芽孢杆菌制剂对鸡肠道肠球菌的影响和评价

陈 彬，郝思军，朱 超

（1.宝应县畜牧兽医站，江苏 扬州 225800；2.宝应县曹甸镇农业技术推广服务中心，江苏 扬州 225803）

本次实验选取日龄相同，体重大小相近的新扬州鸡（公鸡）共21只，按体重配对随机分为3组，一组对照组，一组实验1组，一组实验2组，每组7只即每组7个重复，采用改进的强饲法来研究基础日粮中添加一种新开发的活菌制剂（芽孢杆菌制剂）对鸡盲肠、直肠的影响。通过实验结果表明，在日粮中添加0.4%的该活菌制剂可以显著促进某些肠球菌的生长。

1 活菌制剂的微生物种类及主要特性

选作活菌制剂的微生物种类主要有酵母类微生物、乳酸杆菌属、芽孢杆菌属等，这些主要从土壤、发酵食品、腌制品、动物消化道、动物粪便的无毒菌株中提取。目前，首选的是乳酸菌，芽孢杆菌次之。

乳酸杆菌属为厌氧或兼性厌氧菌，主要分泌乳酸及短链脂肪酸，能降低肠道中的pH值，抑制有害菌的生长。但是，该类菌较不稳定，不能耐受饲料加工和长期存放；酵母类是饲料中应用最早、最广泛的饲用微生物，主要是为动物提供蛋白质，帮助消化，提高机体的代谢力；芽孢杆菌属的菌为需氧菌，它在无氧条件下不繁殖，它通过竞争夺氧来抑制有害菌和外来菌的生长、繁殖，从而维持动物消化道的微生态平衡等。因此，近年来对芽孢杆菌属的制剂研究增多。

1.1 芽孢杆菌的特点

芽孢杆菌是目前常用的一类活菌制剂，作为微生态制剂，有人称其为超乳酸菌。芽孢杆菌是一类好氧或兼性需氧生长、可形成芽孢的革兰氏阳性菌，在制剂中以内生孢子形式存在。在制备过程中，其孢子具有耐高温、耐酸碱、耐挤压的特性，且在饲料加工制备过程中损伤性小。芽孢杆菌对外界环境的抵抗力比较强，可耐高温在60℃以上，在常温情况下可以保存一年以上，易培养和加工成各种制剂，而且效果相对稳定。芽孢杆菌制剂作为活菌制剂，芽孢孢子进入动物的肠道后，在动物肠道上部休眠的孢子将迅速复活发芽、生长成为有新陈代谢作用的营养型细胞，分泌活性很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，利于降解饲料中某些复杂化合物，饲料的利用率也能够得到有效提升；还可以产生具有拮抗肠道致病菌的多肽类物质，同时通过生物夺氧消耗肠道内的氧气，形成厌氧环境。肠道原籍优势菌多属于厌氧菌，而消化道中的有害菌多为需氧菌，使用芽孢杆菌可以维持肠道的生态平衡。

1.2 肠球菌临床的重要性

肠球菌在自然界中的分布比较广泛，也是人和畜禽动物胃肠道的正常菌群之一。在临床实践中发现，粪肠球菌约占80%～90%，屎肠球菌约占5%～15%，鹑鸡肠球菌、铅黄肠球菌、坚忍肠球菌、鸟肠球菌和棉子糖肠球菌约占5%以下。近年来，一些少见的菌种所致的感染时有报道，如盲肠肠球菌腹膜炎、胆囊炎、脑膜炎、心内膜炎、尿路感染及肾盂肾炎等多种感染。出现这些情况的主要原因是肠球菌对现有的一些抗生素耐药性在逐年增加，甚至出现了万古霉素耐药肠球菌的相关案例，张正等对两年间分离于院内感染标本的553株肠球菌进行了耐药分析，其中91.9%的为粪肠球菌，对万古霉素的耐药率分别为2.95%、对替考拉宁的耐药率分别为0.83%，其中VanA6株、VanB9株、VanC3株有VRE的出现，导致很难控制该菌在患者之间的传播。感染控制措施要依靠隔离和控制VRE定植或感染的病人。尽管VRE定植的方式尚不清楚，但采取有效的方法快速鉴定病人定植或感染VRE是非常必要的[1]。

本次试验采用选择性培养基对鸡体内肠球菌在盲肠、直肠的分布进行了测定，为以后微生态制剂研究在肠段选择，菌种选择方面做基础，为微生态制剂的研发工作提供参考和帮助。

2 试验及分析

2.1 材料与方法

2.1.1 实验动物：选购扬大农牧场内120日龄种公鸡21只，均临床健康。

2.1.2 实验制剂：活菌制剂（由张艳云老师提供）；鸡场自配基础日粮；肠球菌从鸡肠道分离。

2.1.3 培养基：肠球菌培养基（叠氮钠--结晶紫--七叶苷琼脂）：用于选择培养肠球菌；购于北京陆桥技术有限责任公司。

2.1.4 实验仪器：电热恒温培养箱；电热鼓风干燥箱；高压灭菌锅；微净化操作台；推棒；酒精灯；三角烧瓶；试管；恒温水浴震荡器。

2.2 方法

2.2.1 实验分组：将21只鸡分为3组，每组为7只。实验1组中的7只鸡，在饲喂的食料中添加了0.2%微生态活菌制剂；实验2组中的7只鸡，在饲喂的食料中添加了0.4%微生态活菌制剂；实验3组中的7只鸡，饲喂基础的日粮作为对照组。

2.2.2 实验鸡准备：预试期：将3组鸡在同一环境条件下饲喂基础日粮，每日观察鸡群的精神状态、采食及排便情况，进行饲喂一周以后，21只鸡的健康状况均良好。正试期：3组鸡分开饲喂，每天喂给实验组1的鸡150g拌有活菌制剂0.2%的饲料；每天喂给实验组2的鸡150g拌有活菌制剂0.4%的饲料；喂给对照组鸡150g基础日粮，3组鸡均在同一环境条件下饲喂。

2.2.3 取材与处理：选好试验用的鸡后送到实验室进行剖杀，先用75%的酒精对皮毛消毒后再进行无菌手术。将盲肠和直肠取出后，段成小段后放入灭菌平皿中，取3g内容物放在灭菌三角烧瓶内，加入27ml生理盐水稀释液在37℃恒温水浴震荡器中，振荡30分钟以后形成均匀的悬浊液，再以10倍稀释法依次稀释为10-1、10-2……10-9。

2.2.4 接种与培养：取稀释好的肠内容物100ul，分别从低稀释度至高稀释度接种，每个稀释度接种3个平皿，要快速准确的完成操作步骤，操作完成后立即将肠球菌放在37℃恒温培养箱中，培养时间为24h。

2.2.5 计数及数据统计：采用活菌计数法，每克粪便中的活菌数对数值log10nCFU/g=log（稀释倍数×3个平皿菌落均值）。所以数据均采用Excel统计工具进行统计分析，显著性检验采用SPSS法进行检验。

2.3 结果与分析

微生态制剂饲喂实验结果见表1（单位：logCFU/g）

3 讨论

乳酸菌作为健康的肠道细菌之一，对人体是安全的。由于乳酸菌大量定植在肠道中，会影响到肠道的消化吸收及其他功能。由于现在对广谱抗生素、免疫抑制剂等的使用较多，以及艾滋病、肝炎、肿瘤等疾病的出现导致机体免疫力下降，造成受感染几率增加。

肠球菌属自1984年独立新属来至今已有19个菌种，其中粪肠球菌更易成为条件致病菌。肠球菌是重要的乳酸产生菌，能调节脂代谢，具有微生态学的意义，已经应用于保健品及临床如一些酸奶、饮料、药品等。屎肠球菌与不溶血肠球菌可能更适合作为微生态调节剂。

随着我国畜禽业的不断发展，对畜禽健康生长的产品研究探寻也在进行中。中国加入WTO后，绿色健康的农产品面临着一定的压力，越来越多的学者提倡对微生态制剂的开发和应用。根据微生态学原理，采用微生态制剂和微生态工程技术能够重建畜禽肠道的正常微生物菌群，预防和治疗畜禽养殖过程中出现的肠胃疾病问题，减少使用抗生素，提升饲料转化率，减少畜禽养殖的生产成本。而且，在畜禽饲养中使用微生态制剂可确保畜禽产品无毒、无害、无残留和无污染。同时，能够减少畜禽粪便产生的气味，从而保护环境，可见微生态制剂的开发和研究的前景广阔。