪、种公猪、哺乳仔猪、保育仔猪6个猪群猪瘟抗体平均阳性率为87.78%，其中，怀孕母猪、产房母猪、哺乳仔猪群的抗体阳性率均为100%，种公猪和保育仔猪群抗体阳性率均低于农业农村部要求的大于70%标准。

2.2 不同猪群猪蓝耳病抗体检测结果

不同猪群采集的90份血清样本经猪蓝耳病病毒ELISA抗体检测试剂盒进行检测，结果见表2。

由表2可知，怀孕母猪、产房母猪、后备母猪、种公猪、哺乳仔猪、保育仔猪6个猪群猪蓝耳病抗体平均阳性率为70.00%，其中，怀孕母猪、产房母猪群抗体阳性率均为100%，种公猪、哺乳仔猪和保育仔猪群抗体阳性率均低于农业农村部要求的大于70%标准。

2.3 不同猪群猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体检测结果

不同猪群采集的90份血清样本经猪伪狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗体检测试剂盒进行检测，结果见表3。

由表3可知，怀孕母猪、产房母猪、后备母猪、种公猪群的猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体阳性率均为100%，所有猪群的抗体阳性率均达到农业农村部要求的大于70%标准。

2.4 不同猪群猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体检测结果

不同猪群采集的90份血清样本经猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒进行检测，结果见表4。

由表4可知，6个猪群中怀孕母猪群检测出4份猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体阳性样本，阳性率为20.00%（4/20），其余猪群未检测出阳性。由于该猪场疫苗免疫使用的为猪伪狂犬病gE基因缺失苗，提示怀孕母猪群可能存在伪狂犬病野毒感染。

2.5 病毒核酸检测结果

对送检的90份血清样本和1份淋巴结组织采用荧光PCR检测方法分别进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型核酸检测，结果显示：猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒和伪狂犬病病毒核酸检测均为阴性，猪圆环病毒2型核酸检测淋巴结组织显示阳性，说明该猪场存在猪圆环病毒2型感染，结果见图1。

3 讨论

1）近年来，随着集约化养殖的不断扩大，以PCV2为主的PCV感染已成为我国猪群的一种常见多发性疫病。自1991年PCV2在加拿大北部被发现以来[4]，世界各地相继报道了PCV2的存在，我国大陆地区在2000年首次报道[5]。吴瑗等[6]对浙江省及周边地区2007—2012年PCV2的感染情况进行检测，总阳性率为41.4%；李玲等[7]报道2008—2011年中国部分地区PCV2的感染率高达78.3%；廖启顺等[8]报道2009—2011年云南部分猪场PCV2的感染率为91.3%；邵萌等[9]报道2010—2012年陕西地区PCV2的阳性率为82.9%；邓静等[10]报道2010—2013年四川地区PCV2的阳性率为70.7%；蒋新华等研究人员[11]报道2013—2017年江西省10个地区的1 082份疑似病料进行的PCV2病原学检测，总体阳性率为56.4%。上述研究表明，我国猪群的PCV2阳性率处于较高的趋势，已成为威胁猪场生物安全的主要病原之一。

表1 不同猪群猪瘟病毒ELISA抗体检测结果

表2 不同猪群猪蓝耳病病毒ELISA抗体检测结果

表3 不同猪群猪伪狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗体检测结果

表4 不同猪群猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测结果

2）此次试验对贵州省某规模化猪场6个猪群分别进行了猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒gB蛋白免疫抗体和伪狂犬病病毒gE蛋白感染抗体调查，结果发现猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒gB蛋白免疫抗体总体阳性率分别为87.78%、70.00%和88.89%，伪狂犬病病毒gE蛋白感染抗体阳性率为4.44%；对90份血清样本和1份病死保育仔猪淋巴结组织进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型核酸检测，结果显示淋巴结组织猪圆环病毒2型核酸阳性。试验结果表明，引起该养猪场保育仔猪死亡的原因为猪圆环病毒2型感染。虽然该猪场6个猪群猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒和伪狂犬病病毒gB蛋白免疫抗体总体阳性率达到了农业农村部要求的大于70%标准，但是仍然有部分猪群的免疫抗体阳性率低于农业农村部要求，如种公猪和保育仔猪群的猪瘟病毒抗体阳性率分别为66.67%和60.00%；种公猪、哺乳仔猪和保育仔猪群猪蓝耳病病毒抗体阳性率分别为66.67%、35.00%和40.00%。怀孕母猪群出现了伪狂犬病病毒gE蛋白抗体阳性，提示该猪群可能存在伪狂犬病毒野毒感染。

3）猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型对养猪业的影响非常大，尤其是在生猪养殖高度密集的规模化猪场，猪只一旦发病后果极为严重。目前市面上均有商品化疫苗，养殖场要选择与该地区流行的毒株核酸同源性较高的疫苗进行免疫，以避免疫苗免疫效果不好或免疫失败。同时要根据实际情况，制定适合自身的免疫程序，做好免疫抗体监测，加强免疫抗体评估；对免疫抗体不合格的要及时分析原因进行补免；对异常死亡的猪只要进行实验室检测分析，并严格落实消毒和无害化处理措施。养殖场应重视猪场生物安全防护措施，严格执行生物安全规程，对于有条件的种场建议及时开展动物疫病净化工作。